壓力性尿失禁患者尿道周圍結(jié)締組織中核心蛋白聚糖和TGF-β1mRNA表達水平的改變

摘要：目的探討壓力性尿失禁(SUI)患者尿道周圍結(jié)締組織中核心蛋白聚糖（DCN）和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1) mRNA表達水平的改變及其相關性。方法將65例絕經(jīng)后婦女根據(jù)是否存在SUI，分為SUI組（35例）和對照組（30例）。采用半定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法檢測兩組婦女尿道周圍結(jié)締組織中DCN和TGF-β1 mRNA的表達水平。結(jié)果SUI組患者DCN及TGF-β1 mRNA表達水平與對照組比較，其差異均有統(tǒng)計學意義，且兩者間存在負相關關系。結(jié)論SUI患者尿道周圍結(jié)締組織中TGF-β1減少及DCN的升高可能導致該部位膠原蛋白含量的減少，最終導致SUI發(fā)生的原因之一。

關鍵詞：壓力性尿失禁；膠原蛋白；核心蛋白聚糖；轉(zhuǎn)化生長因子β1

The Connective Tissue Around the Urethra in Patients with Stress Urinary Incontinence of Decorin and TGF- β 1 mRNA Expression Level Change

OU Lu

(Department of Gynaecology and Obstetrics，Nanhai District People's Hospital Foshan City，F(xiàn)oshan 528200，Guangdong，China)

Abstract：ObjectiveTo observe the relationship between the expression of decorin and TGF-β1 mRNA in periurethral vaginal tissue in patients with stress urinary incontinence(SUI).MethodsTransvaginal biopsies were obtained from the periurethral vaginal tissue in 35 SUI and 30 non SUI control postmenopausal women.RT-PCR were used to verify the mRNA level of decorin and TGF-β1.Results The expression of decorin was significantly higher and the expression of TGF-β1 was significantly lower in patients with SUI.The expression of decorin mRNA was highly and negatively related to the expression of TGF-β1 mRNA.Conclusion Our study results suggest that the decrease of TGF-β1 expression and increase of decorin expression，might reduce the quantity of collagen of periurethral vaginal tissue，and which involved in the pathogenesis of SUI.

Key words：Stress urinary incontinence;Collagen;Decorin;TGF-β1

隨著人口老齡化和人們對生活質(zhì)量要求的提高，壓力性尿失禁成為了婦女常見的一種疾病[1]。壓力性尿失禁的發(fā)生是由于盆底結(jié)締組織和韌帶的支撐力減弱而引起的盆底功能障礙性疾病，故常與盆底其它臟器的功能障礙合并存在。膠原為結(jié)締組織的主要成分，且目前大多數(shù)研究表明，SUI和POP患者其結(jié)締組織膠原的含量均有所改變，且呈減少的趨勢，但其減少的原因尚不清楚。本文通過對SUI患者尿道周圍結(jié)締組織中TGF-β1、DCN mRNA表達水平的檢測及兩者相關性的研究，分析其在SUI發(fā)病中的作用，進一步闡明SUI的發(fā)病機理。

1資料與方法

1.1一般資料2007年4月~2010年1月在佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院及廣州醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的絕經(jīng)后婦女65例，根據(jù)是否存在SUI，分為SUI組（35例）和對照組（30例）。根據(jù)病史、婦科檢查、護墊試驗和尿動力學檢查結(jié)果符合SUI診斷標準者入組SUI組，對照組無盆底器官膨出和尿失禁癥狀。所有入選者近3個月內(nèi)未服用激素類藥物，術后病理結(jié)果證實無子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、功能性卵巢腫瘤等雌激素相關疾病，尿液分析無尿路感染。在征得患者的知情同意后，術中取近宮頸膀胱韌帶處陰道前壁粘膜下筋膜組織1.0cm×1.0cm×0.5cm，量約100mg，迅速置于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2組織總RNA的提取按Trizol試劑盒說明提取組織總RNA。（Trizol Reagent 購自invitrogen 公司）

1.3引物設計與合成RT-PCR引物根據(jù)GenBank中相關基因的序列設計，由上海英駿生物工程公司合成。

1.4 RT-PCR按照Invitrogen公司的SuperScript Ⅲ First-Strand Synthesis System 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將提取的組織總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，在PE9600 PCR儀上進行PCR：96℃2 min預變性，然后按96℃變性30sec，53℃－59℃退火30sec，72℃延伸45sec，進行30個循環(huán)，最后72℃延伸10min。RT-PCR產(chǎn)物用2％瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定。

