人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的實驗?zāi)Ｐ脱芯?/h1>
2014-12-16 08:28:40延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院延安716000韓繼明朱文俠阮彩蓮
陜西醫(yī)學(xué)雜志 2014年8期
延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院（延安716000） 韓繼明 楊 玲 王 璐 朱文俠 阮彩蓮
目前臨床上長距離的神經(jīng)缺損修復(fù)一般采用自體神經(jīng)橋接術(shù)，但自體神經(jīng)的來源有限，因此取材方便、無排斥反應(yīng)的神經(jīng)便成為外周神經(jīng)修復(fù)研究的熱點。近年來具有多向分化潛能的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Human Umbilical Cord Blood Derived Mesenchymal Stem Cells，HUMSC）受到學(xué)者的關(guān)注，體外實驗證實其可以分化為神經(jīng)細(xì)胞［1］。筆者對坐骨神經(jīng)缺損套管模型鼠注入HUMSC懸液，大鼠坐骨神經(jīng)損傷得到一定程度的修復(fù)，現(xiàn)報告如下。
材料和方法
1 材料選擇 60只成年健康SD大鼠，雌雄各半，體重200±20g。人羊膜取自健康、足月、順產(chǎn)的胎兒胎盤。使用DF12培養(yǎng)基培養(yǎng)純化的HUMSC，傳代過程中使用胰蛋白酶消化。使用日本光電MEB－9200K誘發(fā)電位／肌電圖測量系統(tǒng)檢測神經(jīng)電生理活動。
2 方 法
2．1 人羊膜的制備：超凈臺內(nèi)從胎盤上分離出羊膜，用0．1%NH4OH處理羊膜后剪成2．0cm×2．5cm小塊，放入500ml無菌PBS中，－20℃儲存?zhèn)溆?。室溫融化后使用?/p>
2．2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞純化傳代培養(yǎng)：純化的HUMSC傳代過程：PBS清洗，加胰蛋白酶消化2～3min，加培養(yǎng)基終止消化，1000r／min離心4min，加培養(yǎng)基重懸，傳至新的培養(yǎng)液。傳代至3～4代后，配制1×106個細(xì)胞／ml的細(xì)胞懸液備用［2］。
2．3 坐骨神經(jīng)缺損套管模型鼠的制備和處理：所有大鼠經(jīng)烏拉坦麻醉后，對預(yù)手術(shù)部位進行消毒。股后部作斜行25mm的切口，鈍性分離，暴露、游離坐骨神經(jīng)，將制備好的羊膜于梨狀肌下緣5mm處搭在坐骨神經(jīng)上，縫合兩端神經(jīng)外膜和羊膜，切除6～8mm的坐骨神經(jīng)，使其自然回縮后達10mm的間隙即可。間隙和羊膜形成一段羊膜腔。60只坐骨神經(jīng)缺損套管模型鼠隨機分為三組：空白對照組、實驗組、標(biāo)準(zhǔn)對照組。A組大鼠不采取其他措施，B組大鼠羊膜腔內(nèi)注入HUMSC懸液，C組大鼠實施自體坐骨神經(jīng)橋接術(shù)。觀察記錄大鼠一般的身體狀態(tài)。12周后，使用日本光電MEB－9200K誘發(fā)電位／肌電圖測量系統(tǒng)檢測神經(jīng)電生理活動；取雙側(cè)腓腸肌，使用分析天平對其濕重進行稱量［3］。
3 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)錄入SPSS 17．0軟件中處理，使用±s表示計量資料，t檢驗進行組間比較，P＜0．05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié) 果
術(shù)后12周兩組大鼠神經(jīng)電生理檢測結(jié)果見表1、2。
表1 12周后各組大鼠腓腸肌濕重比較（±s）
表1 12周后各組大鼠腓腸肌濕重比較（±s）
注：與空白對照組比較，＊P＜0．05
組 別 術(shù)側(cè)濕重（g） 健側(cè)濕重（g） 術(shù)側(cè)濕重／健側(cè)濕重（%）A組0．37±0．04 1．58±0．08 29．20±0．46 B組 0．40±0．03 1．61±0．06 43．86±0．51＊C組 0．53±0．06 1．62±0．06 55．64±0．42＊
表2 12周后兩組大鼠神經(jīng)電生理檢測結(jié)果（±s）
表2 12周后兩組大鼠神經(jīng)電生理檢測結(jié)果（±s）
注：與標(biāo)準(zhǔn)對照組比較，＊P＜0．05
組 別 潛伏期（ms） 傳導(dǎo)速度（m／s） 波幅（mV）2．56±0．40 12．38±0．38 4．01±0．32 C組 2．49±0．51 13．72±0．41 4．25±0．43 P值 ＞0．05 ＞0．05 ＞B組0．05
討 論
HUMSC能進行多向分化，增值能力強。分娩后的新鮮人臍帶內(nèi)含有大量的HUMSC，取材方便，不存在倫理和法律的約束；HUMSC不引起排斥反應(yīng)，主要是因為其對 HLA－DR、CD80、CD40不表達，無 HLA抗原，不能引起T細(xì)胞活化［4］。新鮮的胎盤在母體內(nèi)有胎盤屏障的保護，細(xì)菌、病毒污染的概率極低。同時高增殖性、低免疫原性等特點使HUMSC成為治療外周神經(jīng)損傷替代療法的研究熱點［5］。
本研究中使用人羊膜構(gòu)建的羊膜腔含有多種可以促進損傷的細(xì)胞再生和HUMSC轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細(xì)胞的物質(zhì)。羊膜內(nèi)含有大量的糖蛋白和硫酸乙酞肝素等，無細(xì)胞成分，自身免疫性很低。其含有的多種物質(zhì)為再生的神經(jīng)軸索提供基架，引導(dǎo)神經(jīng)生長［6］。
