平歐榛子油對高血脂大鼠的降脂作用

呂春茂， 陸長穎， 孟憲軍， 董文軒， 魏雅靜， 劉嬋嬋

（沈陽農業(yè)大學 食品學院，遼寧 沈陽 110161）

血脂是指血液中的脂類，主要由血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）及非酯化脂肪酸等組成[1]。高血脂癥是由于脂質代謝或運轉異常導致血清（或血漿）中一種或多種脂質高于正常的病癥，一般表現(xiàn)為高膽固醇血癥、高甘油三酯癥或兩者兼有（混合型高血脂癥）[2-3]。大量的流行病學、臨床和實驗研究皆證實，高血脂癥是動脈粥樣硬化的首要危險因素，與冠心病、腦血管病的發(fā)病率直接相關[4]。臨床上常采用貝特類藥和他汀類藥預防和治療高血脂癥，效果良好，但難免有肌損害、肝損害、腎損害等副作用[5]。因此，在無副作用的前提下，使用生物源功能性提取物預防血脂代謝異常，防治高血脂癥，乃至預防心腦血管疾病，具有重要的理論價值和現(xiàn)實意義[6]。

榛子營養(yǎng)豐富，含脂肪、蛋白質、碳水化合物的量都很可觀[7]，其中油脂質量分數高達60.5%[8]。榛子油的脂肪酸組成是其他植物油脂無法比擬的，如單不飽和脂肪酸質量分數77.7%，多不飽和脂肪酸質量分數9.5%[9]，這些不飽和脂肪酸是人體不能自身合成的，它們一方面可以促進膽固醇的代謝，降低血液中低密度脂蛋白膽固醇和血總膽固醇，另一方面可以軟化血管，維持毛細血管的健康，從而預防和治療高血壓、動脈硬化等心腦血管疾病[10-11]。榛子油是天然的功能性物質，無副作用。

有關榛子油的研究國內近年已有一些報道，但主要集中在榛子栽培[12]和功能性物質提取工藝上[13-14]，對其在降血脂功能上的研究目前尚少。本實驗中通過高血脂癥大鼠病理模型，綜合觀察榛子油對血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、高密度脂蛋白膽固醇 （HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和丙二醛（MDA）的影響，對動脈粥樣硬化指數、冠心指數的影響及對病理切片的觀察，探討榛子油降血脂作用，對天然功能物質降血脂和預防脂肪肝的功效進行探索，為對其進一步研究和開發(fā)提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SD（sprague-dawley）大鼠，體質量 60～80 g，由遼寧長生生物技術有限公司提供，用普通飼料飼養(yǎng)一周適應環(huán)境，飼養(yǎng)地點為沈陽農業(yè)大學SPF級動物實驗室（遼寧省科學技術廳頒發(fā)的實驗動物使用許可證，許可證號：SYXK（遼）2011-0001），環(huán)境條件為溫度20～26℃，相對濕度40%～70%，光照12～24 h，通風良好。

1.2 材料與試劑

平歐榛子，本溪縣三陽大果榛子專業(yè)生產合作社提供，經去殼、烘干、粉碎后過20目篩備用；金龍魚大豆油，益海嘉里有限公司（脂肪酸組成（質量分數）：棕櫚酸7.2%，硬脂酸2.5%，花生酸2.3%，油酸24.2%，亞麻酸6.9%）產品；氯化鈉注射液，辰歐藥業(yè)股份有限公司產品；基礎飼料，沈陽市于洪區(qū)前民動物試驗飼料廠生產；高脂飼料[15]質量分數：78.8%基礎飼料，1%膽固醇，10%蛋黃粉，10%豬油，0.2%牛膽酸鈉；膽固醇、牛膽酸鈉，北京鼎國昌盛生物技術有限公司產品；豬油、蛋黃粉，市售后自制；總膽固醇試劑盒，甘油三酯試劑盒，北京北化康泰臨床試劑有限公司產品；低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒，高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒，長春匯力生物技術有限公司產品；血糖試劑盒，保定長城臨床試劑有限公司產品；丙二醛（MDA）測試盒，南京建成生物工程研究所產品。

