NSF對(duì)慢性腎衰大鼠脂質(zhì)代謝的影響

摘要：目的 觀察NSF對(duì)慢性腎衰大鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)TG、LDL-C、HDL-C和血清M-CSF的影響。方法 采用5/6腎切除手術(shù)建立大鼠慢性腎功衰模型。檢測(cè)血Urea、Crea，血脂TG、LDL-C、HDL-C的變化；免疫組化法檢測(cè)脂代謝機(jī)制相關(guān)指標(biāo)血清M-CSF含量。結(jié)果 NSF組與模型組比較：Urea、Crea明顯降低 （ P<0.05）； TG、LDL-C明顯降低（P<0.05），HDL-C明顯升高（P<0.05）；血清巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）表達(dá)明顯降低（P<0.05）。結(jié)論 NSF能夠改善腎臟功能；可能通過(guò)下調(diào)M-CSF的表達(dá)，調(diào)節(jié)慢性腎衰大鼠脂質(zhì)代謝指標(biāo)TG、LDL-C和HDL-C，改善脂質(zhì)代謝狀況，發(fā)揮對(duì)慢性腎功能衰竭及脂質(zhì)代謝障礙相關(guān)并發(fā)癥防治作用。

關(guān)鍵詞：慢性腎衰；脂質(zhì)代謝；巨噬細(xì)胞集落刺激因子

慢性腎衰竭（CRF）是各型原發(fā)或繼發(fā)性腎臟疾病進(jìn)展到終末期的共同表現(xiàn)，最終進(jìn)展至終末期腎臟?。‥nd stage renal disease，ESRD）。研究顯示動(dòng)脈粥樣硬化（AS）性心血管疾病已成為CRF患者最常見(jiàn)的并發(fā)癥和引起死亡的首要原因；而AS的危險(xiǎn)因素中，又以脂代謝異常最為突出[1]。腎衰末期治療常依靠血液透析或腎臟移植維，給患者帶來(lái)沉重經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。中藥地耳草具有保肝、抗菌、增強(qiáng)免疫作用，臨床常應(yīng)用于肝炎治療[2]，在CRF的腎功改善方面也有臨床報(bào)道[3]。NSF是地耳草提取的有效成分提取物，本課題組前期研究顯示NSF能延緩CRF的發(fā)展，改善腎纖維化及相關(guān)細(xì)胞因子指標(biāo)。為進(jìn)一步探討NSF對(duì)CRF的防治機(jī)制，研究NSF對(duì)CRF時(shí)脂質(zhì)代謝的影響，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立5/6腎切除大鼠模型，選取脂質(zhì)代謝關(guān)鍵效應(yīng)因子TG、LDL-C和HDL-C，以及血清中脂質(zhì)代謝相關(guān)炎癥因子M-CSF指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)；確定其對(duì)CRF脂質(zhì)代謝的改善作用，并探索其可能對(duì)CRF脂質(zhì)代謝及相關(guān)并發(fā)癥的影響。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性清潔級(jí)SD大鼠72只，體重（210±10）g，成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。常規(guī)條件下飼養(yǎng)，自由飲水，普通飲食，適應(yīng)性喂養(yǎng)7d。

1.2實(shí)驗(yàn)用藥 NSF由成都南山藥業(yè)有限公司提供，依照委托單位提供的供試品人臨床擬用劑量（1.2g/人·d）為主要依據(jù)，按照體表面積換算成大鼠的等效劑量（人的體重按60kg計(jì)）。金水寶膠囊，江西濟(jì)成可信金水寶制品有限公司，批號(hào)，20111203，以臨床人用量（0.33g/粒，18粒/人·d））經(jīng)體表面積轉(zhuǎn)換成大鼠等效劑量作為本實(shí)驗(yàn)劑量。

1.3主要試劑與儀器 全自動(dòng)生化分析儀：日立7180型；酶標(biāo)儀：Thermo Mulliskan Ascant 公司；類標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清：中美合資蘭州民海生物工程有限公司 批號(hào)：20100424；雙抗100X：PAA-Strasse1.4061 Pasching .Austria 批號(hào)：P01010-1446；免疫組化試劑盒：生產(chǎn)商：北京博奧森生物技術(shù)有限公司，批號(hào)： FP-0023。

1.4 方法

1.4.1模型制作 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d，稱重，編號(hào)，隨機(jī)分為四組，每組選取18只為假手術(shù)組，剩余54只采用5/6腎切除術(shù)制作大鼠腎衰模型。參考文獻(xiàn)[4]分2次，間隔7d切除5/6腎組織。

1.4.2分組給藥 手術(shù)操作后的大鼠隨機(jī)分為三組，每組18只。分別為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、NSF組。所有大鼠于2次手術(shù)后第31d開始灌胃給予相應(yīng)藥物：假手術(shù)組和模型對(duì)照組以0.5%CMC-Na溶液灌胃，1ml/100g.bw；陽(yáng)性對(duì)照組：金水寶膠囊5.7mg/kg；NSF組：NSF120 mg/kg。連續(xù)給藥30d。

1.4.3 標(biāo)本收集 用完藥后禁食12h，次日稱重，10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血。留取血清做生化檢測(cè)及elisa檢測(cè)。

1.4.4檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.4.1一般情況觀察 動(dòng)態(tài)觀察造模期間大鼠存活率、進(jìn)食情況、精神狀態(tài)、活動(dòng)度、皮毛光澤度等。

