小兒咳喘靈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

摘要：目的 在原小兒咳喘靈沖劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上建立新的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法。方法 在麻黃鑒別的試驗(yàn)方法上增加過(guò)濾；采用TLC法增加對(duì)小兒咳喘靈顆粒處方中金銀花的定性鑒別；增加板藍(lán)根有效成分氨基酸的茚三酮顯色反應(yīng)；增加用HPLC法測(cè)定小兒咳喘靈顆粒處方中主要成分麻黃堿的含量。結(jié)果 定性鑒別TLC法小兒咳喘靈顆粒斑點(diǎn)明顯，陰性空白無(wú)干擾；茚三酮顯色反應(yīng)明顯；HPLC法測(cè)定麻黃堿的含量線性范圍為0.4992μg/ml～4.992μg/ml（r=0.99996），平均回收率為98.48%，RSD =1.15%（n=5）。結(jié)論 定性定量方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，易于操作，可用于小兒咳喘靈顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：小兒咳喘靈顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；TLC；麻黃堿；HPLC

小兒咳喘靈顆粒是在張仲景《傷寒論》麻杏石甘湯基礎(chǔ)上采用科學(xué)的提取方法精制而成，收載于部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS3-B-0688-91編號(hào)。該品種由麻黃、金銀花、板藍(lán)根、苦杏仁、甘草、石膏、瓜蔞七味藥材組成，具有宣肺、清熱，止咳、祛痰、平喘。用于上呼吸道感染，氣管炎、肺炎，咳嗽等[5]。

原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有甘草皂苷的泡沫鑒別反應(yīng)和麻黃的生物堿定性鑒別，無(wú)板藍(lán)根、金銀花鑒別，也無(wú)含量的測(cè)定[1]。企業(yè)申報(bào)已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的中成藥中藥注冊(cè)9類，為提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，通過(guò)多次科學(xué)的方法試驗(yàn)研究，采用TLC法增加對(duì)小兒咳喘靈顆粒處方中金銀花定性鑒別；增加板藍(lán)根有效成分氨基酸的茚三酮顯色反應(yīng)。另針對(duì)處方中主藥麻黃，特增加用HPLC法測(cè)定麻黃堿的含量，該定量方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，易于操作，可用于小兒咳喘靈顆粒的質(zhì)量控制。

1儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀：日本島津LC-10ATvp，島津SPD-10Avp紫外檢測(cè)器，N2010色譜工作站；硅膠劑H薄層板由天津天河醫(yī)療有限公司提供。

1.2對(duì)照品 鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)：171241-200303）供含量測(cè)定用，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；

1.3樣品 由江蘇神華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.4試劑 甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2定性鑒別

2.1麻黃的鑒別 取本品10g，加水20ml使溶解，濾過(guò)，取濾液加氨試液使成堿性，再加氯仿15ml，振搖提取，分取氯仿液，置二支試管中，一管加氨制氯化銅試液與二硫化碳各5滴，振搖，靜置，氯仿層顯棕黃色；另一管為空白，以氯仿5滴代替二硫化碳5滴，振搖后氯仿層無(wú)色或顯微黃色。

2.2甘草皂苷泡沫反應(yīng)的鑒別 取本品10g，加水10ml，強(qiáng)力振搖1min，產(chǎn)生持久性泡沫，10min內(nèi)不消失。

2.3板藍(lán)根的鑒別 取本品0.3g，加水10ml使溶解，濾過(guò)，取濾液1ml，加茚三酮試液0.5ml，置水浴加熱數(shù)分鐘，溶液顯藍(lán)紫色。

2.4金銀花的鑒別

2.4.1對(duì)照品溶液的制備 取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.4.2供試品溶液的制備 取本品粉末0.8g，加甲醇5ml，放置12h，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。

2.4.3陰性對(duì)照溶液為甲醇溶劑。

2.4.4薄層層析 照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10～20μl、對(duì)照品溶液10μl、陰性對(duì)照溶液，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

3含量測(cè)定

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 選擇鹽酸麻黃堿的最大吸收波長(zhǎng)254nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2色譜條件 色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：甲醇-水（1：1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；柱溫25℃。在此色譜條件下，鹽酸麻黃堿的理論板數(shù)達(dá)到3000以上，與其他化合物的峰達(dá)到基本分離。

3.3對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品12.5mg，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.25→10）1ml，0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30min，用0.5mol/L的鹽酸溶液調(diào)至pH至7，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

3.4供試品溶液的制備 取本品，研細(xì)，取約3g，精密稱定，置蒸餾瓶中，加5mol/L的氫氧化鈉溶液120ml，搖勻，加氯化鈉7.5g，超聲處理10min，蒸餾，用預(yù)先盛有0.5mol/L的鹽酸溶液5ml的100ml量瓶收集蒸餾液近95ml，加水至刻度，搖勻。精密量取10ml，置25ml容量瓶中，依據(jù)對(duì)照品溶液的制備項(xiàng)下的方法，自\"加入高碘酸溶液\"起，至\"加甲醇至刻度\"，依法操作，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

