新楊綠殼蛋雞蛋氨酸需要量的研究

宋華慧 袁 超 張曉昀 嚴(yán)華祥 蔣柏榮 鄒曉庭*

(1.浙江大學(xué)飼料科學(xué)研究所，農(nóng)業(yè)部動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310058;2.上海家禽育種有限公司，上海 201399;3.桐鄉(xiāng)市龍翔街道農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)服務(wù)中心，桐鄉(xiāng) 314500)

近年來，隨著人們對天然保健品需求的迅猛增加，綠殼蛋雞因其豐富的營養(yǎng)價值及特殊的藥用價值逐漸受到人們的關(guān)注。綠殼蛋雞因產(chǎn)綠殼蛋而聞名，是國內(nèi)外罕見的特異性基因群，具有“五黑一綠”的特點(diǎn)。新楊綠殼蛋雞由上海新楊家禽育種中心培育而成，其體型小巧、結(jié)構(gòu)緊湊、行動敏捷、產(chǎn)蛋量低、抗病力強(qiáng)。綠殼蛋雞具有較高的經(jīng)濟(jì)價值和營養(yǎng)價值，已得到育種家廣泛的推廣繁育［1］。飼料原料中蛋氨酸作為家禽玉米-豆粕型飼糧的第一限制性氨基酸，主要存在于動物性蛋白質(zhì)中，而在植物性蛋白質(zhì)中含量較少，且在動物體內(nèi)不能直接合成［2］。蛋氨酸被譽(yù)為“生命性氨基酸”，參與體內(nèi)多種生物化學(xué)反應(yīng)［3］。在生產(chǎn)實(shí)踐中，蛋氨酸過量或缺乏均可影響動物生產(chǎn)性能，如:抑制生長，降低產(chǎn)蛋率，減少胸肉產(chǎn)量，增加生產(chǎn)成本［4］。目前，國內(nèi)關(guān)于綠殼蛋雞的營養(yǎng)需要的研究報道較少，無統(tǒng)一的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)中仍參照褐殼蛋雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制飼糧，可能造成飼料資源的浪費(fèi)和生產(chǎn)成本的增加。袁超等［5］報道育成期綠殼蛋雞飼糧代謝能和粗蛋白質(zhì)營養(yǎng)需要量分別為11.40 MJ/kg和 14.45%，有關(guān)綠殼蛋雞的氨基酸需要量未見報道。為此，本研究旨在以新楊綠殼蛋雞為試驗(yàn)動物，通過研究飼糧中不同水平蛋氨酸對綠殼蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)以及血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UN)和尿酸(UA)含量等指標(biāo)的影響，研究其蛋氨酸的需要量，為制訂綠殼蛋雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)及指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計

選取34周齡產(chǎn)蛋率相近、健康的新楊綠殼父母代蛋雞1 440羽，隨機(jī)分為6組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)60羽。對照組飼喂蛋氨酸水平為0.24%的基礎(chǔ)飼糧，基礎(chǔ)飼糧中能蛋比參照實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1，蛋氨酸添加梯度為0.03%，依據(jù)NRC(1994)蛋雞的蛋氨酸需要量(0.30%)的10%設(shè)定，其余5個試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加 0.03%、0.06%、0.09%、0.12%和0.15%的蛋氨酸，使飼糧中蛋氨酸水平分別達(dá)到 0.27%、0.30%、0.33%、0.36% 和 0.39%。蛋雞采用3層全階梯籠養(yǎng)，機(jī)械通風(fēng)。舍內(nèi)溫度控制在15～20℃，相對濕度為60%～70%。雞舍采用人工照明，每天03:00開燈，19:00關(guān)燈(光照16 h)，光照強(qiáng)度為10 lx。全期自由采食和飲水，按常規(guī)方法免疫與管理。預(yù)試期1周，正試期10周。

1.2 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用蛋氨酸(純度為99%)購自上海金百瑞特生物科技有限公司，試驗(yàn)地點(diǎn)為上海新楊家禽育種有限公司崇明試驗(yàn)站，試驗(yàn)動物為新楊綠殼蛋雞。

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 生產(chǎn)性能

每天記錄各重復(fù)采食量、產(chǎn)蛋數(shù)和蛋重，計算平均日采食量(g/d)、產(chǎn)蛋率(%)、平均蛋重(g)和料蛋比。

1.3.2 蛋品質(zhì)

