HPLC法檢測(cè)乳制品中2種甜味劑和3種防腐劑

趙貞，萬(wàn)鵬，李翠枝，邵建波，岳虹，李素琴

(內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司，呼和浩特010010)

0 引 言

苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸是常用的食品防腐劑，由于其既能抑制多種微生物繁殖，又具良好的殺菌作用，被廣泛應(yīng)用于罐頭、果醬、汽水、乳制品和肉制品中[1-6]。糖精鈉和安賽蜜為人工合成甜味劑，由于低熱量和高甜度等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于干果、糕點(diǎn)、飲料和雪糕等食品中。據(jù)研究報(bào)道每日攝取少量的防腐劑和甜味劑對(duì)人體沒(méi)有危害，但是過(guò)量時(shí)卻會(huì)對(duì)人體的臟器造成危害，甚至有得癌癥的隱患，特別是對(duì)老人、孕婦、小孩危害更為嚴(yán)重[7-12]。因此國(guó)內(nèi)外對(duì)防腐劑和甜味劑的最大使用量有嚴(yán)格的規(guī)定，我國(guó)也出臺(tái)了相應(yīng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[13-16]，但不能同時(shí)檢測(cè)以上5種物質(zhì)，如果全部檢測(cè)耗時(shí)、費(fèi)力。為了方便乳制品中防腐劑和甜味劑日常監(jiān)測(cè)，本文建立了同時(shí)測(cè)定以上5種物質(zhì)的檢測(cè)方法，該方法快速、操作簡(jiǎn)單、成本低、重復(fù)性好，滿足對(duì)乳制品中多種甜味劑和防腐劑同時(shí)監(jiān)測(cè)的要求。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 材料

甲醇（色譜純）；乙酸胺（色譜純）；乙酸鉛（優(yōu)級(jí)純）；草酸鉀（優(yōu)級(jí)純）；磷酸氫二鈉（優(yōu)級(jí)純）；氫氧化鈉(優(yōu)級(jí)純)；碳酸氫鈉(優(yōu)級(jí)純)。安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品。

1.2 儀器與設(shè)備

液相色譜儀（Agilent 1260）帶紫外檢測(cè)器，分析天平，振蕩器。

1.3 溶液的配制

安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取0.1000 g安賽蜜，用水溶解并定容100 mL容量瓶中，配制成安賽蜜質(zhì)量濃度為1 g/L的儲(chǔ)備溶液。

糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取0.0851 g經(jīng)120℃烘干4 h后的糖精鈉，加水溶解并定容100 mL容量瓶中，配制成糖精鈉含量1 g/L的儲(chǔ)備溶液。

苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)各0.1000 g，加5 mL碳酸氫鈉溶液(20 g/L)，加熱溶解，加水定容100 mL容量瓶中，配制成苯甲酸和山梨酸質(zhì)量濃度分別為1 g/L的儲(chǔ)備溶液。

脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.1000 g脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，用10 mL質(zhì)量濃度為20g/L的氫氧化鈉溶液溶解，用水定容100 mL容量瓶中，配制成脫氫乙酸質(zhì)量濃度為1 g/L的儲(chǔ)備溶液。

乙酸鉛溶液：稱取乙酸鉛200 g，溶解于1 000 mL水中。

草酸鉀—磷酸氫二鈉溶液：稱取草酸鉀30 g，磷酸氫二鈉70 g，溶解于1 000 mL水中。

1.4 色譜條件

測(cè)定波長(zhǎng)：230 nm；色譜柱為Welch AQ－C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 uL；柱溫為25℃；流動(dòng)相：A為甲醇，B為乙酸胺水溶液 （濃度為0.02 mol/L），A在0～20 in質(zhì)量分?jǐn)?shù)由15%變?yōu)?5%，20.01 min變?yōu)?5%，20.01～30 min保持15%。

1.5 樣品處理

液態(tài)奶、酸奶和冷飲樣品：稱取15 g樣品于50 mL容量瓶中，加乙酸鉛和草酸鉀磷酸氫二鈉溶液各4 mL，加水定容,振蕩混勻,靜止數(shù)分鐘，用干燥濾紙過(guò)濾,再經(jīng)濾膜(0.45 μm)過(guò)濾，上機(jī)。

乳飲料樣品：稱取15 g樣品于50 mL容量瓶中，加乙酸鉛和草酸鉀磷酸氫二鈉溶液各10 mL，加水定容,振蕩混勻,靜止數(shù)分鐘，用干燥濾紙過(guò)濾,再經(jīng)濾膜(0.45 μm)過(guò)濾，上機(jī)。

1.6 結(jié)果計(jì)算

式中：X為試樣中被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(μg/g)；C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品溶液中被測(cè)物質(zhì)質(zhì)量濃度(mg/L)；V為樣品溶液定容體積(mL)；m為稱取樣品的質(zhì)量(g)。

2 結(jié)果分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及譜圖

安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)工作液：將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用水依次稀釋成質(zhì)量濃度為1.0， 2.0，5.0，8.0，10.0 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，溶液經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，上機(jī)測(cè)定。

圖1為甜味劑和防腐劑混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜。由圖1可以看出，5種物質(zhì)完全分離，保留時(shí)間分別為：5.701，8.128，15.847，19.930，20.951 min。

圖2為牛奶樣品加入5種混標(biāo)的色譜。由圖2可以看出，5種物質(zhì)與雜質(zhì)峰完全分離，無(wú)干擾，可準(zhǔn)確定性、定量檢測(cè)。

甜味劑和防腐劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性關(guān)系如表1所示。由表1可以看出，5種物質(zhì)濃度和峰面積呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.9980。

圖1 甜味劑和防腐劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液HPLC色譜

圖2 牛奶中加入5種標(biāo)品的HPLC色譜

表1 甜味劑和防腐劑線性關(guān)系

2.2 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

在液態(tài)奶、酸奶和冷飲的空白樣品中加入不同濃度的甜味劑和防腐劑，平行測(cè)定3次，得出回收率結(jié)果如表2所示。

表2 液態(tài)奶、酸奶和冷飲中添加回收率結(jié)果

由表2可以看出，本方法測(cè)定不同乳制品中安賽蜜回收率為92.0%～117.7%，變異系數(shù)2.26%～6.37%；糖精鈉回收率為91.9%～99.5%，變異系數(shù)2.96%～5.89%；苯甲酸回收率為89.8%～105.7%，變異系數(shù)2.21%～5.69%；山梨酸回收率為93.6%～100.7%，變異系數(shù)2.55%～5.57%；脫氫乙酸回收率為80.0%～96.3%，變異系數(shù)2.34%～6.85%；5種物質(zhì)均可達(dá)到分析要求。

2.3 線性范圍和檢出限

本方法中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的定量檢出限為1 mg/kg，線性范圍1～100 mg/kg。

3 結(jié) 論

在本方法的條件下，5種防腐劑和甜味劑與乳制品其他干擾雜質(zhì)峰完全分離，可以準(zhǔn)確定量檢測(cè)，該方法操作簡(jiǎn)便、快速，回收率和重復(fù)性均符合要求，可以節(jié)約檢測(cè)成本并提高檢測(cè)效率，適合乳制品中防腐劑和甜味劑的日常監(jiān)控。

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