用HPLC法測定預(yù)灌封注射劑中地塞米松磷酸鈉的含量

黃 娟，朱全剛，曹 潔，張玲娟＊

（1.第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海200433；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科，上海200437；3.第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院護理部，上海200433）

［本文編輯］汪學(xué)昭

地塞米松是腎上腺皮質(zhì)激素類藥，具有抗炎、抗內(nèi)毒素、免疫抑制、抗休克及增強應(yīng)激反應(yīng)等作用［1］。預(yù)灌封注射劑是一種新型、實用的藥品包裝形式，在節(jié)約時間、提高搶救成功率方面優(yōu)勢明顯，具有使用方便、劑量準(zhǔn)確、減少污染等優(yōu)勢［2，3］。因此，研制地塞米松磷酸鈉預(yù)灌封注射劑對于臨床搶救具有實際意義。鑒于此，本研究采用自制預(yù)灌封注射器制備地塞米松磷酸鈉預(yù)灌封注射劑，建立地塞米松磷酸鈉預(yù)灌封注射劑含量測定的HPLC法，從而更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 LD－10ADvp HPLC 儀，包括 LC－10ADvp泵、CBM－20A系統(tǒng)控制器、SIL－10ADvp自動進(jìn)樣器、CTO－10ACvp柱溫箱（日本島津公司）；FA－2004電子天平（精度0.01mg，上海天平儀器廠）；預(yù)灌封注射器組合件（第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院自制，批號120122）；SDJ－ZS生物超凈工作臺（上海淀山湖凈化設(shè)備廠）。

1.2 藥品和試劑 地塞米松磷酸鈉對照品（含量99.5%，批號100016－201015，中國食品藥品檢定研究院）；地塞米松磷酸鈉注射液（標(biāo)示量1ml∶5mg，批號110815，西南藥業(yè)股份有限公司）；地塞米松磷酸鈉預(yù)灌封注射劑（批號120207、120224、120302、120304、120305、120306，本 院 自制）。甲醇（色譜純，美國Tedia公司）；水為重蒸餾水（本院藥學(xué)部自制）；其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 預(yù)灌封注射劑的制備 分別取地塞米松磷酸鈉注射液、預(yù)灌封注射器組合件，脫去外包裝后置于生物超凈工作臺，在無菌條件下將注射液灌裝入玻璃針管，將活塞壓入，使藥液密封，然后加裝推桿，進(jìn)行包裝。室溫、避光保存。

2.2 溶液制備（1）對照品溶液：精密稱取地塞米松磷酸鈉對照品10.0mg，置10ml量瓶中，加流動相：三乙胺溶液［7.5ml三乙胺加重蒸餾水稀釋至1000ml，用磷酸調(diào)pH值（3.0±0.05）］－甲醇（75∶25，V／V）溶解稀釋至刻度，搖勻，制成1.00mg／ml的對照品儲備液。精密量取對照品儲備液適量，用流動相稀釋，制備成濃度為0.5、1.0、10.0、25.0、50.0μg／ml的系列對照品溶液。置4℃冰箱保存待用。（2）供試品溶液：精密量取預(yù)灌封注射劑1ml（約相當(dāng)于地塞米松磷酸鈉5mg），置25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成濃度約200μg／ml的溶液。精密移取此溶液1ml置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

2.3 色譜條件和系統(tǒng)適用性實驗 色譜柱：Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相見2.2項；柱溫：25℃；流速1.0ml／min；檢測波長：242nm；進(jìn)樣量：20μl。在上述條件下，取供試品溶液、濃度為25.0μg／ml的對照品溶液分別進(jìn)樣，色譜圖見圖1。由圖1可見，地塞米松磷酸鈉出峰時間約為6min，此處無其他物質(zhì)峰干擾。