試驗(yàn)結(jié)束后，以重復(fù)為單位隨機(jī)抽取6枚雞蛋，每組24枚，進(jìn)行蛋品質(zhì)指標(biāo)測定。

蛋品質(zhì)測定采用日產(chǎn)DET 6000蛋品質(zhì)測定儀檢測，主要指標(biāo)有:蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位、蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.3.3 血清生化指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束后，每個重復(fù)隨機(jī)選取2只雞，每組8只，禁食 24 h后稱重，采血，3 000 r/min離心10 min制備血清。血清總蛋白、白蛋白、尿素氮和尿酸含量均采用試劑盒測定，試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

1.3.4 氨基酸表觀消化率

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，從每組的每個重復(fù)中選取2只健康、體況正常的綠殼蛋雞，原來的分組情況不變，采用全收糞法進(jìn)行代謝試驗(yàn)，自由采食和飲水。預(yù)試期2 d，正試期2 d。正試期開始后立即用糞盤收集2 d的排泄物，并記錄2 d的采食量，將每日糞樣剔除羽毛、皮屑后稱重。試驗(yàn)結(jié)束后，將糞樣混合后按總重的1/10～1/50取樣，然后每100 g鮮糞加10%的鹽酸10 mL，以避免糞中氨氮的損失，烘干(65～70℃)至恒重，經(jīng)過24 h充分回潮后稱重，粉碎制成待測樣本，貯存于磨口瓶中備用。飼糧、糞中氨基酸的測定采用張麗英［6］的方法。

氨基酸表觀消化率(%)=100×(食入氨基酸-排泄物中的氨基酸)/食入氨基酸。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，采用SPSS 16.0單因素方差分析(one-way ANOVA)處理數(shù)據(jù)，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。以P＜0.05作為差異顯著的標(biāo)準(zhǔn)。使用 SPSS 16.0中的回歸模型，以產(chǎn)蛋率、料蛋比和蛋白高度作為評價指標(biāo)，對各組的數(shù)據(jù)進(jìn)行二次曲線擬合，根據(jù)二次方程計算需要量。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響

從表2可知，0.27%蛋氨酸水平組的產(chǎn)蛋率顯著高于 0.24%和 0.39%蛋氨酸水平組(P＜0.05)，分別提高了3.75%和3.97%，與其他組無顯著差異(P＞0.05)。0.27%蛋氨酸水平組的料蛋比顯著低于其他組(P＜0.05)，比對照組以及 0.30%、0.33%、0.36%和 0.39%蛋氨酸水平組分別降低了2.99%、2.40%、2.40%、3.56%和 6.88%。0.33%蛋氨酸水平組的平均蛋重顯著高于對照組以及0.36%和 0.39%蛋氨酸水平組(P＜0.05)，與其他組無顯著差異(P＞0.05)。飼糧蛋氨酸水平對平均日采食量無顯著影響(P＞0.05)，其中 0.33%蛋氨酸水平組平均日采食量最高。

2.2 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，蛋白高度和哈氏單位有相似的變化趨勢。0.30%蛋氨酸水平組蛋白高度和哈氏單位顯著高于 0.39%蛋氨酸水平組(P＜0.05)，分別提高了19.31%和9.44%，與其他組差異不顯著(P＞0.05)。飼糧不同水平蛋氨酸對蛋黃顏色、蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度無顯著影響(P＞0.05)，其中0.30%蛋氨酸水平組蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度最大。

2.3 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

從表4可以看出，飼糧蛋氨酸水平對血清總蛋白、白蛋白和尿素氮含量無顯著影響(P＞0.05)，其中0.27%蛋氨酸水平組血清總蛋白和白蛋白含量最高、尿素氮含量最低;0.27%蛋氨酸水平組血清尿酸含量較對照組以及0.36%和0.39%蛋氨酸水平組分別顯著降低了 24.36%、23.21%和22.60%(P＜0.05)，與 0.30%和 0.33%蛋氨酸水平組無顯著差異(P＞0.05)。

