乳腺癌血流動(dòng)力學(xué)的超聲表現(xiàn)與微血管密度及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的研究

夏玉光，鄧 莉，張成雙，丁寶維

(中國(guó)人民解放軍第425醫(yī)院超聲科，海南三亞 572000)

乳腺癌是一種常見的惡性腫瘤，僅次于宮頸癌，隨著近幾年人們對(duì)生育觀念的改變及工作壓力的增大，乳腺癌有逐年升高的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著婦女的生命健康。有研究報(bào)道［1－2］，2008年女性乳腺癌的發(fā)病率為 60/10 萬(wàn)，病死率為70%～80%。眾所周知，彩色多普勒超聲主要檢測(cè)腫瘤內(nèi)血管生成、血流動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)及血管的形態(tài)［3］。微血管密度(Microvessel Density，MVD)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是采用免疫組化方法檢測(cè)微血管生成的定量指標(biāo)，主要是檢測(cè)新生血管的數(shù)量，是目前公認(rèn)的評(píng)價(jià)腫瘤生成的可靠指標(biāo)［4－5］。因此本研究應(yīng)用彩色多普勒超聲觀察乳腺癌患者的血流動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)、免疫組化方法檢測(cè)MVD及VEGF評(píng)價(jià)乳腺癌的血管生成情況，為臨床治療提供具有價(jià)值的決策，盡最大努力減少乳腺癌的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集本院普外科2011年至2013年10月術(shù)前經(jīng)彩色多普勒超聲診斷為乳腺腫塊，并在術(shù)后可由病理科獲得病理切片的56例患者，年齡在35～62歲，并經(jīng)病理證實(shí)為乳腺癌。

1.2 彩色多普勒超聲檢查 采用阿洛卡F75彩色超聲診斷儀，探頭頻率3～9 Hz。患者采取仰臥位，充分暴露乳房，對(duì)乳房腫塊的部位、形態(tài)、邊緣是否整齊、回聲是否均勻等情況進(jìn)行探查。并獲取穩(wěn)定的血流頻譜圖像，根據(jù)Adler的判斷標(biāo)準(zhǔn)將血流分級(jí):0級(jí):病灶內(nèi)無(wú)血流顯示;Ⅰ級(jí):少量血流，1～2個(gè)點(diǎn)狀或細(xì)短棒狀血流信號(hào);Ⅱ級(jí):中量血流，3～4個(gè)點(diǎn)狀或1條主要的較長(zhǎng)血流信號(hào);Ⅲ級(jí):豐富血流，5個(gè)以上的點(diǎn)狀或是2條較長(zhǎng)的血流信號(hào)。

1.3 免疫組化方法測(cè)量 MVD及 VEGF 購(gòu)買鼠抗人CD34單克隆抗體、鼠抗人VEGF單克隆抗體、S-P試劑盒和陽(yáng)性切片。采用S-P法，步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3.1 MVD計(jì)數(shù) 參照Weidner血管計(jì)數(shù)法，首先選擇在低倍鏡(100)，先選取染色最明顯且較清楚的區(qū)域，再高倍鏡下觀察被染成棕色的細(xì)胞及細(xì)胞叢(作為1個(gè)血管)。以5個(gè)高倍鏡的均數(shù)表示血管數(shù)。

1.3.2 VEGF染色結(jié)果 在癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)VEGF蛋白陽(yáng)性呈棕色，根據(jù)染色情況將程度進(jìn)行分級(jí):未被染色的腫瘤細(xì)胞為VEGF陰性;6%～10%的腫瘤細(xì)胞著色(+);11%～50%的腫瘤細(xì)胞著色(++);＞50%的腫瘤細(xì)胞著色(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的處理，首先對(duì)研究對(duì)象的一般特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，然后對(duì)乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織MVD和VEGF的關(guān)系，以及采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，最后分別計(jì)算三者及三者聯(lián)合的敏感性和特異性。所有檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，P ＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌患者一般特征的描述 本研究共納入56例患者，其中術(shù)前經(jīng)超聲發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者24例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。腫瘤血流情況為:0級(jí)9個(gè)，Ⅰ級(jí)18個(gè)，Ⅱ級(jí)16個(gè)，Ⅲ級(jí)13個(gè)。術(shù)后病理發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌26例，浸潤(rùn)性小葉癌14例，導(dǎo)管內(nèi)癌9例，黏液癌7例。年齡均在35～62歲，平均年齡為(44.32±2.85)歲。腫瘤位于左側(cè)30例，右側(cè)26例。根據(jù)免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MVD≤20的患者為22例，≥21的為34例;VEGF陽(yáng)性患者44例，VEGF陰性患者12例，見表1。

表1 乳腺癌患者術(shù)前血流動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織MVD的比較

2.2 乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織MVD的比較 乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動(dòng)力學(xué)與術(shù)后組織MVD的比較發(fā)現(xiàn)，血流動(dòng)力學(xué)與MVD之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.700，P=0.013)。血流動(dòng)力學(xué)分級(jí) 0 級(jí)及Ⅰ級(jí)時(shí)，MVD≤20的患者顯著多于MVD≥21的患者;而血流動(dòng)力學(xué)分級(jí)為Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)時(shí)，MVD≤20的患者顯著小于MVD≥21的患者。