1.3 儀器設備

電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司制造；TDL-5000B型離心機，上海安亭科學儀器廠制造；HH-6型數顯恒溫水浴鍋，國華電器有限公司制造；DHG-9070A型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海精宏實驗設備有限公司制造；ST-06型300克多功能粉碎機，永康市帥通工具有限公司制造；KQ-300DE型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司制造；XS-212光學顯微鏡，南京江南永新光學有限公司制造。

1.4 方法

1.4.1 榛子油的制備 稱取過20目篩的榛子仁粉200 g，用正己烷超聲波輔助提取平歐榛子油。提取工藝為：料液比1∶6.3（g/mL），超聲波功率為70%（210 W），提取溫度 47.5℃，提取時間 31.2 min，之后在室溫條件下8 000 r/min離心20 min，取上清液旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑后收集備用[16]。

1.4.2 模型構建與處理 60只SD大鼠，分成兩組，組間體質量無明顯差異。空白對照組10只，給予普通飼料喂養(yǎng)，其余50只為模型組，給予高脂飼料喂養(yǎng)70 d，尾靜脈采血1.0 mL，測定血清總膽固醇（TC）和血清甘油三酯（TG），根據血脂水平，確定高脂模型建立，隨后對高脂模型隨機分組，每組10只，進行灌胃處理，分別為高脂對照組（500 mg/（kg·d）生理鹽水）、豆油試驗組（500 mg/（kg·d））、榛子油低劑量組（50 mg/（kg·d））、榛子油中劑量組（500 mg/（kg·d））、榛子油高劑量組（1 000 mg/（kg·d）），另外空白對照組（500 mg/（kg·d）生理鹽水），經統(tǒng)計學處理，組間無明顯差異。分組當天開始灌胃，連續(xù)灌胃40 d。

1.4.3 指標測定 自灌胃之日計，20 d、40 d后尾靜脈取血1.0 mL，3 000 r/min離心15 min取血清。末次灌胃后禁食12 h，腹腔注射3 mL/kg水合氯醛，腹主動脈取血，擺斜面凝血30 min，3 000 r/min離心15 min，分取血清。

總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）的測定均采用氧化酶法，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的測定采用化學修飾酶法，丙二醛（MDA）的測定采用TBA法，動脈粥樣硬化指數 AI1=（TC-HDL-C）/HDL-C，AI2=LDL-C/HDL-C，冠心指數R-CHR=TC/HDL-C。

1.4.4 肝臟病理切片的制作 取一小塊肝臟放入多聚甲醛固定液中，然后修成4 mm3大小的小塊，讓肝臟小塊與乙醇接觸，然后濾干，再經過浸蠟、包埋、修蠟塊、切片、脫蠟、蘇木精-伊紅（H.E）染色、脫水等步驟，最后放在載玻片上，再將潔凈蓋玻片傾斜放下，以免出現(xiàn)氣泡，這樣封片后即制成永久性玻片標本，供光學顯微鏡觀察使用。

1.4.5 統(tǒng)計學處理 本試驗所有數據由計算機經SPSS17.0統(tǒng)計軟件包中的ANOVA法進行單因素方差分析處理，試驗數據采用平均數±標準差（xˉ±s）表示，組間比較采用t檢驗處理。p>0.05認為無顯著性差異；p＜0.05認為有顯著性差異，有統(tǒng)計學意義；p＜0.01有極顯著差異。

2 結果與分析

2.1 對高脂血癥大鼠血脂的影響

見表1。

表1 榛子油對大鼠血脂參數的影響Table 1 Effects of hazelnut oil on blood lipid parameters in rats

2.1.1 榛子油對總膽固醇的影響 由表1顯示，高脂對照組的TC水平極顯著高于空白對照組 （p＜0.01），表明大鼠高血脂癥造模成功。豆油試驗組、榛子油低劑量組、榛子油中劑量組、榛子油高劑量組都能顯著地降低高脂模型血清中TC水平，分別降低了約13%、13%、16%和16%。豆油及榛子油的3種劑量實驗組都對高脂模型有明顯的降TC效果，但豆油組與榛子油不同劑量組之間差異不顯著，說明榛子油與豆油等具有相似的降TC效果且與油脂的劑量關系不大。