2.4 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞氨基酸表觀消化率的影響

由表5可知，0.27%蛋氨酸水平組天冬氨酸的表觀消化率顯著高于0.36%和0.39%蛋氨酸水平組(P＜0.05)，分別提高了 3.81%和 4.45%。0.27%蛋氨酸水平組半胱氨酸的表觀消化率較0.39%蛋氨酸水平組顯著提高了 5.94%(P＜0.05)。0.39%蛋氨酸水平組蛋氨酸的表觀消化率較0.27%和0.30%蛋氨酸水平組分別顯著降低了 5.26%和3.57%(P＜0.05)。不同水平蛋氨酸對其他氨基酸的表觀消化率無顯著影響(P＞0.05)，其中 0.27%蛋氨酸水平組各氨基酸的表觀消化率均最高。

表3 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞蛋品質(zhì)的影響Table 3 Effects of dietary methionine level on egg quality of green-shell laying hens

表4 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞血清總蛋白、白蛋白、尿素氮和尿酸含量的影響Table 4 Effects of dietary methionine level on TP，ALB，UN and UA contents in serum of green shell laying hens

表5 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞氨基酸表觀消化率的影響(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 5 Effects of dietary methionine level on amino acid apparent digestibility in green shell laying hens(air-dry basis) %

2.5 使用回歸模型中的二次曲線擬合分析估計蛋氨酸的需要量

分別以產(chǎn)蛋率、料蛋比和蛋白高度作為評價指標(biāo)，根據(jù)蛋氨酸水平變化做二次曲線擬合分析。以產(chǎn)蛋率為評價指標(biāo)，產(chǎn)蛋期綠殼蛋雞蛋氨酸需要量為 0.26%(回歸方程:Y=-3 000 000X2+15 923X+30.932，R2=0.654 8);以料蛋比為評價指標(biāo)，產(chǎn)蛋期綠殼蛋雞蛋氨酸需要量為0.28%(回歸方 程:Y=18.65X2-10.74X+4.837，R2=0.864 5);以蛋白高度為評價指標(biāo)，產(chǎn)蛋期綠殼蛋雞蛋氨酸需要量為 0.29%(回歸方程:Y=-873 457X2+5 209.2X-2.154 5，R2=0.739 5)。

3 討 論

3.1 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響

Harms等［7］報道飼糧中添加不同水平的蛋氨酸可不同程度地提高蛋雞的產(chǎn)蛋率、采食量和蛋重，但蛋氨酸不是蛋雞生產(chǎn)性能的限制因素。這與本試驗(yàn)結(jié)果略有差異，蛋氨酸對綠殼蛋雞的采食量無顯著影響，當(dāng)?shù)鞍彼崽砑铀匠^0.36%時，綠殼蛋雞的生產(chǎn)性能下降，可能是蛋氨酸添加過量，吸收進(jìn)入肝臟的蛋氨酸量超過肝臟的分解、合成能力，正常分解、合成代謝被破壞，導(dǎo)致各種有毒物質(zhì)不能分解、排除，蓄積在肝臟、腎臟，引起肝臟、腎臟細(xì)胞變性腫大，從而引起蛋雞代謝平衡紊亂［8］。影響采食量的因素有動物種類、飼糧、環(huán)境和飼喂技術(shù)，飼糧因素主要是能量、脂肪、蛋白質(zhì)和氨基酸水平等，其中能量水平起到重要作用，因?yàn)榧仪菥哂休^強(qiáng)的“為能而食”的本能［9］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加蛋氨酸有提高綠殼蛋雞采食量的趨勢，但差異不顯著，這與郭洪杞［10］報道一致。楊寧［11］認(rèn)為蛋重主要受遺傳因素影響，與產(chǎn)蛋日齡、體重、營養(yǎng)水平等因素有關(guān)，影響蛋重的營養(yǎng)因素主要包括能量、蛋白質(zhì)和脂類等。本試驗(yàn)結(jié)果表明飼糧中添加適宜的蛋氨酸可顯著提高蛋重，這與前人研究結(jié)果［12-14］一致，可能是由于飼糧中添加適宜水平的蛋氨酸使氨基酸比例達(dá)到平衡，提高了蛋白質(zhì)的利用率。麻麗坤等［15］和Gomez等［16］研究表明飼糧中添加蛋氨酸可顯著提高產(chǎn)蛋率，降低料蛋比，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，說明飼糧中添加適宜水平的蛋氨酸可改善綠殼蛋雞的生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)分別以產(chǎn)蛋率和料蛋比為評價指標(biāo)時，經(jīng)過二次曲線回歸分析后得出綠殼蛋雞(34～43周齡)蛋氨酸需要量分別為0.26%和0.28%。

