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    中藥“連蒲”透皮劑的穩(wěn)定性、刺激性和安全性試驗

    2014-12-20 06:41:52路孝兵鄭業(yè)龍
    四川畜牧獸醫(yī) 2014年2期

    路孝兵,聶 奎,肖 蓉,李 嬌,莫 瓊,鄭業(yè)龍

    (西南大學(xué)動物科技學(xué)院,重慶 北碚 400715)

    中藥“連蒲”乳房炎搽劑是以中草藥連翹和蒲公英為主藥,以50%乙醇為溶劑,并添加以氮酮、丙二醇和薄荷醇為復(fù)合透皮促進劑制成的含高分子有機化合物的供揉搽無破損皮膚表面用的液體制劑。將之涂搽于奶牛乳房皮膚,溶劑部分會迅速揮發(fā),其余部分則形成一層薄膜,膜內(nèi)藥物成分在透皮促進劑的作用下緩慢被乳房皮膚吸收,從而起到治療奶牛乳房炎的作用。由于該制劑直接作用于皮膚,而且添加有氮酮、丙二醇和薄荷醇等化學(xué)物質(zhì),因此,該制劑是否穩(wěn)定,涂搽皮膚后對皮膚是否有刺激性,吸收后是否會引起急性毒性反應(yīng),都有必要進行研究。本試驗首先對“連蒲”乳房炎搽劑的穩(wěn)定性進行考察,同時以成年健康家兔為試驗動物,考察“連蒲”乳房炎搽劑單次和多次給藥分別對完整和受損皮膚的刺激性以及不同給藥劑量的急性毒性。

    1 試驗材料

    1.1 試驗藥物 自制中藥乳房炎搽劑“連蒲”,處方由中藥連翹和蒲公英組成,含生藥量1g/mL,其中添加有3%的氮酮、6%的1,2-丙二醇和4%的薄荷醇作為透皮促進劑,該搽劑系外用透皮吸收藥,可在擠奶前按摩乳房時涂抹在乳房上,通過按摩加快藥物透皮吸收。

    1.2 試驗動物 成年健康家兔共18只,雌雄各半,體重在 1.5±0.2kg。

    1.3 主要試劑 普通培養(yǎng)基平板,自制;無水乙醇(分析純,批號:20090411),硫化鈉(分析純,批號:20090827),均購自成都市科龍化工試劑廠。

    1.4 主要器材 電熱壓力蒸汽滅菌鍋,電熱恒溫培養(yǎng)箱,超凈工作臺,冰箱,PHS-25C酸度計,砂紙,毛剪,一次性注射器,紗布等。

    2 試驗方法

    2.1 穩(wěn)定性試驗

    2.1.1 考察項目及方法。外觀:“連蒲”搽劑應(yīng)為棕黑色、有芳香氣味、分散均勻的液狀溶液;pH值:應(yīng)為6.5~7.5,可用常規(guī)酸度計測定;HPLC法鑒別:應(yīng)檢出連翹苷,參照《中國藥典》2005年版二部中連翹苷的檢測方法測定,含量(標(biāo)示量,%)為每1mL搽劑含連翹苷應(yīng)不少于20mg;微生物限度檢查:搽劑檢出細(xì)菌、霉菌和酵母菌數(shù)均應(yīng)小于100個/mL,銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌不得檢出。

    2.1.2 常溫留樣考察。取玻璃瓶包裝的乳房炎搽劑“連蒲”樣品3瓶置于25℃環(huán)境,分別在1、2、3個月后取樣測定。

    2.1.3 加速試驗考察。取玻璃瓶包裝的乳房炎搽劑“連蒲”樣品6瓶分別于40℃、75%相對濕度(RH)和4℃冰箱中放置,定期在1、2、3個月后取樣測定。

    2.2 皮膚刺激性試驗

    2.2.1 試驗動物的處理與分組。取體重相近的白色家兔8只,隨機分為4組,每組2只。分為完整皮膚組I、II和破損皮膚組III、IV。將家兔背部兩側(cè)毛剪短后,用5%Na2S脫毛約50cm2左右,選脫毛24h后無破損皮膚的家兔作為I、II組試驗兔;III、IV組家兔在消毒皮膚后,用砂紙摩擦皮膚,以滲血為度,作為破損皮膚試驗區(qū)。

    2.2.2 單次給藥的皮膚刺激性試驗。脫毛及破損皮膚后第2d,分別在第I組和第III組家兔左側(cè)脫毛區(qū)涂藥,每次涂搽2.0mL,采用自身左右對照同時在右側(cè)脫毛區(qū)涂2.0mL未添加透皮促進劑的藥物作為陰性對照,蓋上一層紗布,用無刺激性膠布固定。每只動物分籠飼養(yǎng),涂藥后24h用無菌溫水清洗殘留藥物,清洗后分別在 l、24、48、72h時肉眼觀察并記錄涂藥部位有無紅斑和水腫等情況。

    2.2.3 多次給藥的皮膚刺激性試驗。分別在第II組和第IV組家兔左側(cè)脫毛區(qū)涂藥,右側(cè)涂未添加透皮促進劑的藥物,每天涂藥2次,每次2.0mL,涂藥后用滅菌紗布固定,連續(xù)用藥7d。在末次用藥4h后取下紗布,用無菌溫水洗去殘留藥物,觀察并記錄涂抹部位有無紅斑和水腫等情況。

    2.2.4 刺激強度的判定。對涂抹部位有無紅斑和水腫等情況進行評分(見表1),根據(jù)下列公式計算平均積分值,并進行刺激強度評價(見表2)。多次給藥的皮膚刺激性試驗,還需觀察涂抹部位是否有色素沉著、出血點、皮膚粗糙或皮膚菲薄等情況,并觀察試驗兔的活動、飲食、精神狀態(tài)等。連續(xù)觀察一周。