2.1.2 榛子油對甘油三酯的影響 由表1可見，高脂對照組的TG水平極顯著高于空白對照組 （p＜0.01），表明大鼠高血脂癥造模成功。豆油試驗組、榛子油低劑量組、中劑量組、高劑量組都能顯著地降低高脂模型血清中TG水平，分別降低了約24%、24%、50%和47%。豆油及榛子油的3種劑量實驗組都對高脂模型有明顯的降TG效果，然而卻存在劑量的選擇性。其中低劑量和豆油組差異不顯著，中劑量和高劑量組表現(xiàn)出差異極顯著性，說明榛子油的中劑量和高劑量對降低TG呈現(xiàn)出更好的效果。

2.1.3 榛子油對高密度脂蛋白膽固醇的影響 由表1可見，高脂對照組的HDL-C水平極顯著低于空白對照組（p＜0.01），表明大鼠高血脂癥造模成功。豆油試驗組、榛子油低劑量組、中劑量組、高劑量組都能極顯著地提高高脂模型血清中HDL-C水平，分別提高了約28%、32%、41%和44%。豆油及榛子油的3種劑量實驗組都對高脂模型有明顯的升高HDL-C效果，然而卻存在劑量的選擇性。其中低劑量組和豆油組差異不顯著，中劑量組和高劑量組表現(xiàn)出差異顯著性，說明在提高高脂模型血清中HDL-C水平上榛子油的中劑量組和高劑量組表現(xiàn)出更好的效果。

2.1.4 榛子油對低密度脂蛋白膽固醇的影響 由表1可見，高脂對照組的LDL-C水平極顯著高于空白對照組（p＜0.01），表明大鼠高血脂癥造模成功。豆油試驗組，榛子油低劑量組、中劑量組、高劑量組，都能降低高脂模型血清中LDL-C水平，分別降低了約1%、4%、6%和26%。豆油組及榛子油的3種劑量實驗組都對高脂模型有降LDL-C效果，然而卻存在劑量的選擇性。榛子油高劑量組與低劑量組、中劑量組及豆油組存在明顯差異，說明榛子油高劑量組表現(xiàn)出顯著的降LDL-C效用。

2.1.5 榛子油對血糖的影響 由表1可見，高脂對照組的GLU水平極顯著高于空白對照組（p＜0.01），表明大鼠高血脂癥造模成功。豆油試驗組，榛子油低劑量組、中劑量組、高劑量組，都能降低高脂模型血清中GLU水平，分別降低了約4%、10%、13%和24%。豆油組及榛子油的3種劑量實驗組都對高脂模型有降GLU效果，然而卻存在劑量的選擇性。榛子油高劑量組、中劑量組、低劑量組、豆油組間存在明顯差異，榛子油的降GLU效果與劑量呈現(xiàn)明顯正相關。

2.1.6 榛子油對脂質過氧化代謝物丙二醛的影響由表1可見，高脂對照組的MDA水平極顯著高于空白對照組（p＜0.01），表明大鼠高血脂癥造模成功。豆油試驗組，榛子油低劑量組、中劑量組、高劑量組都能降低高脂模型血清中MDA水平，分別降低了約20%、32%、37%和39%。豆油組及榛子油的3種劑量實驗組都對高脂模型有降低脂質過氧化代謝物MDA含量的效果，然而卻存在劑量的選擇性。榛子油高劑量組、低劑量組、中劑量組、豆油組間存在明顯差異，榛子油的降MDA效果與劑量呈現(xiàn)明顯正相關。

2.2 榛子油對動脈粥樣硬化指數AI1、AI2和冠心指數R-CHR的影響

根據大鼠血清中TC、HDL-C和LDL-C的濃度，作者對每組大鼠的動脈粥樣硬化指數AI1=（TCHDL-C）/HDL-C、AI2=LDL-C/HDL-C 和冠心指數R-CHR=TC/HDL-C進行了計算。由表2可見，AI1、AI2與R-CHR均隨著榛子油劑量的增大而顯著降低，且呈劑量依賴性關系，揭示榛子油具有降低高脂大鼠AI1、AI2與R-CHR的效果。