1.5半定量分析取PCR產(chǎn)物5μl，加6×loading buffer 1μl，2％瓊脂糖凝膠電泳（100V，40min），產(chǎn)物經(jīng)凝膠成像儀和圖像分析系統(tǒng)進行圖像分析，分別測定DCN、TGF-β1和β-actin的A值，并以其比值（DCN/β-actin、TGF-β1/β-actin）表示DCN和TGF-β1 mRNA的相對表達水平。

1.6統(tǒng)計學方法使用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。通過兩樣本t檢驗和雙變量相關分析對結(jié)果進行分析。

2結(jié)果

SUI組患者尿道周圍結(jié)締組織中DCN mRNA表達水平為1.87±0.35，對照組為0.94±0.16，t=11.121，P<0.01，差異有顯著統(tǒng)計學意義（見圖1）。而SUI組中TGF-β1 mRNA表達水平為0.35±0.13，對照組為0.96±0.14，t=－17.270，P<0.01，差異有顯著統(tǒng)計學意義（見圖2）。進一步對SUI組的DCN和TGF-β1的相對灰度值進行線性相關分析，結(jié)果顯示，相關系數(shù)r=－0.431，P<0.05，說明DCN和TGF-β1兩者的mRNA表達水平存在負相關關系。

1，2，3:絕經(jīng)后SUI組患者 4，5，6:絕經(jīng)后對照組患者

圖1 兩組患者DCN mRNA擴增后凝膠電泳結(jié)果

1，2，3:絕經(jīng)后SUI組患者 4，5，6:絕經(jīng)后對照組患者

圖2 兩組患者TGF-β1 mRNA擴增后凝膠電泳結(jié)果

3討論

近年來，關于SUI患者盆底支持組織中膠原蛋白改變的研究較多，目前，多數(shù)研究認為，SUI患者盆底結(jié)締組織中總膠原蛋白含量下降，并認為膠原蛋白數(shù)量的減少導致了韌帶、筋膜等支持結(jié)構(gòu)的松弛，最終導致SUI發(fā)生[2]，而導致SUI患者盆底組織膠原蛋白含量減少機制至今尚不清楚。余燕等研究發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)前后SUI患者陰道前壁組織中膠原含量減少且TGF-β1 mRNA表達水平下降[3]。DCN通過與TGF-β的受體競爭性結(jié)合，起到抑制TGF-β促進膠原蛋白合成的作用，是一種體內(nèi)天然的TGF-β負性調(diào)節(jié)因子，另一方面，DCN能結(jié)合在膠原纖維表面，通過調(diào)整膠原纖維的C－末端，在膠原形成起始階段延遲膠原的組裝，使膠原合成減少，林益彬等研究發(fā)現(xiàn)SUI患者尿道周圍結(jié)締組織中Ⅲ型膠原含量減少，可能是由于組織中DCN表達增強所致進而提示DCN mRNA表達增強可能是SUI發(fā)生的一個原因[4]。

本研究結(jié)果顯示，絕經(jīng)后SUI患者尿道周圍結(jié)締組織TGF-β1 mRNA的表達水平較對照組顯著減少，DCN mRNA的表達水平較對照組顯著升高，差異均具有統(tǒng)計學意義，且兩者呈負相關關系。結(jié)果提示SUI尿道周圍結(jié)締組織中膠原含量的減少，可能是由于DCN生成增加，使TGF-β1的基因表達減少，從而使該部位膠原纖維的生成減少，同時，由于DCN增多使得膠原的組裝延遲，而使膠原蛋白合成減少?？蛇M一步進行相關檢測以了解盆底支持組織中DCN和TGF-β1 蛋白表達水平的改變情況?；诒緦嶒灥慕Y(jié)果，通過抑制盆底支持組織中DCN mRNA的表達，促進TGF-β1 mRNA的表達，是否可起到增加局部膠原含量和提高SUI治愈率的作用，有待于進一步的研究證實。

參考文獻：

[1]宋巖峰，李亞欽，許波.福州市社區(qū)女性尿失禁發(fā)病現(xiàn)狀的分析[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2004，39:257-259.

[2]孫智晶，郎景和，朱蘭.膠原狀態(tài)與壓力性尿失禁的病因?qū)W研究[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2004，5（1）：6-8.

[3]余燕，宋巖峰.壓力性尿失禁患者陰道壁核心蛋白聚糖和轉(zhuǎn)化生長因子mRNA表達水平集膠原含量的研究[J].實用婦產(chǎn)科雜志，2007，23(10):615-617.

[4]林益彬，宋巖峰.壓力性尿失禁患者尿道周圍結(jié)締組織中核心蛋白聚糖mRNA表達水平與III型膠原含量的相關性研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2005，40(8):508-510.

編輯/申磊