消炎痛凝膠劑中歐前胡素含量測定的研究

朱艷華++王興剛++郭欣++閻雪瑩

摘 要：目的 建立高效液相色譜法測定消炎痛凝膠劑中歐前胡素含量的方法。方法 甲醇-水（55：45）為流動相；檢測波長：300 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃。結(jié)果 本法可測定歐前胡素的含量，其在0.8～16 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.53%；RSD為1.82%。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確，可作為消炎痛凝膠劑的含量測定方法。

關(guān)鍵詞：凝膠劑 歐前胡素 高效液相色譜法

中圖分類號：R286 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）06（a）-0214-02

Determination of Imperatorin in Xiaoyantong Gel

ZHU Yanhua WANG Xinggan GUO Xin YAN Xueying

（Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin，Heilongjiang，150040）

Abstract：Objective：To establish a HPLC method for determination of imperatorin in Xiaoyantong gel.Methods：Mobile phase was methanol-water（55：45）.Detection wavelength：300nm.Flow rate：1.0mL min-1.Column temperature：30℃.Results：The content of imperatorin is determined by this method，while the linear relation was good.The average recovery was 99.53%.The RSD was 1.82%.Conclusions：This method is simple，accurate and can be used for determination of Xiaoyantong gel.

Key words：Gel Imperatorin HPLC

消炎痛凝膠劑是由白芷浸膏、薄荷腦等藥組成。具有消炎止痛的功效，臨床上主要用于治療肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、腰腿痛、跌打損傷及網(wǎng)球肘引起的腫痛。為了有效控制消炎痛凝膠劑的質(zhì)量，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-4]采用高效液相色譜法建立了其主要藥味白芷中歐前胡素的含量測定方法，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（LC-2010 AHT，日本島津公司）；消炎痛凝膠劑（自制，批號：20130912、20130913、20130914、20130915、20130916）；歐前胡素對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號： 110826-201013）；甲醇為色譜純；水為超純水；其他所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：（250 nm×4.6 nm，5 ?m）；流動相：甲醇-水（55∶45）；檢測波長：300 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；理論塔板數(shù)不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

取歐前胡素對照品，加甲醇制成每1 mL含100 ?g的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取凝膠劑約1g，精密稱定，置具塞玻璃試管中，加0.1 mol·L-1鹽酸0.1 mL，用甲醇定容至刻度，超聲30 min，取出后補(bǔ)加甲醇至刻度，用0.45 ?m的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品的溶液。

2.4 陰性溶液的制備

按處方比例稱取除白芷浸膏外的其他藥物，按照供試品溶液的制備方法制備陰性供試品溶液。

2.5 干擾試驗(yàn)

照上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，歐前胡素對照品、供試品在9 min左右出現(xiàn)吸收峰，陰性樣品無干擾。

2.6 線性關(guān)系考察

吸取歐前胡素對照品溶液，加入甲醇制備成濃度分別為0.8、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μg·mL-1的溶液。分別進(jìn)樣10 ?L，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理得回歸方程：A=1.6×105C-14356，R2=0.9995，表明歐前胡素在0.8～16 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取消炎痛凝膠劑（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，照上述色譜條件，分別在第0、12、24、36、48、60、72 h進(jìn)樣，每個時間點(diǎn)進(jìn)樣3次，測得峰面積積分值，RSD為2.2%。結(jié)果表明供試液在72 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 精密度試驗(yàn)

取本品（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液液10 μL，進(jìn)樣6次，分別記錄峰面積積分值，RSD為1.9%。結(jié)果表明此方法的日內(nèi)精密度良好，符合含量測定的要求。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，照上述色譜條件重復(fù)測定3次，結(jié)果表明該法測定歐前胡素含量重復(fù)性良好，RSD為1.57%。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的本品（批號：20130912）9份，每份約0.1g精密加入歐前胡素對照品1 mL，濃度分別為12 ?g·mL-1、10 ?g·mL-1、8 ?g·mL-1，每個濃度三份，按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)行含量測定，并計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.53%；RSD為1.82%，加樣回收率符合要求，表明該方法準(zhǔn)確。

2.11 樣品的測定

按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，取供試品溶液和對照品溶液，分別進(jìn)樣，測定5批樣品中異歐前胡素的含量，結(jié)果平均含量為0.1692 mg·g-1，RSD為0.18%（表1）。