表2 榛子油對大鼠血脂指數的影響Table 2 Effects of hazelnut oil on blood lipid index in rats

2.3 對大鼠肝臟病理變化的影響

各組大鼠處死后進行解剖檢查發(fā)現(xiàn)，高脂對照組肝臟呈灰白色脂肪性變，肝臟邊緣圓鈍，為檳榔肝狀，屬于典型的脂肪肝；而榛子油組肝臟呈淡紅色，脂肪肝程度較高脂對照組輕，雖然也有少許脂肪沉積的油狀感，但其色澤改變不明顯，說明榛子油對肝臟具有一定的保護作用[17]。

H.E染色光鏡觀察結果如圖1所示，空白對照組大鼠肝臟中的肝細胞排列整齊，胞質均勻，細胞核清晰，位于細胞正中，肝中央靜脈周圍；肝小葉結構完整，肝索排列整齊，細胞未見淡染、胞質疏松、空胞樣變、胞質溶解、核濃縮及核破裂等現(xiàn)象，形態(tài)正常。高脂模型組大鼠肝彌漫性脂肪變性，細胞內和細胞間隙有大量的脂滴空泡，這是由于脂肪在肝臟內沉積，經切片處理后在光鏡下呈現(xiàn)空泡狀，水腫，伴點片狀壞死及炎細胞浸潤現(xiàn)象，肝臟中的肝細胞排列混亂，細胞核被擠向一邊，且體積增大，脂肪變性比較明顯，胞漿內充滿大小不等的脂肪滴，肝小葉結構的輪廓尚存，但模糊不清，肝細胞大多呈空胞樣結構，胞質疏松淡染或消失[18]；高倍光學顯微鏡觀察顯示，胞核結構大多異常，可見核溶解，大鼠肝臟出現(xiàn)脂肪變性，顯示大鼠高脂血癥模型組造模成功。高劑量榛子油組，肝結構完整，較正常肝細胞增大，脂變肝細胞數目、空泡狀，水腫，伴點片狀壞死、炎細胞浸潤及核溶解較高脂對照組明顯減少。中劑量榛子油組肝細胞可見脂滴數、空泡狀，水腫，伴點片狀壞死、炎細胞浸潤及核溶解現(xiàn)象較高脂對照組少。低劑量榛子油組、豆油組肝細胞可見脂滴數較高脂對照組少，空泡狀，水腫，伴點片狀壞死、炎細胞浸潤及核溶解現(xiàn)象較高脂對照組減少不明顯。說明榛子油給藥組均可改善高脂大鼠肝細胞脂肪變性的現(xiàn)象，可降低高血脂癥大鼠肝臟脂質沉積，預防脂肪肝的發(fā)生，且具有抗動脈粥樣硬化的作用，并呈現(xiàn)一定的劑量—效應關系。

圖1 不同實驗組大鼠肝臟組織切片F(xiàn)ig.1 Slice of rat liver of different treatment during feeding period

3 結語

本實驗中用平歐榛子油對高血脂模型大鼠進行研究，結果表明在用高脂飼料飼喂70 d后，血清中TC、TG的含量明顯升高，因此高血脂大鼠模型誘導成功。在用大豆油和不同劑量的榛子油灌胃40 d后，豆油試驗組、榛子油低劑量組（50 mg/（kg·d））、中劑量組（500 mg/（kg·d））、高劑量組（1 000 mg/（kg·d））均可使大鼠血清中 TC、TG、LDL-C、GLU、MDA，以及 AI1、AI2、R-CHR 降低，使 HDL-C 提高，與模型組相比有顯著性差異，表明榛子油有明顯的降低血脂的作用，同時可以有效地糾正高血脂癥動物的脂質代謝紊亂，降低高血脂癥大鼠肝臟脂質沉積，預防脂肪肝發(fā)生，對高脂飲食所致高血脂癥具有良好的防治作用[19]。

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