ELISA法檢測乙肝標志物的效果分析

摘要：目的 探討酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)（ELISA）檢測乙肝標志物的效果。方法 本研究對目前正在銷售的3個品牌的ELISA試劑盒對比分析，并將其檢測結(jié)果與金標法的檢測結(jié)果進行一致性分析。結(jié)果 對比3個不同廠家試劑盒乙肝病毒感染檢測陽性率可以發(fā)現(xiàn)，江萊、萬泰、新創(chuàng)等3個不同地區(qū)廠家的試劑盒乙肝病毒感染檢測陽性率有明顯差別（F=4.21，P<0.05）。結(jié)論 ELISA法檢測診斷試劑有較好的檢測性能，但是不同廠家ELISA 試劑盒檢測結(jié)果存在差異，在實際臨床檢測時需要綜合多家試劑盒進行驗證選擇。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)；乙肝；標志物

為了選擇靈敏度高、特異性好的乙肝標志物ELISA檢測試劑盒，本研究對目前正在銷售的3個品牌的ELISA試劑盒對比分析，并將其檢測結(jié)果與金標法的檢測結(jié)果進行一致性分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究收集于2013年2月～10月在我院門診接受抽取早晨空腹肘靜脈血者112例，所有樣本經(jīng)離心待檢測；年齡21～51歲，平均（31.47±10.28）歲。

1.2方法

1.2.1試劑盒 人乙肝表面抗ELISA 檢測試劑盒分別購自上海江萊生物科技有限公司（簡稱江萊），北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司（簡稱萬泰）、英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司（簡稱新創(chuàng)）。

1.2.2檢測方法 受檢者空腹抽血3mL，可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30min內(nèi)于2℃～8℃，1000g離心15min，或?qū)吮痉庞?20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融[1]。操作步驟：①使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。②根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。③加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50μl于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50μl的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1h[2]。④甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加1次。⑤每孔加入80μl的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30min。⑥甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加1次。⑦每孔加入底物A、B各50μl，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10min。避免光照。⑧取出酶標板，迅速加入50μl終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450nm波長處測定各孔的OD值。測定孔OD 值/陰性對照孔OD 值（S/N）大于2.1 判為陽性。比較3個不同公司ELISA 檢測與膠體金法檢測的一致性。

1.3 數(shù)據(jù)處理 所有統(tǒng)計均在Windows SPSS17.0中完成，采用方差分析。檢驗水平α=0.05。

2 結(jié)果

對比3個不同廠家試劑盒乙肝病毒感染檢測陽性率可以發(fā)現(xiàn)，江萊、萬泰、新創(chuàng)等3個不同地區(qū)廠家的試劑盒乙肝病毒感染檢測陽性率有明顯差別（F =4.21，P<0.05），見表1。3個不同廠家試劑盒乙肝病毒感染檢測陽性血清經(jīng)金標試紙檢測后陽性結(jié)果分別為12、10、14例。

3 討論

酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)（ELISA） 將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 （ 聚苯乙烯微量反應(yīng)板） 表面，以免疫過氧化物E技術(shù)為基礎(chǔ)的酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)，其敏感性高，特異性強，操作簡便，易于觀察，便于大規(guī)模檢查[3]。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。由于其自身方法學上的限制，檢測結(jié)果易受其它血清物質(zhì)變化及實驗室因素的干擾[4]。其檢測結(jié)果常作為臨床診斷和治療乙肝的依據(jù)之一（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc，即兩對半）[5]。為了選擇靈敏度高、特異性好的乙肝標志物ELISA檢測試劑盒，本研究對目前正在銷售的3個品牌的ELISA試劑盒對比分析，并將其檢測結(jié)果與金標法的檢測結(jié)果進行一致性分析，研究結(jié)果說明ELISA法檢測診斷試劑有較好的檢測性能，但是不同廠家ELISA 試劑盒檢測結(jié)果存在差異，在實際臨床檢測時需要綜合多家試劑盒進行驗證選擇。

參考文獻：

[1]張晶，倪洪波，劉玉華.ELISA法檢測乙肝標志物出現(xiàn)錯誤結(jié)果的分析及應(yīng)對[J].中國民康醫(yī)學，2010，22（12）：1618-1619.

[2]王璐.ELISA法檢驗乙肝標志物影響因素的探討[J].醫(yī)學理論與實踐，2012，25（4）：451-452.

[3]郭盼.ELISA法檢驗乙肝標志物影響因素分析[J].中國傷殘醫(yī)學，2013，21（8）：79-80.

[4]祝繼華，嚴立，陳瀑，等.ELISA法在檢測乙肝標志物中的應(yīng)用和評價[J].重慶醫(yī)科大學學報，2009，34（10）：1397-1399.

[5]謝文衛(wèi).酶聯(lián)免疫吸附試驗在測定乙肝標志物的因素分析[J].醫(yī)學信息，2011，24（9）：5670-5671.編輯/劉小燕