圖1 地塞米松磷酸鈉預(yù)灌封注射劑的HPLC譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密移取2.2（1）項下配制的系列對照品溶液各20μl，按2.3項下色譜條件進(jìn)樣。以濃度（c）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A＝12 465c＋2 376.5（r＝0.999 9，n＝5）。結(jié)果表明，地塞米松磷酸鈉在0.5～50.0μg／ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實驗 分別精密量取低、中、高濃度（1.0、20.0、40.0μg／ml）的對照品溶液各20μl，按2.3項下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣3次，日內(nèi)精密度每次進(jìn)樣間隔時間為4h，日間精密度每次進(jìn)樣間隔時間為24h，記錄峰面積。結(jié)果低、中、高3種濃度對照品溶液日內(nèi)RSD分別為2.91%、0.64%和0.90%（n＝3），日間 RSD 分別為2.55%、1.97%和2.24%（n＝3）。

2.6 重復(fù)性實驗 取同一批（批號120302）供試品6份，按2.2（2）方法配制供試品溶液，按2.3項下色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積并計算含量。此批號供試品的地塞米板磷酸鈉含量的RSD為1.04%（n＝6），表明重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗 取批號為120305的供試品，按2.2（2）方法配制供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h按2.3項下色譜條件進(jìn)樣20μl，測定峰面積并計算含量。結(jié)果RSD為2.45%（n＝6），表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實驗 精密量取已知含量的供試品溶液（批 號 120207，20.1μg／ml）9份，分別加入1.0、20.0、40.0μg／ml對照品溶液1ml，按2.3項下色譜條件進(jìn)樣測定峰面積并計算含量，結(jié)果加樣回收率為（95.25±1.10）%、（94.36±0.89）%、（97.46±1.46）%（n＝3）。

2.9 樣品含量測定 取3批預(yù)灌封注射劑（批號120304、120305、120306），按2.2（2）方法配制供試品溶液各3份，依2.3項下色譜條件各進(jìn)樣20μl，測定峰面積，代入線性回歸方程計算地塞米松磷酸鈉含量，并求算其相當(dāng)于標(biāo)示量的百分比。3批樣品中地塞米松磷酸鈉的平均含量分別為標(biāo)示量的（102.86±4.10）%、（104.00±1.50）%、（104.90±1.58）%，均在標(biāo)示量的85%～115%范圍內(nèi)，符合《中華人民共和國藥典》2010版地塞米松磷酸鈉注射液項下要求［4］。

3 討 論

目前，臨床上以地塞米松磷酸鈉注射液針劑多見，為了適應(yīng)在戰(zhàn)創(chuàng)傷、危急重癥情況下的需求，本課題組研制了地塞米松磷酸鈉預(yù)灌封注射劑。在本研究建立的色譜條件下，溶劑在3min左右出峰，地塞米松磷酸鈉出峰時間約在6min，保留時間較為合理。因此，本研究所建立的HPLC方法簡便、準(zhǔn)確、快速、重現(xiàn)性好，能用于地塞米松磷酸鈉預(yù)灌封注射劑的含量測定。

［1］陳新謙，金有豫，湯 光.新編藥物學(xué)［M］.17版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：616.Chen XinQian，Jin YouYu，Tang Guang.New materia medica［M］.17th ed.Beijing：People’s Health Press，2011：616.In Chinese.

［2］Nishiyama J，Suzuki T，Murata T，etal.A questionnaire survey on operability of syringe pumps for prefilled syringes［J］.Tokai J Exp Clin Med，2010，35（3）：95－98.

［3］黃 娟，朱全剛，曹 潔，等.用HPLC－電化學(xué)法測定鹽酸腎上腺素預(yù)灌封注射劑中腎上腺素的含量［J］.藥學(xué)服務(wù)與研究，2012，12（3）：216，223，227.Huang Juan，Zhu QuanGang，Cao Jie，etal.Determination of epinephrine hydrochloride content in epinephrine hydrochloride prefilled syringe by HPLC－electronic chemical detection method［J］.Pharm Care Res，2012，12（3）：216，223，227.In Chinese with English title.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.2010年版 二部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：460.State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010ed.Volume 2［S］.Beijing：Chinese Medical Science Press，2010：460.In Chinese.