兒童呼吸道非典型病原體檢測方法及評價

摘要：目的 運用多種檢測方法對兒童患者常見呼吸道非典型病原體進行檢測與分析，為提高臨床兒童呼吸道感染患者預后，提供相關疾病病因診斷依據(jù)。方法 應用間接免疫熒光法（IFA法）以及聚合酶鏈式反應（PCR法）對兒童常見9種呼吸道病原體的IgM抗體，同時應用膠體金免疫層析法（GICA法）對流感病毒抗原、快速培養(yǎng)法對肺炎支原體（MP）進行檢測，并分析比較檢測結(jié)果。結(jié)果 448例樣本中，9種IgM抗體共檢測出89例，陽性率達19.9%。其中應用GICA法檢測Flu A和Flu B抗原與IFA法檢測抗體總體一致率分別達99.1%和99.6%（Kappa值>0.75，一致性滿意），培養(yǎng)法檢測MP與PCR法總體一致率達98.2%（Kappa值>0.75，一致性滿意）。結(jié)論 非典型病原體是兒童呼吸道感染的重要病原體，應用IFA抗體檢測、流感病毒GICA抗原檢測、MP快速培養(yǎng)法能夠為臨床提供早期診斷和正確治療的依據(jù)。

關鍵詞：兒童；呼吸道感染；非典型病原體；肺炎支原體

現(xiàn)今呼吸道感染是兒童的常見疾病[1]，引起呼吸道感染的這些病原體有著變異快，傳播廣，由于不易形成長期免疫力而難以防治與控制[2]。筆者采用IFA法以及PCR法對兒童常見9種呼吸道病原體的IgM抗體，GICA法對流感病毒抗原、快速培養(yǎng)法對MP進行檢測，并分析比較檢測結(jié)果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集我院自2010年3月～2012年12月收治的患有呼吸道疾病的兒童患者450例子為研究對象。其中男236例，女214例。年齡6d～13歲。病種包括：急性上呼吸道感染、急性支氣管炎、肺炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、胸膜炎、發(fā)熱待查等。

1.2檢測方法 采用無菌靜脈采血，血清樣本采集后應及時冷藏，在血清收集好的8h內(nèi)對嗜肺軍團菌血清1型（LP1）、MP、QP、CP、腺病毒（ADP）、呼吸道合胞病毒（RSV）、Flu A、Flu B和副流感病毒1、2、3型（PIVs）9種病原體的IgM檢測。用無菌棉簽或者8號橡膠管將鼻咽部分分泌物收集[3]，并應立即對其進行MP、Flu A、Flu B進行檢測。

間接免疫熒光法（IFA法）。應用間接免疫熒光法檢測9種呼吸道感染病原體IgM抗體，試劑是由西班牙Vircell公司生產(chǎn)，從鄭州安圖生物公司購得。檢測過程應嚴格按照說明書進行，并在熒光顯微鏡下觀察，每次試驗都應設有陰陽對照。

膠體金免疫層析法（GICA法）。所用流感病毒快速檢測試劑盒（膠體金法）均購自北京阿斯可來生物工程有限公司，F(xiàn)lu A型（國藥準字S20063095），F(xiàn)lu B型（國藥準字S20063135），有效期內(nèi)依據(jù)說明書使用。

聚合酶鏈式反應（PCR法）。選購北京師范大學生物研究院的診斷試劑盒。首先選取MP中相對保守的基因設計引物，然后將血清、PCR混合液、引物混合放入PCR管中。經(jīng)歷了DNA變性、退火、延伸后，將擴增產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠中電泳，紫外燈下觀察結(jié)果，并設置陰陽對照，出現(xiàn)目的區(qū)帶150bp的為陽性。

肺炎支原體快速培養(yǎng)法。選購河北微拉生物科技有限公司的支原體營養(yǎng)和增菌組合培養(yǎng)基，根據(jù)說明書使用方法在有效期內(nèi)使用。

1.3統(tǒng)計學方法 應用SPSS 18.0軟件建立數(shù)據(jù)庫，并進行χ2檢驗，P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1由IFA法測得9項呼吸道病原體IgM檢出情況分析 448例樣本中，9種IgM抗體共檢測出89例，陽性率達19.9%（見表1）。

2.2GICA法測Flu與FIA法檢測結(jié)果的比較 GICA法檢測Flu A與FIA法檢測相比較結(jié)果如表2所示，其中陽性一致率為91.3%，陰性一致率為99.5%，總體一致率為99.1%，算Kappa=0.87>0.75，兩種方法檢測所得結(jié)果一致性滿意，經(jīng)McNemar χ2檢驗得出，在α=0.05時，χ2=0，P>0.05，因此認為兩種檢測方法間無統(tǒng)計學意義。由同樣的方法可得知，GICA法測Flu B與FIA法比較結(jié)果。GICA法對Flu B與FIA法檢測比較結(jié)果，陽性一致率、隱形一致率、總體一致率分別為90.9%、99.8%、99.6%，算Kappa=0.89>0.75，兩種方法檢測所得結(jié)果一致性滿意，經(jīng)McNemar χ2檢驗得出，在α=0.05時，χ2=0.5，P>0.05，因此認為兩種檢測方法間無統(tǒng)計學意義（見表2）。

3 結(jié)論

IFA法是一種高效的、靈敏度高、便于臨床使用、成本低廉的檢測多種呼吸道病毒和非典型病原的方法。應用IFA抗體檢測、流感病毒GICA抗原檢測、MP快速培養(yǎng)法以及PCR法均為現(xiàn)今檢測非典型病原體常用的方法，可根據(jù)環(huán)境條件的不同選擇合適的檢測方法，相信一定為臨床提供早期診斷和正確治療的依據(jù)。

參考文獻：

[1]張泉，付光宇，李曉霞，等.呼吸道聯(lián)檢試劑在兒童不典型呼吸道感染中的應用研究[J].醫(yī)藥論壇雜志，2010，31（20）：171-173.

[2]劉國英，樊冒.反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應聯(lián)合間接免疫熒光法對兒童下呼吸道非典型病原體感染早期診斷的意義[J].實用兒科臨床雜志，2010，04（25）：269-270.

[3]吳澤剛，李艷，祝成亮，等.湖北地區(qū)兒童急性呼吸道感染病原體研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2011，10（21）：2129-2131.編輯/劉小燕