3 討論

3.1 流動相的選擇

通過對乙腈-水，甲醇-水等多個流動相系統(tǒng)，以及甲醇-水的多個比例進(jìn)行了考察，結(jié)果表明甲醇-水（55∶45）系統(tǒng)作為流動相，供試品色譜圖中歐前胡素與其它峰能夠達(dá)到很好的分離。因此選擇該系統(tǒng)作為流動相。

3.2 提取溶劑的選擇

試驗(yàn)中曾經(jīng)選用丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇進(jìn)行提取，結(jié)果以甲醇提取測得的含量較高且分離度好，乙醇提取測得的含量雖高，但有一些雜質(zhì)峰的分離不好，故選用甲醇作為樣品前處理溶劑。

3.3 超聲提取時間選擇

研究比較了超聲提取10、20、30、40 min，結(jié)果表明超聲30 min歐前胡素提取率高于10、20 min，并與40 min提取率基本相同，故本試驗(yàn)采取了超聲30 min的方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 馬開，秦文杰.HPLC測定痛可停膠囊中歐前胡素和異歐前胡素含量[J].中成藥，2003，25（10）：801-803.

[2] 王洪志，李惠芬，周靜，等.HPLC測定元胡止痛片中歐前胡素和異歐前胡素[J].中草藥，2007，38（7）：1018-1019.

[3] 胡華杰，樓招歡，呂圭源，等.HPLC測定不同產(chǎn)地白芷飲片中歐前胡素和異歐前胡素的含量[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，34（3）：418.

[4] 劉偉明，王金榮，高曉杰.HPLC法測定復(fù)方羊角片歐前胡素[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2008，3（11）：134-135.endprint

摘 要：目的 建立高效液相色譜法測定消炎痛凝膠劑中歐前胡素含量的方法。方法 甲醇-水（55：45）為流動相；檢測波長：300 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃。結(jié)果 本法可測定歐前胡素的含量，其在0.8～16 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.53%；RSD為1.82%。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確，可作為消炎痛凝膠劑的含量測定方法。

關(guān)鍵詞：凝膠劑 歐前胡素 高效液相色譜法

中圖分類號：R286 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）06（a）-0214-02

Determination of Imperatorin in Xiaoyantong Gel

ZHU Yanhua WANG Xinggan GUO Xin YAN Xueying

（Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin，Heilongjiang，150040）

Abstract：Objective：To establish a HPLC method for determination of imperatorin in Xiaoyantong gel.Methods：Mobile phase was methanol-water（55：45）.Detection wavelength：300nm.Flow rate：1.0mL min-1.Column temperature：30℃.Results：The content of imperatorin is determined by this method，while the linear relation was good.The average recovery was 99.53%.The RSD was 1.82%.Conclusions：This method is simple，accurate and can be used for determination of Xiaoyantong gel.

Key words：Gel Imperatorin HPLC

消炎痛凝膠劑是由白芷浸膏、薄荷腦等藥組成。具有消炎止痛的功效，臨床上主要用于治療肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、腰腿痛、跌打損傷及網(wǎng)球肘引起的腫痛。為了有效控制消炎痛凝膠劑的質(zhì)量，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-4]采用高效液相色譜法建立了其主要藥味白芷中歐前胡素的含量測定方法，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（LC-2010 AHT，日本島津公司）；消炎痛凝膠劑（自制，批號：20130912、20130913、20130914、20130915、20130916）；歐前胡素對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號： 110826-201013）；甲醇為色譜純；水為超純水；其他所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：（250 nm×4.6 nm，5 ?m）；流動相：甲醇-水（55∶45）；檢測波長：300 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；理論塔板數(shù)不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

取歐前胡素對照品，加甲醇制成每1 mL含100 ?g的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取凝膠劑約1g，精密稱定，置具塞玻璃試管中，加0.1 mol·L-1鹽酸0.1 mL，用甲醇定容至刻度，超聲30 min，取出后補(bǔ)加甲醇至刻度，用0.45 ?m的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品的溶液。

2.4 陰性溶液的制備

按處方比例稱取除白芷浸膏外的其他藥物，按照供試品溶液的制備方法制備陰性供試品溶液。

2.5 干擾試驗(yàn)

照上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，歐前胡素對照品、供試品在9 min左右出現(xiàn)吸收峰，陰性樣品無干擾。