實驗中各組大鼠術(shù)后術(shù)側(cè)腓腸肌都出現(xiàn)不同程度的萎縮，是因為神經(jīng)受損后，肌肉生長依賴的神經(jīng)末梢釋放的某些營養(yǎng)物質(zhì)分泌缺乏。B組和C組大鼠的術(shù)側(cè)濕重／健側(cè)濕重比值和A組比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），實驗組的各神經(jīng)電生理指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)對照組比較，潛伏期長，傳導(dǎo)速度慢，波幅小，但無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0．05），說明HUMSC抑制了肌肉萎縮，促進神經(jīng)細(xì)胞再生，分化為神經(jīng)細(xì)胞使神經(jīng)電生理得到恢復(fù)。神經(jīng)傳導(dǎo)性的有無是評價神經(jīng)功能的一項關(guān)鍵指標(biāo)，傳導(dǎo)速度的快慢、波幅的大小可以輔助判斷神經(jīng)恢復(fù)的程度［7］。
HUMSC修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的確切機制還不明了，推測與以下機制有關(guān)：①在體內(nèi)微環(huán)境的影響下替代神經(jīng)元，橋接斷端，使神經(jīng)恢復(fù)功能；②改善神經(jīng)損傷引起的水腫，炎癥反應(yīng)；③能促進神經(jīng)元合成代謝，增加蛋白質(zhì)的合成；④合成和分泌某些營養(yǎng)因子，促進神經(jīng)元的生長，防止肌肉萎縮［8］。
［1］ 張彩順，呂 剛，張基仁，等．無細(xì)胞神經(jīng)移植物復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損［J］．中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13（28）：5429－5432．
［2］ 單 偉，王長輝，秦書儉，等．人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的實驗研究［J］．中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，40（8）：696－698．
［3］ 柳 菁，許 超，宇 麗，等．兩種培養(yǎng)體系條件下人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞的分化［J］．中國組織工程研究，2012，16（41）：7625－7630．
［4］ 張芬熙，洪 艷，梁文妹．人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及超微結(jié)構(gòu)特點研究［J］．貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，38（1）：5－9．
［5］ 趙玉金，李瑤琛，賴潔娟，等．大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)條件的優(yōu)化及生物學(xué)特性［J］．第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2010，32（20）：2163－2167．
［6］ Mi－Ae S，Jong JH，Jung－Woo L，et al．Human umbilical cord blood－derived mesenchymal stem cells promote regeneration of crush－injured rat sciatic nerves［J］，Neural Regeneration Research，2012，7（26）：2018－2027．
［7］ 易 智，劉時璋，史 軍，等．人源性臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療骨關(guān)節(jié)炎的實驗研究［J］．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2012，42（10）：1308－1309．
［8］ 劉時璋，凌 鳴，易 智，等．間充質(zhì)干細(xì)胞在兔骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔內(nèi)移植的研究［J］．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2013，42（11）：1450－1452．
猜你喜歡
高頻超聲評估2型糖尿病患者腓腸肌病變的診斷價值分子診斷與治療雜志(2023年8期)2023-09-07 12:00:34 產(chǎn)前超聲診斷羊膜帶綜合征2例中國臨床醫(yī)學(xué)影像雜志(2022年5期)2022-07-26 07:11:58 miR-490-3p調(diào)控SW1990胰腺癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(2021年3期)2021-07-22 07:39:10 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體在口腔組織再生中的研究進展昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(2021年5期)2021-07-22 07:32:50 產(chǎn)前診斷羊膜腔穿刺術(shù)改期的原因分析現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)(2021年3期)2021-07-16 07:36:30 間充質(zhì)干細(xì)胞治療老年衰弱研究進展現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)(2021年2期)2021-03-29 05:32:44 三七總皂苷對A549細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化(2021年10期)2021-03-02 05:52:12 石氏三色膏治療小腿腓腸肌損傷60例中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:40 腓腸肌損傷的MRI臨床診斷研究磁共振成像(2015年5期)2015-12-23 08:52:53 經(jīng)腹羊膜腔灌注術(shù)治療未足月胎膜早破的臨床效果觀察中國當(dāng)代醫(yī)藥(2015年7期)2015-03-01 02:01:18
