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    不同檢驗方法對肺結(jié)核早期診斷的應(yīng)用

    2014-12-31 00:00:00李玉美羅勇強(qiáng)
    醫(yī)學(xué)信息 2014年16期

    摘要:目的 探討痰涂片、PCR、PPD三種檢驗方法與肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用價值,探究快速、可靠、敏感、特異的診斷方法。方法 選取2013年3月~9月我院收治疑似活動性肺結(jié)核患者182例,據(jù)相同醫(yī)師推斷將患者分為高度疑似42例、低度疑似140例,獲取痰樣分別進(jìn)行涂片、PCR、PPD、培養(yǎng)檢驗,與病理學(xué)檢驗結(jié)果進(jìn)行對比。結(jié)果高度疑似組陽性率(40.48%)高于低度疑似組(5.71%),高度疑似組痰涂片、PCR、PPD陽性率26.19%、30.95%、30.95%,高于低度疑似組12.86%、11.43%、5.71%;高度疑似組痰涂片敏感度、特異度、符合率分別為64.71%、80.65%、85.71%,PCR為76.47%、86.21%、90.48%,PPD為76.47%、86.21%、90.48%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);低度疑似組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 肺結(jié)核早期診斷中,運(yùn)用影像學(xué)與癥狀診斷,針對高度疑似者,運(yùn)用PCR可提高診斷效用,避免漏診;而針對低度疑似者,運(yùn)用痰涂片法可基本滿足臨床需要;若有需要符合條件者可運(yùn)用PPD。

    關(guān)鍵詞:結(jié)核??;早期診斷;痰涂片;PCR;PPD

    結(jié)核病是臨床常見病與多發(fā)病,我國是結(jié)核病高發(fā)國家,患病率居發(fā)展中國家第二位,據(jù)不完全統(tǒng)計,我國每年新增肺結(jié)核患者130萬,其中傳染性肺結(jié)核450萬例,肺結(jié)核病嚴(yán)重威脅國民健康,肺結(jié)核防治工作任重道遠(yuǎn)[1]。肺結(jié)核早期診斷與及時治療是改善預(yù)后的關(guān)鍵,常用的診斷技術(shù)包括X線、CT、細(xì)菌性檢驗等,但結(jié)核病臨床表現(xiàn)與影像學(xué)表現(xiàn)復(fù)雜多變、特異性強(qiáng),細(xì)菌性檢驗敏感度低,痰涂片法符合率低、培養(yǎng)法耗時長,探討快速、敏感、特異的細(xì)菌學(xué)診斷是結(jié)核病早期診斷的難題。本研究就我院收治182例據(jù)臨床表現(xiàn)與胸部影像學(xué)診斷疑似肺結(jié)核患者進(jìn)行痰涂片結(jié)核菌檢查、聚合酶鏈反應(yīng)(Polyerase Chain Reaction,PCR)與皮膚結(jié)核菌素蛋白衍化物(PPD)檢驗,比較其診斷效用[2]。