小兒咳喘靈顆粒HPLC圖，鹽酸麻黃堿對(duì)照品，供試品圖（略）。

3.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)[2，3] 分別吸取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液和供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在此條件下，鹽酸麻黃堿峰與其他組分峰基本分離，分離度R﹥1.5；保留時(shí)間19min，理論板數(shù)以鹽酸麻黃堿峰計(jì)不低于3000。

3.6線性試驗(yàn) 精密稱定鹽酸麻黃堿對(duì)照品12.48mg，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取1ml、2ml、5ml、8ml、10ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.25→10）1ml、0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30min，用0.5mol/L的鹽酸溶液調(diào)至pH至7，加甲醇至刻度，搖勻。

分別精密量取5個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進(jìn)樣濃度X（μg/ml）對(duì)平均峰面積Y進(jìn)行回歸處理，得到回歸方程，見表1。

3.7精密度試驗(yàn)[3] 精密吸取濃度為2.496μg/ml的鹽酸麻黃堿對(duì)照溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得鹽酸麻黃堿峰面積積分值，見表2。

3.8穩(wěn)定性試驗(yàn) 取小兒咳喘靈顆粒3g，精密稱定，分別用\"供試品溶液的制備\"相同方法制得供試品溶液，精密吸取20μl，每間隔1h進(jìn)一針，檢測(cè)供試品溶液中鹽酸麻黃堿的含量，連續(xù)考察5h，見表3。

3.9重復(fù)性試驗(yàn) 取小兒咳喘靈顆粒3g，共5份，精密稱定，分別用\"供試品溶液的制備\"相同方法制得供試品溶液，精密吸取20μl，分別檢測(cè)供試品溶液中鹽酸麻黃堿的含量，見表4。

3.10加樣回收率試驗(yàn) 供試品溶液 取重復(fù)性試驗(yàn)批號(hào)樣品小兒咳喘靈顆粒3g，共5份，精密稱定，分別置于蒸餾瓶中。另精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品12.35mg，置100ml蒸餾瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對(duì)照儲(chǔ)備液，精密量取2ml，置蒸餾瓶中（濃度為247.0μg/ml），用\"供試品溶液的制備\"相同方法制得供試品溶液。

精密吸取對(duì)照儲(chǔ)備液2ml，置100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.25→10）1ml、0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30min，用0.5mol/L的鹽酸溶液調(diào)至pH至7，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

分別吸取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液和供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見表5。

加樣回收率（100%）=■×100%

結(jié)果表明：本方法加樣回收率較好。

3.11樣品測(cè)定 取本品樣品5批，精密稱取內(nèi)容物，分別用\"供試品溶液的制備\"相同方法制得供試品溶液。

精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品約，按對(duì)照品溶液的制備項(xiàng)下的方法制得對(duì)照品溶液。精密吸取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液和以上供試品溶液各20μl注入色譜儀。按外標(biāo)法計(jì)算含量，見表6。

4討論

4.1對(duì)小兒咳喘靈沖劑[鑒別] 進(jìn)行修訂，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中\(zhòng)"取本品10g，加水20ml使溶解，加氨試液使成堿性\"，修訂為\"取本品10g，加水20ml使溶解，濾過(guò)，取濾液加氨試液使成堿性…\"因處方中加入糊精，《中國(guó)藥典》2010年版二部對(duì)糊精性狀的描述為\"本品在沸水中易溶\"，進(jìn)行[鑒別]試驗(yàn)時(shí)，因冷水中未溶解的糊精對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)生干擾，故做上述修訂。

4.2增加板藍(lán)根有效成分氨基酸的茚三酮顯色反應(yīng)[4]；采用TLC法增加對(duì)小兒咳喘靈顆粒處方中金銀花進(jìn)行定性鑒別；依據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部收載金銀花的定性鑒別，經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)證明，該定性鑒別靈敏度高，專屬性強(qiáng)。

4.3現(xiàn)執(zhí)行部頒標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定，無(wú)法對(duì)處方中規(guī)定應(yīng)有的有效成分進(jìn)行控制，現(xiàn)因該品種由麻黃、金銀花、板藍(lán)根、苦杏仁、甘草、石膏、瓜蔞七味藥材組成.處方中麻黃為主藥，其功能主治為發(fā)汗散寒，利水消腫。特增加用HPLC法測(cè)定小兒咳喘靈顆粒處方中主藥麻黃的主要成分麻黃堿的含量，該定量方法專屬性強(qiáng)，易于操作，可用于小兒咳喘靈顆粒的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

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[3]金鳳珠.清熱止咳糖漿中鹽酸麻黃堿含量的測(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2000，11（12）：1070.

[4]衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)[S].中藥成方制劑第四冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS3-B-0688-91.

[5]藥用植物學(xué)與生藥學(xué)[S].第四版，2003：229-232.編輯/申磊