3.2 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞蛋品質(zhì)的影響

蛋殼厚度影響蛋雞的產(chǎn)蛋率和破殼率，反映蛋殼的致密程度，也是反映蛋殼質(zhì)量的主要指標(biāo)。蛋殼質(zhì)量主要受遺傳因素和營養(yǎng)水平如鈣、磷、鎂、鋅、錳等礦物質(zhì)和維生素D的影響［17］。蛋黃顏色也是衡量蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，蛋黃顏色越深，表示蛋的品質(zhì)越好。蛋黃顏色主要受遺傳因素和飼糧中的物質(zhì)如葉黃素、鈣和維生素A的影響［18-19］。孫永剛［20］、阮棟等［21］報道蛋氨酸對蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度和蛋黃顏色無顯著影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，與聶偉等［22］報道略有差異，造成這種差異的原因可能是試驗(yàn)動物產(chǎn)蛋日齡不同，其鈣、磷的吸收和利用率不同，同時本結(jié)果也說明蛋氨酸對蛋黃色素沉積無顯著影響。哈氏單位是評價雞蛋蛋白品質(zhì)的重要指標(biāo)。哈氏單位越大說明蛋白越黏稠，蛋品質(zhì)越好［23］。蛋白高度與哈氏單位呈正相關(guān)［24］。Williams［25］報道機(jī)體營養(yǎng)水平不影響蛋白質(zhì)量尤其是哈氏單位。Bunchasak等［26］報道蛋白相對重與蛋重呈正相關(guān)，而蛋白高度隨著蛋氨酸的添加有降低趨勢。這與本試驗(yàn)結(jié)果略有不同。Safaa 等［27］和 Keshavarz［28］報道飼糧中蛋氨酸對雞蛋蛋白高度和哈氏單位無顯著影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果不同，可能是因?yàn)樵囼?yàn)動物品種、產(chǎn)蛋日齡和飼糧蛋氨酸水平不同。本試驗(yàn)中0.30%蛋氨酸水平組可以顯著提高蛋白高度和哈氏單位，這可能是添加蛋氨酸使得飼糧中氨基酸搭配更合理，提高飼糧蛋白質(zhì)利用率。以蛋白高度為評價指標(biāo)時，經(jīng)過二次曲線回歸分析后得出綠殼蛋雞(34～43周齡)蛋氨酸需要量為0.29%。

3.3 飼糧蛋氨酸水平對綠殼蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

機(jī)體蛋白質(zhì)的沉積取決于蛋白質(zhì)的合成、分解代謝速度。血清總蛋白和白蛋白含量是反映機(jī)體蛋白質(zhì)合成能力的重要指標(biāo)［29］。本試驗(yàn)結(jié)果與Maroufyan等［30］報道一致，添加蛋氨酸試驗(yàn)組血清白蛋白和總蛋白含量均較對照組有所提高，說明蛋氨酸可能會促進(jìn)蛋雞機(jī)體蛋白質(zhì)合成，但效果不顯著。當(dāng)動物體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝狀態(tài)發(fā)生變化時，尿素氮的含量也隨之變化。一般情況下，蛋白質(zhì)利用率越低，尿素氮含量越高［31］。尿酸是家禽蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物，血液中尿酸的含量可直接反映機(jī)體蛋白分解代謝水平。血清中尿酸含量升高，機(jī)體排出的氮含量增加，從而會影響機(jī)體氮的沉積［32］。羅清堯等［33］報道蛋氨酸顯著降低肉仔鴨血清尿素氮和尿酸的含量。本試驗(yàn)結(jié)果與上述結(jié)果一致，添加蛋氨酸試驗(yàn)組的血清尿素氮和尿酸含量均低于對照組，這可能是飼糧中氨基酸搭配合理、蛋白質(zhì)利用率提高，使得血清尿素氮和尿酸含量降低。