    1資料與方法

    1.1一般資料選取2013年3月~9月我院收治疑似活動性肺結(jié)核患者182例,其中男113例、女69例;年齡13~72歲,平均(51.3±5.3)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):均未有肺結(jié)核病史;均進(jìn)行X線等影像學(xué)檢查、結(jié)核菌素實驗。據(jù)相同醫(yī)師推斷將患者分為高度疑似42例、低度疑似140例,兩組患者年齡、性別等臨床資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2方法①痰涂片檢查,所有患者均于清晨、夜間和即時,指導(dǎo)深呼吸,取痰液或肺部分泌物,取三份痰標(biāo)本,若取清晨痰,3h后再取痰標(biāo)本一份,或留用2份即時痰,痰量3~5ml,合格痰液應(yīng)呈膿樣、干酪樣,標(biāo)記后運(yùn)用竹簽挑起痰膿性物質(zhì),覆于載玻片形成圓形痰膜,自然干燥后運(yùn)用萋尼氏染色法處理,待干后行鏡檢(淡藍(lán)色背景),連續(xù)觀察,填寫檢驗報告[3]。②PCR檢驗,取痰步驟與痰涂片相同,取0.5ml痰樣,加入1N氫氧化鈉溶液5μL,于37℃溫箱內(nèi)放置40min,運(yùn)用高速離心機(jī)離心,轉(zhuǎn)速10000r/min,持續(xù)5min,棄上清液后運(yùn)用5%生理生理鹽水沖洗至中性備用。取胸水與血清各1ml,運(yùn)用離心機(jī)離心后待沉淀后加入裂解液50μl,持續(xù)10min沸水浴,取出再次行10000r/min離心持續(xù)5min。制備TB-DNA模板:于Taq酶0.2μl中加入15μl反應(yīng)液混勻后再滴入石蠟油20μl封頂,加入上清液5μl完成制備后行10000r/min離心5min,擴(kuò)增循環(huán)35次,取20mlPCR擴(kuò)增液行上樣電泳,于紫外線下檢驗,呈S型號曲線增長,最強(qiáng)熒光值較基礎(chǔ)熒光值>20u為陽性[4]。③PPD檢驗:于左臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)注射PPD液0.1ml,進(jìn)行皮試,若72h后可見直徑≥5mm腫結(jié)為陽性[5]。

    1.4統(tǒng)計學(xué)處理本次研究中獲取的所有資料數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS18.0軟件處理,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示計量資料,以數(shù)(n)與率(%)表示計數(shù)資料,P<0.05為置信水平,表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1不同疑似程度檢測高可能性組確診率高于低度疑似者,兩組不同檢驗方法間陽性檢出率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

    注:*:與高度疑似者相比,P<0.05

    2.2不同檢查方法診斷效用比較低度疑似組中,痰涂片、PCR、PPD診斷效用差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高度疑似似組中,PCR、PPD法敏感度、特異度均高于痰涂片法,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

    注:*:與痰涂片法相比, P<0.05

    2.3假陽性與假陰性情況于高度疑似組中發(fā)現(xiàn)2例痰涂片法判斷為陽性者,于PCR檢驗顯示為陰性者,判斷為PCR質(zhì)量控制不合格,隨后再行PCR檢驗檢驗為陽性;出現(xiàn)1例痰涂片檢驗陰性者,而PCR、PPD均呈陽性者,后確診為肺結(jié)核。低度疑似者中,出現(xiàn)痰涂片陰性者,而PCR、PPD均為陽性者,后發(fā)現(xiàn)痰涂片質(zhì)量控制不合格,確診為肺結(jié)核。

    3討論

    我國是肺結(jié)核高發(fā)國家,肺結(jié)核防控治療是公共衛(wèi)生服務(wù)重要項目,國家大規(guī)模肺結(jié)核防控工作成效顯著,但近年來因防控力度下降,結(jié)核病發(fā)病率有所上升[6]。早期診斷與治療是防治結(jié)核病的關(guān)鍵,目前多數(shù)基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)已具備一定的診斷能力,如CT、X 線、癥狀診斷均可作為肺結(jié)核輔助診斷方法,但因肺結(jié)核潛伏期長,表現(xiàn)特異,若需確診還需進(jìn)行病原學(xué)檢驗。

