半枝蓮總黃酮抗甲型H1N1流感病毒感染的藥效學(xué)研究

趙鐵華，鄧淑華，楊鶴松，崔曉蘭

(1.河北師范大學(xué)藥物研究所，河北石家莊 050024;2.承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000;3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700)

半枝蓮為唇形科植物半枝蓮(Scutellaria barbataD.Don)的干燥全草，具有清熱解毒、化瘀、利尿等功效［1］，黃酮類化合物是其主要有效成分［2］。本文報(bào)道了我們采用大孔樹脂吸附技術(shù)制備的半枝蓮總黃酮對(duì)甲型H1N1流感病毒感染小鼠的藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 受試藥物 半枝蓮總黃酮為河北師范大學(xué)藥物研究所采用AB-8型大孔樹脂吸附方法制備，經(jīng)鑒定主要由野黃芩苷、芹菜苷元、白楊素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、紅花素、異紅花素等成分組成，黃酮類成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.513。病毒唑?yàn)楹敝扑幑I(yè)研究所生產(chǎn)(原料藥，批號(hào)970708)。按動(dòng)物體表面積比例換算等效劑量法折算受試藥物的小鼠臨床等效劑量為實(shí)驗(yàn)基本劑量，病毒唑?yàn)?.07 g·kg－1，半枝蓮總黃酮為0.10 g·kg－1，并設(shè)0.5和2.0倍半枝蓮總黃酮基本劑量實(shí)驗(yàn)組。受試藥物使用時(shí)以蒸餾水配制所需濃度，按小鼠體質(zhì)量以0.25 ml· (10 g)－1容積灌胃給藥。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和病毒株 KM小鼠，清潔級(jí)(二級(jí))，合格證號(hào):京動(dòng)許字(1999)第012號(hào)，♀♂兼用，體質(zhì)量(14±2)g，由北京生物制品研究所動(dòng)物飼養(yǎng)室提供。甲型HINI流感病毒FM1株由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所提供，中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所藥理室常規(guī)傳代，對(duì)小鼠的半數(shù)致死量(LD50)為 10－5.75。

1.3 病毒感染致小鼠肺炎的預(yù)防和治療試驗(yàn)［3－4］KM小鼠按體重分層隨機(jī)分為6組，分別為半枝蓮總黃酮3個(gè)劑量組、病毒唑組、病毒及正常對(duì)照組，每組10只小鼠。除正常對(duì)照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15倍LD50病毒液滴鼻感染，每只0.05 ml。感染前1 d開始按“1.1”方法配制藥物濃度和容積灌胃給藥，每天2次，連續(xù)5 d，對(duì)照組在同等條件下以蒸餾水灌胃。d 6稱取小鼠體重后處死，解剖摘取全肺稱重，計(jì)算肺指數(shù)值，并計(jì)算肺指數(shù)抑制率。肺指數(shù)=［肺重(g)/體重(g)］×100;肺指數(shù)抑制率 =(病毒對(duì)照組肺指數(shù)均值－試驗(yàn)組肺指數(shù)均值)/病毒對(duì)照組肺指數(shù)均值。

1.4 病毒感染致小鼠死亡的保護(hù)試驗(yàn)［3－4］生理鹽水稀釋0.5倍～4倍LD50的病毒液，每個(gè)稀釋度10只小鼠，每只0.05 ml滴鼻感染，觀察動(dòng)物的死亡情況。經(jīng)觀察確定小鼠死亡數(shù)為感染小鼠數(shù)0.9的2倍LD50病毒液為實(shí)驗(yàn)時(shí)的病毒感染量。取KM小鼠按體重分層隨機(jī)分成5組，分別為半枝蓮總黃酮3個(gè)劑量組、病毒唑組及病毒感染對(duì)照組，每組20只小鼠。各給藥組按“1.1”方法配制藥物濃度和容積灌胃給藥，每天2次，連續(xù)9 d，病毒對(duì)照組在同等條件下給予蒸餾水。給藥d 2各組小鼠用乙醚輕度麻醉后，以2倍LD50病毒液滴鼻感染，每只0.05 ml。記錄感染后小鼠的死亡數(shù)，計(jì)算死亡率、死亡保護(hù)率及生命延長(zhǎng)率。死亡率 =動(dòng)物死亡數(shù) /動(dòng)物總數(shù);死亡保護(hù)率 =(對(duì)照組死亡率－實(shí)驗(yàn)組死亡率)/對(duì)照組死亡率;生命延長(zhǎng)率 =(實(shí)驗(yàn)組平均存活天數(shù)－感染組平均存活天數(shù))/感染組平均存活天數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 半枝蓮總黃酮對(duì)甲型H1N1流感病毒感染致小鼠肺炎的預(yù)防和治療作用 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，半枝蓮總黃酮0.2 g·kg－1劑量組的肺指數(shù)值明顯低于病毒對(duì)照組(P＜0.05);0.1 g·kg－1劑量組的肺指數(shù)值低于病毒對(duì)照組，但差異無顯著性。(見 Tab 1)。

Tab 1 Effects of total flavone of Scutellaria barbata on lung index in infected mice(±s，n=10)

Tab 1 Effects of total flavone of Scutellaria barbata on lung index in infected mice(±s，n=10)

##P ＜0.01 vs normal;*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs virus.

Group Dose/g·kg－1 Lung index(g lung weight/100 g body weight)Inhibition Normal － 0.92 ±0.06 －Virus － 1.88 ±0.41## －Ribavirin 0.07 1.04 ±0.10＊＊ 0.45 total flavone of 0.20 1.39 ±0.37* 0.26 Scutellaria barbata 0.10 1.55 ±0.36 0.18 0.05 1.86 ±0.30 0.01

2.2 半枝蓮總黃酮對(duì)甲型H1N1流感病毒感染致小鼠死亡的保護(hù)作用 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，半枝蓮總黃酮3個(gè)劑量組小鼠的死亡數(shù)均少于感染對(duì)照組，但差異無顯著性;0.2 g·kg－1和0.1 g·kg－1劑量組小鼠的存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)，較感染對(duì)照組差異有顯著性(P＜0.01)。見Tab 2。

Tab 2 Effect of total flavone of Scutellaria barbata on death rate and survival time of mouse infected influenza virus

3 討論

1990 年，Nagai等［5］曾報(bào)告半枝蓮提取的 4'-羥基漢黃芩素對(duì)流感病毒A/PP/8/34有明顯抑制作用。2009年，郭姍姍等［6］報(bào)道了半枝蓮總黃酮對(duì)副流感病毒(PIV-1)感染的拮抗作用［6］。除以上報(bào)道外尚未檢索到半枝蓮提取黃酮類化合物抗呼吸道感染相關(guān)病毒的研究資料。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果，適宜劑量下的半枝蓮總黃酮對(duì)甲型H1N1流感病毒所致的小鼠感染及其導(dǎo)致的死亡表現(xiàn)了一定的治療或(和)拮抗作用，并且其藥效表現(xiàn)了劑量相關(guān)特征。相關(guān)研究提示，半枝蓮總黃酮抗甲型H1N1流感病毒作用的機(jī)制，可能與半枝蓮黃酮類成分抑制病毒對(duì)宿主細(xì)胞的吸附、抑制病毒復(fù)制早期階段病毒顆粒與細(xì)胞內(nèi)涵體/溶酶體的融合，以及促進(jìn)吸附病毒宿主細(xì)胞膜流動(dòng)性的恢復(fù)以維持細(xì)胞膜的正常功能有關(guān)［5－7］。

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