2.6 線性關(guān)系考察

吸取歐前胡素對照品溶液，加入甲醇制備成濃度分別為0.8、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μg·mL-1的溶液。分別進(jìn)樣10 ?L，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理得回歸方程：A=1.6×105C-14356，R2=0.9995，表明歐前胡素在0.8～16 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取消炎痛凝膠劑（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，照上述色譜條件，分別在第0、12、24、36、48、60、72 h進(jìn)樣，每個時間點(diǎn)進(jìn)樣3次，測得峰面積積分值，RSD為2.2%。結(jié)果表明供試液在72 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 精密度試驗(yàn)

取本品（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液液10 μL，進(jìn)樣6次，分別記錄峰面積積分值，RSD為1.9%。結(jié)果表明此方法的日內(nèi)精密度良好，符合含量測定的要求。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，照上述色譜條件重復(fù)測定3次，結(jié)果表明該法測定歐前胡素含量重復(fù)性良好，RSD為1.57%。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的本品（批號：20130912）9份，每份約0.1g精密加入歐前胡素對照品1 mL，濃度分別為12 ?g·mL-1、10 ?g·mL-1、8 ?g·mL-1，每個濃度三份，按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)行含量測定，并計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.53%；RSD為1.82%，加樣回收率符合要求，表明該方法準(zhǔn)確。

2.11 樣品的測定

按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，取供試品溶液和對照品溶液，分別進(jìn)樣，測定5批樣品中異歐前胡素的含量，結(jié)果平均含量為0.1692 mg·g-1，RSD為0.18%（表1）。

3 討論

3.1 流動相的選擇

通過對乙腈-水，甲醇-水等多個流動相系統(tǒng)，以及甲醇-水的多個比例進(jìn)行了考察，結(jié)果表明甲醇-水（55∶45）系統(tǒng)作為流動相，供試品色譜圖中歐前胡素與其它峰能夠達(dá)到很好的分離。因此選擇該系統(tǒng)作為流動相。

3.2 提取溶劑的選擇

試驗(yàn)中曾經(jīng)選用丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇進(jìn)行提取，結(jié)果以甲醇提取測得的含量較高且分離度好，乙醇提取測得的含量雖高，但有一些雜質(zhì)峰的分離不好，故選用甲醇作為樣品前處理溶劑。

3.3 超聲提取時間選擇

研究比較了超聲提取10、20、30、40 min，結(jié)果表明超聲30 min歐前胡素提取率高于10、20 min，并與40 min提取率基本相同，故本試驗(yàn)采取了超聲30 min的方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 馬開，秦文杰.HPLC測定痛可停膠囊中歐前胡素和異歐前胡素含量[J].中成藥，2003，25（10）：801-803.

[2] 王洪志，李惠芬，周靜，等.HPLC測定元胡止痛片中歐前胡素和異歐前胡素[J].中草藥，2007，38（7）：1018-1019.

[3] 胡華杰，樓招歡，呂圭源，等.HPLC測定不同產(chǎn)地白芷飲片中歐前胡素和異歐前胡素的含量[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，34（3）：418.

[4] 劉偉明，王金榮，高曉杰.HPLC法測定復(fù)方羊角片歐前胡素[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2008，3（11）：134-135.endprint

摘 要：目的 建立高效液相色譜法測定消炎痛凝膠劑中歐前胡素含量的方法。方法 甲醇-水（55：45）為流動相；檢測波長：300 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃。結(jié)果 本法可測定歐前胡素的含量，其在0.8～16 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.53%；RSD為1.82%。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確，可作為消炎痛凝膠劑的含量測定方法。

關(guān)鍵詞：凝膠劑 歐前胡素 高效液相色譜法

中圖分類號：R286 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）06（a）-0214-02

Determination of Imperatorin in Xiaoyantong Gel

ZHU Yanhua WANG Xinggan GUO Xin YAN Xueying

（Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin，Heilongjiang，150040）

Abstract：Objective：To establish a HPLC method for determination of imperatorin in Xiaoyantong gel.Methods：Mobile phase was methanol-water（55：45）.Detection wavelength：300nm.Flow rate：1.0mL min-1.Column temperature：30℃.Results：The content of imperatorin is determined by this method，while the linear relation was good.The average recovery was 99.53%.The RSD was 1.82%.Conclusions：This method is simple，accurate and can be used for determination of Xiaoyantong gel.