    目前針對肺結(jié)核的診斷,細(xì)菌培養(yǎng)法是結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn),但檢驗時間較長,不利于結(jié)核病的大規(guī)模篩查與早期治療的開展,且培養(yǎng)需要嚴(yán)格的質(zhì)量控制,否則易受其它因素的干擾[7]。因此,臨床上采用快速檢驗法進(jìn)行肺結(jié)核早期篩查,本次研究中痰涂片、PCR、PPD均應(yīng)用廣泛,操作便捷。痰涂片法是開展應(yīng)用最早的傳統(tǒng)檢測方法,從形態(tài)學(xué)的角度檢查肺結(jié)核桿菌,因其操作簡便、成本低廉、檢測速度快,成為基層醫(yī)院篩查肺結(jié)核的首選[8]。但是痰涂片特異性強(qiáng)、敏感度低,易發(fā)生漏診。本次研究中25例肺結(jié)核患者僅檢出15例,占60%,而據(jù)大量的研究表明肺結(jié)核患者于痰涂片陽性可達(dá)50%~70%[9]。PCR檢驗迅速、敏感度高于痰涂片,此次研究25例肺結(jié)核PCR陽性20例,占80%,致PCR漏診的主要原因為痰標(biāo)本不合格等。PPD全稱結(jié)核菌素純蛋白衍生物,針對結(jié)核菌素敏感度較高,本次研究中25例檢出21例,檢出率較高,但是值得注意的是PPD顯示陽性者并非肺結(jié)核患者,僅表示其攜帶結(jié)核菌的幾率較高,本次研究中以炎性腫塊≥5mm為標(biāo)準(zhǔn),客觀上排除了弱陽性者。

    本次研究中運(yùn)用X線、癥狀、CT檢查等方法篩選出高度疑似者,再進(jìn)行相關(guān)病原菌學(xué)檢驗,結(jié)果顯示,高度疑似者各項檢驗陽性率高于低度疑似者,確診率高于低度疑似者,由此可見于病原菌學(xué)檢驗前,先行輔助診斷,篩查出高度疑似者,可縮短檢驗流程,提高診斷效用[10]。

    運(yùn)用痰涂片、PCR、PPD方法分別診斷不同程度疑似組患者,于高度疑似組中,PPD、PCR診斷效用高于痰涂片法,而于低度疑似組中,PPD、PCR、痰涂片診斷效用差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。因此,痰涂片應(yīng)用于肺結(jié)核大規(guī)模篩查能夠滿足基本臨床需要,再配合X線、CT等輔助診斷,針對高度疑似者行PCR檢驗或病原菌培養(yǎng)可有效避免漏診與誤診。

    參考文獻(xiàn):

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    [2]Seagar AL,Neish B,Laurenson IF.Comparison of two in house realtime PCR assays with MTBQ-PCR Alert and Geno TypeMTBDR plus for the rapid detection of mycobacteria in clinical specimens[J].J Med Microbiol,2012,61(10):1459-1464.

    [3]楊光武.不同檢驗方法在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用[J].航空航天醫(yī)學(xué)雜志,2012,23(3):309-310.

    [4]潘云虎,季志宇,李發(fā)根,等.肺泡灌洗液聯(lián)合肺組織PCR方法檢測結(jié)核桿菌 DNA對肺結(jié)核早期診斷的意義[J].臨床軍醫(yī)雜志,2012,40(2):333-334.

    [5]陳濤,周琳,周杰,等.環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法快速檢測結(jié)合分枝桿菌的臨床應(yīng)用評估[J].中國防癆雜志,2012,34(7):413-418.

    [6]武瑋,潘毓萱,田苗.建立增菌PCR方法對痰涂片陰性肺結(jié)核的早期診斷[J].中國防癆雜志,2013,28(4):315-316.

    [7]陳曼,胡啟飛,祝絢,等.肺結(jié)核快速檢測技術(shù)對肺結(jié)核的早期診斷[J].中華實用診斷與治療雜志,2012,24(3):304-305.

    [8]Vishnevskii BI,Manicheva OA,Vishnevskaia EB,et al.The specific features of bacterial isolation and drug resistance of mycobacteria in extra pulmonary tuberculosis[J].Probl Tuberk Bolezn Lega,2009,78(12).

    [9]Yaday R,Sethi S,Mewara A,et al.Rapid detection of rifampicin,isoniazid and streptomycin in mycobacteria tuberculosis clinical isolates by high-resolution melting curve analysis[J].J Appl Microbiol,2012,113(4).

    [10]陳鐵奇.不同檢驗方法對肺結(jié)核早期診斷的應(yīng)用[J].中外醫(yī)療,2009,33(20):126-127.

    編輯/許言

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