3.4 綠殼蛋雞的氨基酸表觀消化率和蛋氨酸的需要量

飼糧氨基酸消化率是決定飼糧氨基酸利用率的首要指標(biāo)，其高低取決于飼糧中氨基酸在消化道內(nèi)的消化、吸收狀況，因此，飼糧可消化氨基酸有時也稱可利用氨基酸［34］。孫永剛［20］、張勇等［35］報道蛋氨酸水平對氨基酸表觀消化率無顯著影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果略有不同，可能是因?yàn)楦鞣N氨基酸之間的協(xié)同和拮抗關(guān)系及機(jī)體的營養(yǎng)水平差異使得氨基酸消化、吸收狀況不同。評價氨基酸需要量的方法主要分為析因法和劑量反應(yīng)法:析因法是根據(jù)組織氨基酸組成與機(jī)體氨基酸需要量存在一定相關(guān)性，其從理論上可以客觀地反映動物的氨基酸需要;劑量反應(yīng)法是根據(jù)飼糧中氨基酸水平與生長性能的直接關(guān)系，確定氨基酸的需要量，是目前研究家禽營養(yǎng)采用較多的方法［36］。賀建華等［37］利用析因法研究天府肉鴨氨基酸需要量及其模式，前期肉鴨氨基酸需要量的結(jié)果與北京鴨氨基酸需要值接近(r=0.94)，但后期需要量偏低。計成等［38］利用析因法通過分析北京紅雞的胴體、羽毛、雞蛋的氨基酸組成，建立了幾個不同的理想氨基酸模式。阮棟等［21］利用劑量反應(yīng)法以日產(chǎn)蛋重為評價指標(biāo)，得出開產(chǎn)期麻鴨蛋氨酸需要量為 0.40%。賀高峰等［39］、蔣輝等［40］利用劑量反應(yīng)法，以產(chǎn)蛋率為評價指標(biāo)，分別得出了北京紅雞在不同粗蛋白質(zhì)和代謝能水平下蛋氨酸需要量、真可利用蛋氨酸需要量。評價氨基酸需要量的指標(biāo)主要包括生產(chǎn)性能指標(biāo)、代謝指標(biāo)、血液生化指標(biāo)及免疫指標(biāo)等［20］。郭洪杞［10］、李建明等［12］綜合考慮蛋重、產(chǎn)蛋量、飼料報酬和經(jīng)濟(jì)效益得出山雞和嶺南黃雞產(chǎn)蛋期飼糧中適宜的蛋氨酸水平分別為 0.37%和 0.38%。付國強(qiáng)等［41］等綜合考慮產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率和凈利潤確定京紅I號蛋種雞飼糧適宜蛋氨酸水平為0.43%，賴氨酸水平為0.95%。NRC(1994)推薦白殼蛋雞蛋氨酸和含硫氨基酸需要量分別為300 mg/d，褐殼蛋雞蛋氨酸和含硫氨基酸需要量分別為330和645 mg/d。以上研究結(jié)果因研究方法、環(huán)境因素和試驗(yàn)動物，例如家禽品種、年齡、消化吸收系統(tǒng)發(fā)育狀況和營養(yǎng)水平的差異，使得家禽蛋氨酸需要量不同［36，42］。本試驗(yàn)通過劑量反應(yīng)法得出新楊綠殼蛋雞(34～43周齡)蛋氨酸適宜水平為 0.26%～0.29%，略低于NRC(1994)家禽營養(yǎng)需要推薦量，造成這種差異可能是因?yàn)楸驹囼?yàn)動物為新楊綠殼蛋雞，其體型小巧、產(chǎn)蛋率低、蛋重小，而蛋白質(zhì)和氨基酸利用率較高［1，42］。

4 結(jié)論

①基礎(chǔ)飼糧中添加一定水平的蛋氨酸可顯著提高產(chǎn)蛋期綠殼蛋雞的產(chǎn)蛋率、蛋重、蛋白高度、哈氏單位和血清尿酸含量，降低料蛋比。

② 當(dāng)飼糧代謝能為11.92 MJ/kg、粗蛋白質(zhì)水平為15.60%時，以料蛋比為評價指標(biāo)，產(chǎn)蛋期綠殼蛋雞蛋氨酸需要量為0.28%;以產(chǎn)蛋率為評價指標(biāo)，蛋氨酸需要量為0.26%;以蛋白高度為評價指標(biāo)，蛋氨酸需要量為0.29%。

③ 新楊綠殼蛋雞(34～43周齡)玉米-豆粕型飼糧蛋氨酸適宜需要量為0.26%～0.29%，略低于NRC(1994)家禽營養(yǎng)需要推薦量(0.30%)。

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