Key words：Gel Imperatorin HPLC

消炎痛凝膠劑是由白芷浸膏、薄荷腦等藥組成。具有消炎止痛的功效，臨床上主要用于治療肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、腰腿痛、跌打損傷及網(wǎng)球肘引起的腫痛。為了有效控制消炎痛凝膠劑的質(zhì)量，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-4]采用高效液相色譜法建立了其主要藥味白芷中歐前胡素的含量測定方法，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（LC-2010 AHT，日本島津公司）；消炎痛凝膠劑（自制，批號：20130912、20130913、20130914、20130915、20130916）；歐前胡素對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號： 110826-201013）；甲醇為色譜純；水為超純水；其他所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：（250 nm×4.6 nm，5 ?m）；流動相：甲醇-水（55∶45）；檢測波長：300 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；理論塔板數(shù)不得低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

取歐前胡素對照品，加甲醇制成每1 mL含100 ?g的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取凝膠劑約1g，精密稱定，置具塞玻璃試管中，加0.1 mol·L-1鹽酸0.1 mL，用甲醇定容至刻度，超聲30 min，取出后補(bǔ)加甲醇至刻度，用0.45 ?m的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品的溶液。

2.4 陰性溶液的制備

按處方比例稱取除白芷浸膏外的其他藥物，按照供試品溶液的制備方法制備陰性供試品溶液。

2.5 干擾試驗(yàn)

照上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，歐前胡素對照品、供試品在9 min左右出現(xiàn)吸收峰，陰性樣品無干擾。

2.6 線性關(guān)系考察

吸取歐前胡素對照品溶液，加入甲醇制備成濃度分別為0.8、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μg·mL-1的溶液。分別進(jìn)樣10 ?L，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理得回歸方程：A=1.6×105C-14356，R2=0.9995，表明歐前胡素在0.8～16 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取消炎痛凝膠劑（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，照上述色譜條件，分別在第0、12、24、36、48、60、72 h進(jìn)樣，每個時間點(diǎn)進(jìn)樣3次，測得峰面積積分值，RSD為2.2%。結(jié)果表明供試液在72 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 精密度試驗(yàn)

取本品（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液液10 μL，進(jìn)樣6次，分別記錄峰面積積分值，RSD為1.9%。結(jié)果表明此方法的日內(nèi)精密度良好，符合含量測定的要求。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品（批號：20130912）按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，照上述色譜條件重復(fù)測定3次，結(jié)果表明該法測定歐前胡素含量重復(fù)性良好，RSD為1.57%。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的本品（批號：20130912）9份，每份約0.1g精密加入歐前胡素對照品1 mL，濃度分別為12 ?g·mL-1、10 ?g·mL-1、8 ?g·mL-1，每個濃度三份，按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)行含量測定，并計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.53%；RSD為1.82%，加樣回收率符合要求，表明該方法準(zhǔn)確。

2.11 樣品的測定

按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，取供試品溶液和對照品溶液，分別進(jìn)樣，測定5批樣品中異歐前胡素的含量，結(jié)果平均含量為0.1692 mg·g-1，RSD為0.18%（表1）。

3 討論

3.1 流動相的選擇

通過對乙腈-水，甲醇-水等多個流動相系統(tǒng)，以及甲醇-水的多個比例進(jìn)行了考察，結(jié)果表明甲醇-水（55∶45）系統(tǒng)作為流動相，供試品色譜圖中歐前胡素與其它峰能夠達(dá)到很好的分離。因此選擇該系統(tǒng)作為流動相。

3.2 提取溶劑的選擇

試驗(yàn)中曾經(jīng)選用丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇進(jìn)行提取，結(jié)果以甲醇提取測得的含量較高且分離度好，乙醇提取測得的含量雖高，但有一些雜質(zhì)峰的分離不好，故選用甲醇作為樣品前處理溶劑。

3.3 超聲提取時間選擇

研究比較了超聲提取10、20、30、40 min，結(jié)果表明超聲30 min歐前胡素提取率高于10、20 min，并與40 min提取率基本相同，故本試驗(yàn)采取了超聲30 min的方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 馬開，秦文杰.HPLC測定痛可停膠囊中歐前胡素和異歐前胡素含量[J].中成藥，2003，25（10）：801-803.

[2] 王洪志，李惠芬，周靜，等.HPLC測定元胡止痛片中歐前胡素和異歐前胡素[J].中草藥，2007，38（7）：1018-1019.

[3] 胡華杰，樓招歡，呂圭源，等.HPLC測定不同產(chǎn)地白芷飲片中歐前胡素和異歐前胡素的含量[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，34（3）：418.

[4] 劉偉明，王金榮，高曉杰.HPLC法測定復(fù)方羊角片歐前胡素[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2008，3（11）：134-135.endprint