原子吸收光譜法測定血清中鋰含量

盧永翎 杭太俊 李丙英 王 敏 張義華

（1.南京師范大學金陵女子學院，江蘇 南京 210097；2.中國藥科大學藥物分析教研室，江蘇 南京 210009；3.江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，江蘇 徐州 221007）

碳酸鋰是典型的心境穩(wěn)定劑，不僅能抗躁狂發(fā)作，還能預防雙相情感性精神障礙的復發(fā)。碳酸鋰治療窗較窄，美國精神病學協(xié)會推薦有效濃度為0.5～1.2mmol/L，最佳治療范圍為0.6～0.7mmol/L，所以臨床治療時需對患者進行血鋰濃度監(jiān)測，避免出現(xiàn)中毒反應。血清中鋰離子的測定主要采用火焰原子發(fā)射法（AES）［1］、火焰原子吸收法（AAS）［2－4］和離子選擇電極法（ISE）［5］，但已有文獻的報道中樣品均采用直接稀釋的方法測定，血清中的蛋白質及內(nèi)源性物質可能會對測定造成干擾，并且中國國內(nèi)也暫無對碳酸鋰口服制劑的藥動學參數(shù)報道。本試驗擬優(yōu)化樣品預處理條件，去除蛋白，并添加一定量的鉀離子消除電離干擾，建立血清中鋰離子的AAS測定法，并用于碳酸鋰片在中國健康人體內(nèi)單次給藥的藥代動力學研究，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

火焰法原子吸收分光光度計：AAS6000型，江蘇天瑞儀器股份有限公司；

電子天平：BS21S型，德國賽多利斯股份公司。

1.2 藥品與試劑

受試制劑：碳酸鋰片（250mg/片），批號：20080403，江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司；

碳酸鋰對照品：純度＞99%，批號：20081006，江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司；

硝酸：優(yōu)級純，南京化學試劑有限公司；

高氯酸、氯化鉀、氯化鈉：分析純，南京化學試劑有限公司；

水為本實驗室自制去離子水。

1.3 方法

1.3.1 AAS分析條件 波長為670.8nm，燈電流為2mA，狹縫寬度為0.2nm，乙炔氣流量為2.0L/min，空氣流量為5.6L/min。

1.3.2 血清樣品處理方法 精密吸取血清樣品0.8mL置2mL的聚塑離心管中，精密加入1%硝酸（或在標準曲線與質量控制樣品制備時加入相應標準溶液）80μL，再精密加入7%高氯酸溶液0.3mL，渦旋1min，高速（16 000×g）離心1 0min，精密量取上清0.9mL置10mL聚丙烯塑料管中，精密加入氯化鉀溶液3.5mL（以K計1.2mg/mL），搖勻，進行AAS分析。

1.3.3 標準溶液配制

（1）碳酸鋰標準溶液：取碳酸鋰對照品適量（約5 32mg），精密稱定，置50mL燒杯中，滴加稀硝酸（1∶1）直至碳酸鋰完全溶解，過量0.2mL，用去離子水適量稀釋后定量轉移至50mL量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，再用1%硝酸溶液分別定量稀釋配制成鋰離子濃度分別為1.0，2.0，4.0，10.0，20.0，40.0，80.0，120.0μg/mL 的 系 列 標 準 溶液。

1.3.4 血清中鋰離子的AAS專屬性試驗 在本試驗條件下，分別測定空白血清、空白血清添加鋰離子標準溶液（1 μg/mL）及受試者服藥1h后血清樣品的吸光度。

1.3.5 血清中鋰離子的穩(wěn)定性試驗 分別考察血清樣本在－20℃冰箱冷凍保存90d、經(jīng)3次凍融或室溫放置8h，處理后血清樣本室溫放置24h4種條件下的穩(wěn)定性。

1.3.6 分析方法質量驗證 在低、中、高不同濃度水平（0.4，2.0，8.0μg/mL）分別考察了血清樣本的回收率、精密度和準確度。

1.3.7 藥代動力學研究試驗方案 選擇20例健康男性志愿者為受試者，年齡（25.6±2.2）歲，身高（170.5±4.7）cm，體質量（65.0±5.1）kg。于試驗前晚入住I期病房，并禁過夜，早晨空腹口服碳酸鋰片250mg，溫開水250mL送服，于服藥前（0h）和 服 藥后 0.25，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，12，24，36，48和72h采集靜脈血5mL，置于裝有促凝劑的試管中，靜置15min后在4℃條件下離心分取血清，于－20℃保存待測。試驗期間禁止劇烈活動，禁止吸煙、飲酒或含藥物、酒精的飲料等。受試者均簽署知情同意書，試驗方案和知情同意書均經(jīng)上海市精神衛(wèi)生中心倫理委員會審批同意。采用DAS 2.0計算軟件，以非房室模型的統(tǒng)計矩方法處理血藥濃度數(shù)據(jù)并計算參數(shù)。