延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院（延安716000） 韓繼明 楊 玲 王 璐 朱文俠 阮彩蓮
目前臨床上長距離的神經(jīng)缺損修復(fù)一般采用自體神經(jīng)橋接術(shù)，但自體神經(jīng)的來源有限，因此取材方便、無排斥反應(yīng)的神經(jīng)便成為外周神經(jīng)修復(fù)研究的熱點。近年來具有多向分化潛能的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Human Umbilical Cord Blood Derived Mesenchymal Stem Cells，HUMSC）受到學(xué)者的關(guān)注，體外實驗證實其可以分化為神經(jīng)細(xì)胞［1］。筆者對坐骨神經(jīng)缺損套管模型鼠注入HUMSC懸液，大鼠坐骨神經(jīng)損傷得到一定程度的修復(fù)，現(xiàn)報告如下。
材料和方法
1 材料選擇 60只成年健康SD大鼠，雌雄各半，體重200±20g。人羊膜取自健康、足月、順產(chǎn)的胎兒胎盤。使用DF12培養(yǎng)基培養(yǎng)純化的HUMSC，傳代過程中使用胰蛋白酶消化。使用日本光電MEB－9200K誘發(fā)電位／肌電圖測量系統(tǒng)檢測神經(jīng)電生理活動。
2 方 法
2．1 人羊膜的制備：超凈臺內(nèi)從胎盤上分離出羊膜，用0．1%NH4OH處理羊膜后剪成2．0cm×2．5cm小塊，放入500ml無菌PBS中，－20℃儲存?zhèn)溆?。室溫融化后使用?/p>
2．2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞純化傳代培養(yǎng)：純化的HUMSC傳代過程：PBS清洗，加胰蛋白酶消化2～3min，加培養(yǎng)基終止消化，1000r／min離心4min，加培養(yǎng)基重懸，傳至新的培養(yǎng)液。傳代至3～4代后，配制1×106個細(xì)胞／ml的細(xì)胞懸液備用［2］。
2．3 坐骨神經(jīng)缺損套管模型鼠的制備和處理：所有大鼠經(jīng)烏拉坦麻醉后，對預(yù)手術(shù)部位進行消毒。股后部作斜行25mm的切口，鈍性分離，暴露、游離坐骨神經(jīng)，將制備好的羊膜于梨狀肌下緣5mm處搭在坐骨神經(jīng)上，縫合兩端神經(jīng)外膜和羊膜，切除6～8mm的坐骨神經(jīng)，使其自然回縮后達10mm的間隙即可。間隙和羊膜形成一段羊膜腔。60只坐骨神經(jīng)缺損套管模型鼠隨機分為三組：空白對照組、實驗組、標(biāo)準(zhǔn)對照組。A組大鼠不采取其他措施，B組大鼠羊膜腔內(nèi)注入HUMSC懸液，C組大鼠實施自體坐骨神經(jīng)橋接術(shù)。觀察記錄大鼠一般的身體狀態(tài)。12周后，使用日本光電MEB－9200K誘發(fā)電位／肌電圖測量系統(tǒng)檢測神經(jīng)電生理活動；取雙側(cè)腓腸肌，使用分析天平對其濕重進行稱量［3］。
3 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)錄入SPSS 17．0軟件中處理，使用±s表示計量資料，t檢驗進行組間比較，P＜0．05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié) 果
術(shù)后12周兩組大鼠神經(jīng)電生理檢測結(jié)果見表1、2。
表1 12周后各組大鼠腓腸肌濕重比較（±s）
表1 12周后各組大鼠腓腸肌濕重比較（±s）
注：與空白對照組比較，＊P＜0．05
組 別 術(shù)側(cè)濕重（g） 健側(cè)濕重（g） 術(shù)側(cè)濕重／健側(cè)濕重（%）A組0．37±0．04 1．58±0．08 29．20±0．46 B組 0．40±0．03 1．61±0．06 43．86±0．51＊C組 0．53±0．06 1．62±0．06 55．64±0．42＊
表2 12周后兩組大鼠神經(jīng)電生理檢測結(jié)果（±s）
表2 12周后兩組大鼠神經(jīng)電生理檢測結(jié)果（±s）
注：與標(biāo)準(zhǔn)對照組比較，＊P＜0．05
組 別 潛伏期（ms） 傳導(dǎo)速度（m／s） 波幅（mV）2．56±0．40 12．38±0．38 4．01±0．32 C組 2．49±0．51 13．72±0．41 4．25±0．43 P值 ＞0．05 ＞0．05 ＞B組0．05
討 論
HUMSC能進行多向分化，增值能力強。分娩后的新鮮人臍帶內(nèi)含有大量的HUMSC，取材方便，不存在倫理和法律的約束；HUMSC不引起排斥反應(yīng)，主要是因為其對 HLA－DR、CD80、CD40不表達，無 HLA抗原，不能引起T細(xì)胞活化［4］。新鮮的胎盤在母體內(nèi)有胎盤屏障的保護，細(xì)菌、病毒污染的概率極低。同時高增殖性、低免疫原性等特點使HUMSC成為治療外周神經(jīng)損傷替代療法的研究熱點［5］。
本研究中使用人羊膜構(gòu)建的羊膜腔含有多種可以促進損傷的細(xì)胞再生和HUMSC轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細(xì)胞的物質(zhì)。羊膜內(nèi)含有大量的糖蛋白和硫酸乙酞肝素等，無細(xì)胞成分，自身免疫性很低。其含有的多種物質(zhì)為再生的神經(jīng)軸索提供基架，引導(dǎo)神經(jīng)生長［6］。
