慢性乙型肝炎患者細(xì)胞免疫功能對抗病毒療效的影響

西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院傳染科 （西安710061） 沙小瑩 趙英仁

為了觀察HBeAg陽性慢性乙型肝炎（CHB）患者細(xì)胞免疫功能對抗病毒療效的影響，我們自2010年2月至2012年2月從我院門診及住院患者中選擇60例HBeAg陽性的男性慢性乙型肝炎患者，按HBeAg水平高低分為兩組，分別檢測兩組患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）表達(dá)率及外周血T淋巴細(xì)胞亞群并對兩組患者同時(shí)應(yīng)用阿德福韋酯聯(lián)合苦參素膠囊治療，現(xiàn)將觀察結(jié)果報(bào)告如下

對象與方法

1 研究對象 根據(jù)2010年版的《慢性乙型肝炎防治指南》中慢性乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇HBeAg陽性的男性慢性乙型肝炎患者，入選患者年齡18－60歲，（平均年齡38．8歲）入選患者血清 HBsAg、HBeAg、抗－HBC持續(xù)陽性6個(gè)月以上，HBeAg測定值1300－50S／CO，HBV DNA≥1×105拷貝／ml，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）≥2ULN，血清總膽紅素＜34umol／L，排除肝硬化或重疊其它肝炎病毒感染者及伴有其它嚴(yán)重軀體疾病者。入選患者按HBeAg測定值分為A、B兩組，A組30例 HBeAg測定值600－50S／CO （均值323±186），B組30例 HBeAg測定值1300－600S／CO（均值896±258），兩組均值比較P＜0．01。A、B兩組患者平均年齡，平均病程，均值比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，兩組患者均經(jīng)過短期住院治療之后出院門診治療。

2 方 法 A、B兩組病人均口服阿德福韋酯膠囊10mg／次，每日1次（正大天晴公司生產(chǎn)），口服苦參素膠囊200mg／次，1日3次（正大天晴公司生產(chǎn)）。療程均為24個(gè)月。治療開始后兩組患者均每3個(gè)月檢測1次乙肝五項(xiàng)定量、HBV DNA、肝功能、腎功能，比較兩組患者治療24個(gè)月時(shí)HBeAg轉(zhuǎn)陰率、HBeAg血清轉(zhuǎn)換率、HBV DNA轉(zhuǎn)陰率。肝功能、腎功能檢測用日本產(chǎn)全自動生化分析儀、乙肝五項(xiàng)定量檢測用電化學(xué)發(fā)光法，試劑由雅培公司提供），HBVDNA（實(shí)時(shí)熒光PCR法，試劑由上海復(fù)星醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司提供）

流式細(xì)胞儀檢測：入組患者治療前均檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群 CD3＋CD4＋數(shù)量、CD3＋CD8＋數(shù)量、CD4＋／CD8＋、CD4＋CD 25＋Foxp3＋調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞表達(dá)率。T淋巴細(xì)胞亞群CD4、CD8、CD3標(biāo)記按常規(guī)方法進(jìn)行，CD4＋CD25＋Foxp3＋調(diào)節(jié)性T細(xì)胞標(biāo)記按試劑盒說明書進(jìn)行操作，上機(jī)前將樣本充分混勻。檢測儀器及試劑：FACSCCalibur流式細(xì)胞儀為美國BD公司產(chǎn)品；CD4、CD8、CD3熒光標(biāo)記單克隆抗體為美國BD公司產(chǎn)品。余試劑均購自美國eBioscience公司。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18．0軟件，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述。符合方差齊性的兩樣本均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；P＜0．05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 治療前兩組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果 見表1。