2 結果與討論

2.1 方法學試驗結果

血清中鋰離子的AAS專屬性試驗結果見表1，表明內(nèi)源性物質對測定無干擾。穩(wěn)定性試驗結果表明：血清樣本在－20℃冰箱冷凍保存90d、經(jīng)3次凍融或室溫放置8h，處理后血清樣本室溫放置24h4種條件下各樣本均未發(fā)生明顯改變，穩(wěn)定性良好。血清樣本的回收率、精密度和準確度結果（見表2）表明，低、中、高不同濃度水平均符合要求。

表1 血清中鋰離子的AAS專屬性試驗Table 1 AAS specificity test of serum samples for the determination of lithium

表2 鋰離子血清樣品分析方法質量驗證結果Table 2 Quality control results for the determination of lithium in human serum （x－±s，n＝5）

2.2 口服碳酸鋰片后血清鋰離子的藥代動力學參數(shù)

20名男性健康受試者單劑量口服250mg碳酸鋰片（以Li計約為47mg）后鋰離子的平均血藥濃度—時間曲線見圖1。鋰離子的主要藥代動力學參數(shù)分別為：Cmax（2.09±0.46）μg/mL；Tmax（1.5±0.8）h；T1/2（21.8±4.9）h；AUC0－72（23.3±4.4）h·μg/mL；AUC0－"（28.1±5.0）h·μg/mL；CL （29.1±4.9）mL/min；Vd（0.8±0.2）L/kg。

2.3 試驗期間的不良事件

試驗期間，20例受試者中有2例發(fā)生了不良事件，主要為口干和尿路感染，程度為輕度。不良事件中有1例被判為不良反應，表現(xiàn)為口干。不良事件在一定時間內(nèi)自行緩解，無需藥物治療。試驗前后實驗室、ECG檢查和生命體征觀察的情況未發(fā)生有臨床意義的改變。

圖1 受試者口服碳酸鋰片后血清鋰的平均濃度—時間曲線（n＝20）Figure 1 The serum concentration-time profiles of lithium in Chinese volunteers with lithium carbonate tablet

2.4 樣品預處理條件優(yōu)化

已有文獻［6］報道，樣本溶血或者放置時間過長均使血鋰濃度偏高，所以血清樣本應避免溶血；血樣采集后須盡快分離血清，冷凍保存待測。本試驗采用高氯酸沉淀蛋白法進行樣品預處理，相對于文獻［2～4］中血清樣品稀釋后直接測定法，供試液中蛋白含量顯著降低，既可使防止樣本間差異導致的測定變異，又減少了內(nèi)源性物質對AAS測定的影響。

在原子吸收光譜中，影響堿金屬元素測定的因素主要為電離干擾，會使吸光度降低，應補充自由e﹣和易解離的元素，如Cs、Rb和K等［7］，推薦使用鉀離子的最終濃度為1～2mg/mL時，可抑制鋰的電離。人血清鉀正常值為3.5～5.5mmol/L，相當于在本試驗條件下鉀濃度為19～3 0μg/mL，取3位不同受試者的空白血清添加2μg/mL鋰離子標準溶液，分別測定不添加鉀、添加鉀終濃度為1mg/mL以及添加鉀終濃度為1.5mg/mL 3種條件下的吸光度，計算相對標準偏差（RSD），結果依次為2.2%，0.5%，0.7%，結果表明當鉀離子終濃度約為1mg/mL時，鋰離子響應穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

3 結論

本試驗通過對血清樣品進行預處理后，減少了內(nèi)源性物質對測定的干擾，該方法的專屬性、精密度、準確度和回收率均良好。采用本法測定20名男性健康受試者單次口服碳酸鋰片后的血鋰濃度，以非房室模型的統(tǒng)計矩方法處理所得藥動學參數(shù)可為中國臨床用藥提供依據(jù)，但是血鋰濃度個體差異較大，在鋰鹽治療時應使給藥方案個體化，并進行血鋰濃度監(jiān)測，確保安全。

1 Palladino A Jr，Longenecker R G，Lesko L J.Lithium test-dose methodology using flame photometry：problems and alternatives［J］.J.Clin Psychiatry，1983，44（1）：7～9.

2 Lee C F，Yang Y Y，Hu O Y.Single dose pharmacokinetic study of lithium in Taiwanese/Chinese bipolar patients［J］.Aust N Z J Psychiatry，1998，32（1）：133～136.

3 Frye M A，Kimbrell T A，Dunn R T，et al.Gabapentin does not alter single-dose lithium pharmacokinetics［J］.J.ClinPsychopharmacol，1998，18（6）：461～464.

4 Emami J，Tavakoli N.Formulation of sustained-release lithium carbonate matrix tablets：influence of hydrophilic materials on the release rate and in vitro-in vivo evaluation［J］.J.Pharm Pharmaceut Sci.，2004，7（3）：338～344.

5 Metzger E，Ammann D，Asper R，et al.Ionselectiveliquidmembraneelectrode for the assay of lithiumin bloodserum ［J］.Anal Chem.，1986，58（1）：132～135.

6 郭新勝，高元法，吳效梅，等.不同條件標本對血鋰濃度測定結果的影響［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2003，23（11）：704～705.

7 李昌厚.原子吸收分光光度計儀器及應用 ［M］.北京：科學出版社，2006：195～201.