1.4.4.2血清Urea、Crea 最后1次給藥后次日，10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血。留取血清，以全自動(dòng)血生化分析儀檢測(cè)Urea、Crea變化。

1.4.4.3 脂質(zhì)代謝效應(yīng)指標(biāo)TG、LDL-C、HDL-C 最后1次給藥后次日，10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血。留取血清，以全自動(dòng)血生化分析儀檢測(cè)TG、LDL-C、HDL-C變化。

1.4.4.4 脂質(zhì)代謝機(jī)制指標(biāo)M-CSF 最后1次給藥后次日，10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血。留取血清，采用ELISA法檢測(cè)血清M-CSF含量。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料以（x±s）表示，用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)和單因素方差分析。

2結(jié)果

2.1一般情況 實(shí)驗(yàn)期間，正常大鼠全部存活，飲食飲水正常，活動(dòng)靈活，皮毛光澤。造模處理后各組大鼠均出現(xiàn)死亡，各組存活率分別為：模型組66.67%，陽(yáng)性對(duì)照組55.56%，NSF組77.78%；造模后各組大鼠均出現(xiàn)不同程度進(jìn)食飲水量下降，精神萎靡惡動(dòng)，毛色發(fā)黃干枯，體態(tài)消瘦等，尤以模型組最為嚴(yán)重。治療后，陽(yáng)性對(duì)照組和NSF組均較模型組有一定程度恢復(fù)，進(jìn)食、活動(dòng)均有增加。

2.2血清Urea、Crea 各組大鼠Urea、Crea增高，與假手術(shù)組相比，具有顯著差異（P<0.05），；NSF組、陽(yáng)性對(duì)照組與模型組比較Urea、Crea降低，有顯著差異（P>0.05），表明NSF能降低血Urea、Crea的含量。見(jiàn)表1。

注：\"*\"P<0.05，與模型對(duì)照組比較； \"#\"P<0.05，與假手術(shù)組比較

2.3 血脂TG、脂蛋白LDL-C、HDL-C 模型組與假手術(shù)組比較，TG、LDL-C和HDL-C改變均有顯著差異（P<0.05）；NSF組、陽(yáng)性對(duì)照組與模型組比較，TG、LDL-C降低，HDL-C升高，均有顯著性差異（P<0.05）；表明NSF能改善模型的血脂代謝紊亂。見(jiàn)表2。

注：\"*\"P<0.05，與模型對(duì)照組比較； \"#\"P<0.05，與假手術(shù)組比較

2.4血清M-CSF的表達(dá) 各組與假手術(shù)組比較，M-CSF含量增高，有顯著性差異（P<0.05），；各組與模型組比較，M-CSF含量降低，有顯著性差異（P<0.05） 表明NSF能降低造模引起M-CSF高表達(dá)。見(jiàn)表3。

注：\"*\"P<0.05，與模型對(duì)照組比較； \"#\"P<0.05，與假手術(shù)組比較

3討論

腎臟疾病若缺乏有效治療，其終末易轉(zhuǎn)為CRF，隨著腎功能逐漸失代償，最終進(jìn)展至ESRD，同時(shí)易出現(xiàn)各種并發(fā)癥并導(dǎo)致病情惡化和死亡。其中以動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的發(fā)病和死亡風(fēng)險(xiǎn)較高。如何延緩CRF的進(jìn)展，防治各種并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展，降低死亡率已成為近年研究熱點(diǎn)。

本課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NSF對(duì)CRF模型大鼠，有改善腎臟功能、干預(yù)腎臟纖維化以及干預(yù)模型大鼠血液微炎癥狀態(tài)效果。近期研究[5]顯示，CRF存在的微炎癥狀態(tài)，與AS的發(fā)生存在顯著相關(guān)性。M-CSF可由激活的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌產(chǎn)生，也可由腎小管上皮細(xì)胞分泌產(chǎn)生，是反映單核-巨噬細(xì)胞增殖功能的重要因子，在機(jī)體的免疫應(yīng)答中起重要的作用。CRF可由于腎組織受損，M-CSF表達(dá)增高；且升高幅度與腎受損程度呈正相關(guān)。且另M-CSF可通過(guò)影響單核-巨噬細(xì)胞的趨化、增殖和分泌能力及其脂質(zhì)代謝，參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)5/6腎切除復(fù)制大鼠CRF模型，觀察NSF對(duì)模型大鼠腎功的改善，研究藥物對(duì)腎衰模型的治療作用；并選取AS化獨(dú)立性危險(xiǎn)致病因素：TG、LDL-C、HDL-C和血脂代謝調(diào)節(jié)相關(guān)炎癥細(xì)胞因子M-CSF進(jìn)行檢測(cè)，研究藥物對(duì)腎衰時(shí)脂質(zhì)代謝紊亂的干預(yù)效果，探索NSF對(duì)脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NSF對(duì)該模型大鼠腎臟功能有改善作用；能降低該模型TG、LDL-C的表達(dá)，增加HDL-C，該結(jié)果提示NSF對(duì)5/6腎切除模型大鼠存在的脂質(zhì)代謝紊亂狀態(tài)有治療作用；血清M-CSF的結(jié)果則顯示NSF可降低M-CSF表達(dá)。以上結(jié)果提示NSF能夠改善模型大鼠腎臟功能，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝；其機(jī)制可能在于通過(guò)下調(diào)M-CSF的表達(dá)，發(fā)揮其對(duì)CRF及脂質(zhì)代謝障礙相關(guān)并發(fā)癥的防治作用。

參考文獻(xiàn)：

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