    公式:每組動物平均積分=Σ(紅斑積分+水腫積分)/受試動物數(shù)

    2.3 安全性試驗

    2.3.1 試驗動物的分組與處理。取體重相近的白色家兔10只,隨機分成5組,每組2只。分別是低劑量完整皮膚組I、高劑量完整皮膚組II、低劑量破損皮膚組III、高劑量破損皮膚組IV和對照組V。于給藥前24h,將家兔背部兩側(cè)毛剪短后,用5%Na2S脫毛約50cm2左右。III、IV組家兔在消毒皮膚后,用砂紙摩擦皮膚,以滲血為度,作為破損皮膚試驗區(qū)。

    表1 皮膚刺激性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)

    表2 皮膚刺激性強度評分標(biāo)準(zhǔn)

    2.3.2 不同給藥劑量的皮膚急性毒性試驗。脫毛及破損皮膚后第2d,分別在家兔脫毛區(qū)涂藥,第I組和第III組每次涂抹2.0mL,第II、IV組每次涂抹5.0mL,涂藥后蓋上一層紗布,用無刺激性膠布固定。每只動物分籠飼養(yǎng)。涂藥24h后,用溫水或無刺激溶劑除去殘留的受試藥物,去除受試藥物后1、24、48、72h至第7d,每日觀察并記錄動物的體溫、皮膚、毛發(fā)、眼和黏膜的變化,以及呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等有無中毒表現(xiàn)。若有死亡動物,應(yīng)及時進行尸檢和肉眼觀察,當(dāng)有肉眼可見病變時,應(yīng)進行病理組織學(xué)檢查。

    3 試驗結(jié)果

    3.1 “連蒲”的穩(wěn)定性試驗結(jié)果 中藥“連蒲”乳房炎搽劑的常溫留樣和加速試驗表明,該制劑在常溫(25℃)、高溫(40℃)、低溫(4℃)下放置3個月后,制劑的外觀性狀、pH值、連翹苷含量等檢查結(jié)果與制備初期相比均無明顯變化,且微生物限度檢查合格。

    3.2 “連蒲”的刺激性試驗結(jié)果 皮膚刺激性試驗結(jié)果顯示:I、II組(完整皮膚組)家兔皮膚均未出現(xiàn)紅斑和水腫現(xiàn)象,記0分;III、IV組(破損皮膚組)家兔皮膚均未出現(xiàn)水腫,第III組家兔皮膚未出現(xiàn)紅斑現(xiàn)象,第IV組有1只家兔皮膚出現(xiàn)輕微紅斑現(xiàn)象,但12h內(nèi)很快消退,記1分,組內(nèi)平均積分為(0+0+1+0)/2=0.5,見表3。參照皮膚刺激性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)和皮膚刺激性強度評分標(biāo)準(zhǔn),得出中藥“連蒲”乳房炎搽劑對皮膚無刺激性。

    3.3 “連蒲”的安全性試驗結(jié)果 不同給藥劑量的皮膚急性毒性試驗結(jié)果顯示:各組家兔的采食、體溫、皮膚、毛發(fā)、眼、黏膜、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及四肢活動等狀況均正常,未見中毒或異常癥狀,更未出現(xiàn)死亡情況,說明中藥“連蒲”乳房炎搽劑無急性皮膚毒性,安全性良好。

    表3 “連蒲”對家兔皮膚的刺激性評分

    4 結(jié)論與分析

    4.1 結(jié)論 本試驗通過對中藥“連蒲”乳房炎搽劑的外觀、pH值、連翹苷含量、微生物限度檢查、常溫留樣和加速試驗觀察等項目的穩(wěn)定性進行考察;以成年健康家兔為試驗動物,考察“連蒲”乳房炎搽劑單次和多次給藥分別對完整和受損皮膚的刺激性,以及不同給藥劑量的急性毒性。常溫留樣和加速試驗顯示,該制劑在常溫(25℃)、高溫(40℃)、低溫(4℃)下放置3個月后,其外觀性狀、pH值、連翹苷的含量等檢查結(jié)果與制備初期相比均無明顯變化,且微生物限度檢查合格。皮膚刺激性試驗表明,單次給藥和多次給藥后皮膚均未出現(xiàn)紅斑和水腫;不同給藥劑量的皮膚急性毒性試驗結(jié)果顯示,各組家兔的采食、體溫、皮膚、毛發(fā)、眼、黏膜、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及四肢活動等狀況均正常,未見中毒或異常癥狀,更未出現(xiàn)死亡情況。以上試驗表明中藥“連蒲”乳房炎搽劑在3個月內(nèi)穩(wěn)定,無急性皮膚毒性,且安全性良好。

    4.2 分析 中藥“連蒲”乳房炎搽劑選用的主藥為中草藥連翹和蒲公英。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,在金銀花、連翹和蒲公英三種中草藥中均未發(fā)現(xiàn)有毒成分;該搽劑的溶劑為50%乙醇,無毒無刺激性,而且密閉保存時不易揮發(fā);添加的三種透皮吸收促進劑中,除薄荷醇有輕微刺激作用外,氮酮和丙二醇均是無毒無刺激且不易揮發(fā)的化學(xué)物質(zhì),而薄荷醇在該制劑中的含量僅為4%,其刺激作用極小。因此,中藥“連蒲”乳房炎搽劑足以保證涂搽奶牛乳房皮膚時穩(wěn)定、安全、無刺激性。

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