2.3 乳腺癌患者術(shù)前血流動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織VEGF的比較 乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動(dòng)力學(xué)與術(shù)后組織VEGF的比較發(fā)現(xiàn)，血流動(dòng)力學(xué)與VEGF之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.993，P=0.046)。血流動(dòng)力學(xué)分級(jí) 0 級(jí)時(shí)，VEGF陽(yáng)性的患者顯著多于VEGF陰性的患者;而血流動(dòng)力學(xué)分級(jí)為Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)，VEGF陽(yáng)性的患者也占較大的比例，見表2。

表2 乳腺癌患者術(shù)前血流動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織VEGF的比較

2.4 三種指標(biāo)以及三者聯(lián)合診斷乳腺癌的比較 術(shù)前超聲表現(xiàn)、術(shù)后組織MVD及VEGF三者聯(lián)合診斷乳腺癌的敏感性比單一方法診斷顯著增高，但特異度低于單一指標(biāo)，其中超聲檢查的特異度最高。聯(lián)合診斷的準(zhǔn)確性(90.34%)也較高，見表3。

表3 三種診斷方法以及三者聯(lián)合診斷乳腺癌的比較(%)

3 討論

本研究資料表明，乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動(dòng)力學(xué)與術(shù)后組織MVD和VEGF之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血流動(dòng)力學(xué)分級(jí)為Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)時(shí)，MVD≥21和VEGF陽(yáng)性的患者均占較大的比例。這就說(shuō)明血流動(dòng)力學(xué)分級(jí)越大，MVD計(jì)數(shù)和VEGF陽(yáng)性的患者就越多。

如其他實(shí)體腫瘤一樣，乳腺癌的生長(zhǎng)也需要新生血管的生成，而血管生成是指在血管生成因子的刺激下，微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞增殖周期，通過(guò)芽生方式形成新生毛細(xì)血管的過(guò)程［6－7］，生成程度可由MVD計(jì)數(shù)來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。而VEGF是一種細(xì)胞因子，由腫瘤細(xì)胞分泌，并作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，以增加血管的通透性，使血管內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外滲，進(jìn)一步促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)［8－9］。本研究的結(jié)果就可以表明，VEGF誘發(fā)腫瘤新生血管生長(zhǎng)，使腫瘤MVD個(gè)數(shù)增加，血流供應(yīng)豐富，血流速度增加。

彩色多普勒超聲是評(píng)價(jià)腫瘤患者血流動(dòng)力學(xué)無(wú)創(chuàng)便捷的方法，而且也是診斷乳腺癌首選方法。而且隨著近幾年超聲技術(shù)的發(fā)展，可根據(jù)超聲探及多少不等的血流信號(hào)，而且敏感性較高。而病灶部位MVD密集且血流豐富的原因可能是［10－11］腫瘤血液循環(huán)的建立主要是在腫瘤細(xì)胞分泌的各種血管生成因子的誘導(dǎo)下，毛細(xì)血管開始朝向腫瘤部位發(fā)展，形成更多的新血管，但是腫瘤血管與正常結(jié)構(gòu)的血管并不一致，最主要的特點(diǎn)是分支較多，并且缺乏彈性，這樣就會(huì)使腫瘤出的血流量增大。

但本研究在術(shù)前行超聲發(fā)現(xiàn)有9例患者病灶處無(wú)血流信號(hào)，但是MVD計(jì)數(shù)≥21卻有3例，VEGF陽(yáng)性者有4例，這就說(shuō)明超聲檢查的靈敏性不如免疫組化方法，當(dāng)然也可能是由超聲儀器的靈敏度和操作者的熟練程度所致，或者是因?yàn)楸狙芯考{入的例數(shù)較少，而且進(jìn)行的回顧性研究，對(duì)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)術(shù)前超聲特異度較高，是因?yàn)槌晫?duì)乳腺組織結(jié)構(gòu)顯示清晰，可以準(zhǔn)確測(cè)量腫塊內(nèi)部及周圍的血流信號(hào)［12］;三者聯(lián)合診斷乳腺癌的敏感性較高，原因是超聲可以在術(shù)前對(duì)腫瘤血管生成情況及血流狀態(tài)進(jìn)行診斷，MVD及VEGF也可以在術(shù)后通過(guò)切片可以發(fā)現(xiàn)病灶的血管生成情況，并且MVD密集程度和VEGF染色情況可以說(shuō)明腫瘤血管生成的情況，這就表明聯(lián)合應(yīng)用這三項(xiàng)指標(biāo)可以為患者的診斷、治療及預(yù)后提供有效的臨床信息，更可以最大程度地降低復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。

綜上所述，超聲及免疫組化分析(MVD及VEGF)在乳腺癌診斷中具有重要價(jià)值，三者聯(lián)合應(yīng)用可進(jìn)一步提高診斷可靠性和準(zhǔn)確性，故值得推廣。

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