免疫組化和PCR方法檢測乳癌腋窩淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的比較

摘要：目的 對乳癌腋窩淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者采用免疫組化和PCR方法檢測，觀察和分析其的診斷效果。方法 此次研究中，一共收集了216個采用常規(guī)組織學(xué)檢查為陰性的腋窩淋巴結(jié)，然后分別采用免疫組化和PCR方法進(jìn)行檢測，分別檢測MUC1蛋白和MUC1mRNA表達(dá)。結(jié)果 經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)，MUC1mRNA陽性檢出率為66.0%與蛋白表達(dá)檢出率21.0%相比較，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 臨床上，采用PCR方法檢測乳癌腋窩淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移更為敏感，進(jìn)而為患者預(yù)后和臨床治療提供一定的參考。

關(guān)鍵詞：免疫組化；PCR方法；乳癌；腋窩淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移

臨床上，采用常規(guī)病理檢查則難以對2mm以下的癌轉(zhuǎn)移病灶檢測出，同時對于淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是否存在，則對患者的預(yù)后產(chǎn)生直接性的影響。近年來，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)地快速發(fā)展，檢測方法也逐漸增加[1]。為了研究和分析不同方法的優(yōu)勢，我院采用免疫組化和PCR方法對微轉(zhuǎn)移病灶進(jìn)行診斷，取得一定成效，報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 此次研究的標(biāo)本則來自40例乳腺癌組織和相對應(yīng)的216個腋窩淋巴結(jié)手術(shù)切除標(biāo)本以及52例乳腺良性腫瘤標(biāo)本。這些患者均為我院在2009年4月～2012年9月收治。這些標(biāo)本均在手術(shù)后115h內(nèi)將其放置在液氮中進(jìn)行保存。同時留取部分進(jìn)行常規(guī)的病理學(xué)檢查和免疫組化分析。此外，選擇同期來院治療的膽結(jié)石患者肝十二腸韌帶淋巴結(jié)作為此次研究的對照組。

1.2方法 免疫組化：采用SP法染色，兔抗人MUC1多抗。操作方法則按照說明書進(jìn)行。每個批次都使用已知的乳腺癌陽性切片來作為對照[2]。然后使用PBS來代替一抗進(jìn)行陰性對照。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：胞漿內(nèi)如果出現(xiàn)棕黃色顆粒則為陽性細(xì)胞，否則則為陰性細(xì)胞。

判定標(biāo)準(zhǔn)：（-）：陽性細(xì)胞<10.0%；（+）：陽性細(xì)胞在10.0～30.0%；（++）：陽性細(xì)胞在30.0～50.0%；（+++）：陽性細(xì)胞>50.0%。然后根據(jù)臨床胞漿染色情況和細(xì)胞的形態(tài)來決定微轉(zhuǎn)移情況[3]。

RT-PCR法：采用MUC1基因序列號為A1（（5'-CGTCGTGGA-CATTGATGGTACC-3.），A2（5'-GTACCTCCTCT-CACCTCCTCCAA-3.）進(jìn)行實(shí)驗[4]。其內(nèi)參照B2-微球蛋白基因進(jìn)行[5]。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件處理，檢出率采用（%）表示，采用χ2或t檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MUC1基因免疫組化情況 見表1。

2.2乳癌MUC1 mRNA表達(dá)情況 見表2。

2.3兩種方法檢測MUC1基因表達(dá)結(jié)果比較 見表3。

3 討論

近年來，臨床上發(fā)生乳癌的人數(shù)逐漸增多，目前主要采用外科手術(shù)方法治療。然而對患者術(shù)后預(yù)后影響的因素較多，比如腋窩淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量、水平和等對患者的預(yù)后有非常重要的作用。經(jīng)過相關(guān)的研究發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致患者死亡的主要原因是惡性腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移，然而淋巴道則是其中的一個轉(zhuǎn)移途徑[6]。此外，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者的生存率呈現(xiàn)為負(fù)相關(guān)性。

在對轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞進(jìn)行檢測時，一般采用生物學(xué)標(biāo)志物。由于大多數(shù)的乳癌來源于上皮組織，因此，上皮組織的一些特異性標(biāo)志物則可以作為轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志物，并能夠使用其對淋巴結(jié)中微轉(zhuǎn)移灶檢測。MUC1粘蛋白則是一種高分子膜量糖蛋白，其的分布有很明顯的組織特異性[7]。其一般存在于上皮性組織以及器官中。比如乳腺和胰腺以及結(jié)腸。其在所有的正常組織和乳癌組織中都能夠表達(dá)，但是在間葉組織來源的淋巴結(jié)中并不能表達(dá)。經(jīng)過相關(guān)實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，使用RT-PCR對10個來源于膽結(jié)石患者的正常淋巴結(jié)進(jìn)行檢測，均沒有發(fā)現(xiàn)MUC1mRNA表達(dá)現(xiàn)象[8]。所以，在臨床上，MUC 1則只能作為乳腺癌患者淋巴結(jié)中中轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志物，并將其用來診斷微轉(zhuǎn)移。

臨床上，對患者進(jìn)行常規(guī)組織病理學(xué)檢測時，則很容易發(fā)現(xiàn)2mm以上的轉(zhuǎn)移瘤灶。但是對于2mm以下的微轉(zhuǎn)移灶則難以發(fā)現(xiàn)。進(jìn)行免疫組化分析則能夠提高對微轉(zhuǎn)移的檢出率，但是，其的操作十分的復(fù)雜，價格也較為昂貴，因此，難以推廣。經(jīng)過免疫組化研究發(fā)現(xiàn)，在正常的乳腺和乳腺良性疾病以及乳癌轉(zhuǎn)變過程中，MUC1的表達(dá)出現(xiàn)逐漸增強(qiáng)，同時其分布極性也慢慢地消失，最終其將在整個細(xì)胞膜、漿中出現(xiàn)表達(dá)。經(jīng)過相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，腋窩淋巴結(jié)中所檢出的微轉(zhuǎn)移細(xì)胞大多表現(xiàn)為散在性分布，采用常規(guī)病理檢查則難以發(fā)現(xiàn)。采用免疫組化染色則能夠使得轉(zhuǎn)移細(xì)胞和背景細(xì)胞存在一定的差異，進(jìn)而能夠檢出單個腫瘤細(xì)胞。

此次研究中，采用PCR法對微轉(zhuǎn)移進(jìn)行檢測，主要是針對性一些腋淋巴結(jié)陰性乳癌高危人群，同時為臨床預(yù)后提供一定的參考依據(jù)。在乳癌患者人群中，一旦其發(fā)生微轉(zhuǎn)移情況，則其預(yù)后一般較差?；颊弋?dāng)出現(xiàn)微轉(zhuǎn)移細(xì)胞進(jìn)入到淋巴結(jié)后，其將可能繼續(xù)增生而最終形成更大的轉(zhuǎn)移病灶，最終出現(xiàn)全身轉(zhuǎn)移。此外，其也可能被機(jī)體免疫系統(tǒng)所清除或者其進(jìn)入到暫時的靜止期，當(dāng)環(huán)境適宜時就再次發(fā)生轉(zhuǎn)移。經(jīng)過此次研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)，MUC1mRNA陽性檢出率為66.0%與蛋白表達(dá)檢出率21.0%相比較，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。臨床上，采用PCR方法檢測乳癌腋窩淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移更為敏感，進(jìn)而為患者預(yù)后和臨床治療提供一定的參考。

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編輯/哈濤