2 治療24個(gè)月時(shí)兩組患者血清乙肝病毒標(biāo)記物指標(biāo)變化結(jié)果 見表2。

表1 治療前兩組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果

表2 兩組患者血清乙肝病毒標(biāo)記物指標(biāo)變化

討 論

慢性乙型肝炎患者機(jī)體存在不同程度的細(xì)胞免疫缺陷［1］，固有免疫的NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、抗原提呈細(xì)胞及獲得性免疫的乙肝病毒（HBV）特異輔助性T細(xì)胞、特異殺傷性T細(xì)胞數(shù)量嚴(yán)重不足，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量異常增高，致使患者機(jī)體清除HBV的免疫反應(yīng)受到明顯抑制。目前研究認(rèn)為HBeAg在誘導(dǎo)CHB患者機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受、形成HBV持續(xù)感染中發(fā)揮重要作用［2］。研究顯示HBeAg陽性的慢性乙型肝炎患者的外周血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）的比例明顯高于HBeAg陰性的患者，體外實(shí)驗(yàn)的證據(jù)表明慢性HBV感染者外周血Treg細(xì)胞可以抑制CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞的活化，抑制HBV特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答［3，4］。研究還顯示Treg細(xì)胞可以直接抑制NKT細(xì)胞的功能，也可通過轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）被他等細(xì)胞因子抑制NKT和NK細(xì)胞的功能［5］。Sakaguchi已證明CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細(xì)胞是一類在抑制自身免疫反應(yīng)中起主要作用的Treg細(xì)胞，被認(rèn)為是誘導(dǎo)自身耐受的關(guān)鍵，而且這種抑制作用有劑量依賴性。HBeAg可直接通過干擾抗原提呈細(xì)胞分泌炎癥因子白細(xì)胞介子－12（IL－12）和IL－6，干擾抗原識別誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化，而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可以通過細(xì)胞－細(xì)胞直接接觸及釋放LI－10和TGFβ等抑制因子抑制HBV抗原特異殺傷性T淋巴細(xì)胞的增殖和活化，HBeAg陽性的CHB患者外周血中幾乎檢測不到HBV特異性殺傷性T細(xì)胞。HBV特異性T淋巴細(xì)胞的功能低下是造成HBV感染慢性化的主要原因。HBeAg導(dǎo)致Th1／Th2失衡，HBeAg刺激Th2細(xì)胞因子分泌增加，以及通過Fas－FasL介導(dǎo)的機(jī)制清除Th1細(xì)胞，引起Th1／Th2失衡，表現(xiàn)為CD4＋／CD8＋細(xì)胞比例下降，HBV特異殺傷性T淋巴細(xì)胞／抑制性T細(xì)胞比例明顯下降，明顯降低了清除HBV的細(xì)胞免疫反應(yīng)，形成持續(xù)的HBV攜帶或慢性乙型肝炎狀態(tài)。Milich等分別用HBeAg和HBcAg免疫小鼠發(fā)現(xiàn)HBcAg免疫后的小鼠表現(xiàn)為Th1反應(yīng)類型，HBeAg免疫后的小鼠表現(xiàn)為Th2反應(yīng)類型，研究證實(shí)HBeAg血清濃度在10ng／ml時(shí)即可引發(fā)T淋巴細(xì)胞耐受。故患者血清HBeAg水平的高低與患者機(jī)體清除HBV的細(xì)胞免疫功能高低有關(guān)。對各種抗乙肝病毒治療藥物的病毒學(xué)應(yīng)答和e抗原血清學(xué)轉(zhuǎn)換有良好的預(yù)測價(jià)值。

本組臨床觀察結(jié)果：治療24個(gè)月時(shí)，A組HBeAg血清轉(zhuǎn)陰率50．00%，B組20．00%，兩組比較P＜0．01；A組 HBeAg血清轉(zhuǎn)換率43．33%，B組16．66%，兩組比較P＜0．01；A組 HBV DNA轉(zhuǎn)陰率93．33%，B組HBV DNA轉(zhuǎn)陰率73．33%，兩組轉(zhuǎn)陰率比較P＜0．05；HBeAg測定值較低的A組患者的CD4＋／CD8＋比值1．32±0．51，明顯高于 HBeAg測定值較高的B組0．91±0．36，兩組比值比較P＜0．05；A 組CHB患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)率4．21±1．26%，B組6．78±1．83%，A、B兩組Treg細(xì)胞表達(dá)率比較，P＜0．05。進(jìn)一步證實(shí)患者血清HBeAg水平的較低組患者機(jī)體清除HBV的細(xì)胞免疫功能好于HBeAg水平的較高組患者。更易取的抗病毒治療的滿意效果。

［1］ 張定風(fēng)．乙型肝炎的免疫發(fā)病機(jī)制及治療靶位的探討［J］．中華肝臟病雜志．2012，20（1）：71－74．

［2］ Ferrari C，Missale G，Boni C，et al．Immunopathogenesis of hepatitis B．［J］．Hepatology，2003，39（1）：36－42．

［3］ Stoop JN，Van－DerMolen RG，Baan CCet al．Regulatory T cells contribute to the impaired immune response in patients with chronic hepatitis B virus infection ［J］．Hepatology，2005，41：771－778．

［4］ Xu D P，F(xiàn)u J L，Jin L et al．Circulating and liver resident CD4＋CD25＋regulatory T cells actively influence the antiviral immune response and disease progression in patients with hepatitis B ［J］．J Immunol，2006，177（1）：739－747．

［5］ 劉 新，婁金麗，陳 煜，等．肝纖維化小鼠調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的變化及意義 ［J］．中華肝臟病雜志，2014，22（4）：277－280．