實驗中各組大鼠術(shù)后術(shù)側(cè)腓腸肌都出現(xiàn)不同程度的萎縮，是因為神經(jīng)受損后，肌肉生長依賴的神經(jīng)末梢釋放的某些營養(yǎng)物質(zhì)分泌缺乏。B組和C組大鼠的術(shù)側(cè)濕重／健側(cè)濕重比值和A組比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），實驗組的各神經(jīng)電生理指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)對照組比較，潛伏期長，傳導(dǎo)速度慢，波幅小，但無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0．05），說明HUMSC抑制了肌肉萎縮，促進神經(jīng)細(xì)胞再生，分化為神經(jīng)細(xì)胞使神經(jīng)電生理得到恢復(fù)。神經(jīng)傳導(dǎo)性的有無是評價神經(jīng)功能的一項關(guān)鍵指標(biāo)，傳導(dǎo)速度的快慢、波幅的大小可以輔助判斷神經(jīng)恢復(fù)的程度［7］。
HUMSC修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的確切機制還不明了，推測與以下機制有關(guān)：①在體內(nèi)微環(huán)境的影響下替代神經(jīng)元，橋接斷端，使神經(jīng)恢復(fù)功能；②改善神經(jīng)損傷引起的水腫，炎癥反應(yīng)；③能促進神經(jīng)元合成代謝，增加蛋白質(zhì)的合成；④合成和分泌某些營養(yǎng)因子，促進神經(jīng)元的生長，防止肌肉萎縮［8］。
［1］ 張彩順，呂 剛，張基仁，等．無細(xì)胞神經(jīng)移植物復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損［J］．中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13（28）：5429－5432．
［2］ 單 偉，王長輝，秦書儉，等．人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的實驗研究［J］．中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，40（8）：696－698．
［3］ 柳 菁，許 超，宇 麗，等．兩種培養(yǎng)體系條件下人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞的分化［J］．中國組織工程研究，2012，16（41）：7625－7630．
［4］ 張芬熙，洪 艷，梁文妹．人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及超微結(jié)構(gòu)特點研究［J］．貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，38（1）：5－9．
［5］ 趙玉金，李瑤琛，賴潔娟，等．大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)條件的優(yōu)化及生物學(xué)特性［J］．第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2010，32（20）：2163－2167．
［6］ Mi－Ae S，Jong JH，Jung－Woo L，et al．Human umbilical cord blood－derived mesenchymal stem cells promote regeneration of crush－injured rat sciatic nerves［J］，Neural Regeneration Research，2012，7（26）：2018－2027．
［7］ 易 智，劉時璋，史 軍，等．人源性臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療骨關(guān)節(jié)炎的實驗研究［J］．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2012，42（10）：1308－1309．
［8］ 劉時璋，凌 鳴，易 智，等．間充質(zhì)干細(xì)胞在兔骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腔內(nèi)移植的研究［J］．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2013，42（11）：1450－1452．
猜你喜歡
分子診斷與治療雜志(2023年8期)2023-09-07 12:00:34
中國臨床醫(yī)學(xué)影像雜志(2022年5期)2022-07-26 07:11:58
昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(2021年3期)2021-07-22 07:39:10
昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(2021年5期)2021-07-22 07:32:50
現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)(2021年3期)2021-07-16 07:36:30
現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)(2021年2期)2021-03-29 05:32:44
世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化(2021年10期)2021-03-02 05:52:12
中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:40
磁共振成像(2015年5期)2015-12-23 08:52:53
中國當(dāng)代醫(yī)藥(2015年7期)2015-03-01 02:01:18
