絞股藍皂苷提取純化工藝研究進展

張新宇，張 笛，王 琳，徐作華，劉 坤，曾慶梅，*

（1.安徽省芬格欣普藍生物藥業(yè)有限公司，安徽阜陽236500；2.合肥工業(yè)大學農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009）

絞股藍皂苷提取純化工藝研究進展

張新宇1，張 笛2，王 琳2，徐作華1，劉 坤2，曾慶梅2，*

（1.安徽省芬格欣普藍生物藥業(yè)有限公司，安徽阜陽236500；2.合肥工業(yè)大學農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009）

絞股藍皂苷是絞股藍主要的活性物質(zhì)，因其具有抗疲勞、抗衰老、抗誘變，提高機體免疫能力、調(diào)節(jié)心腦血管和改善神經(jīng)系統(tǒng)等獨特的生理調(diào)節(jié)功效，有巨大的開發(fā)價值和應用潛力。本文從提取工藝、純化工藝兩個方面綜述了絞股藍皂苷的研究進展，為進一步研究絞股藍皂苷提取、純化工藝提供了線索和依據(jù)。

絞股藍皂苷，提取，純化

絞股藍又名七葉膽、五葉參，是葫蘆科絞股藍屬多年生草質(zhì)藤木，在我國陜西、四川、湖南、廣西、云南等省均有分布，有“南方人參”的美譽，在日本被譽為“福音草”[1]。有關(guān)絞股藍皂苷的研究日本走在了世界前列，早在20世紀70年代后期，日本學者已從該植物中分離出80多種皂甙，發(fā)現(xiàn)有4種絞股藍皂苷分別與人參皂苷Rb1、Rb3、Rd和F2的結(jié)構(gòu)完全相同，并且絞股藍總皂苷含量是人參的3倍[2-4]?，F(xiàn)代藥理、毒理及臨床實驗證明：絞股藍主要有效成分為絞股藍皂苷，具有抗疲勞、抗衰老、抗誘變、提高機體免疫能力、調(diào)節(jié)心腦血管和改善神經(jīng)系統(tǒng)等作用[5-6]。絞股藍皂苷因其獨特的功效，可開發(fā)用于絞股藍茶制品、功能性口服液、保健酒、抗衰老化妝品、飼料添加劑等[7-8]。但目前，絞股藍更多的是簡單加工為絞股藍茶，而對于其中有效成分絞股藍皂苷的提取、純化及加工利用程度還遠遠不夠，因此研究開發(fā)較好的絞股藍皂苷提取和純化工藝對絞股藍深入開發(fā)具有重要意義。目前對絞股藍皂苷的綜述文章主要關(guān)注于絞股藍皂苷的藥理功能及簡單實驗提取，而忽略絞股藍皂苷提取工藝的工化應用，進一步純化方面的綜述文章也鮮有報道，本文充分結(jié)合工藝應用和裝置的可行性對絞股藍皂苷提取、純化的研究進行綜述。

1 絞股藍皂苷提取方法

絞股藍皂苷的提取主要是根據(jù)極性相似相溶原理，選用對目標組分溶解度大，對不需要組分溶解度小的溶劑，并輔助一定的破壁措施將絞股藍皂苷從絞股藍組織細胞提取出來。目前已有報道的絞股藍皂苷提取方法有溶劑熱提取、超聲波提取、酶法提取、微波提取、超臨界流體萃取及超高壓提取。其中超臨界流體萃取及超高壓提取可以作為絞股藍皂苷提取的重點研究內(nèi)容。

1.1 溶劑熱提取

絞股藍皂苷含有多個糖基，極性較大，可溶于水、甲醇、乙醇等溶劑，因此溶劑熱提取絞股藍皂苷時，常用水提和醇提，采取煎煮、回流提取、索氏提取等措施。水提法因其工藝簡單、成本較低、無溶劑污染，而被作為粗提的常用方法，林碩等[9]通過考察料液比、提取時間和提取溫度對水提效果的影響，在最優(yōu)化條件下絞股藍皂苷得率為7.79%，純度為26.85%。但水提取液中常含有無機鹽、糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)，另外水提液還常含有黏液，濃縮時易產(chǎn)生泡沫，給下一步濃縮分離帶來困難。為了克服單純水提的弊端，提高提取液的穩(wěn)定性，劉曉穎[10]、仇小艷等[11]采用一定質(zhì)量分數(shù)的甲醇、乙醇分別提取絞股藍皂苷，比較了80%甲醇、75%乙醇提取絞股藍總皂苷的不同效果，通過測定發(fā)現(xiàn)75%乙醇和80%甲醇提取效果明顯高于水提，且乙醇提取效果高于甲醇，如用乙醇回流提取絞股藍皂苷可獲得更優(yōu)提取效果。另外，采用一定質(zhì)量分數(shù)的乙醇提取可防止形成加合物[12]，乙醇較強的揮發(fā)性也便于以后的分離純化和回收再利用，減少了生產(chǎn)成本。另外還可采用連續(xù)逆流提取，增加提取次數(shù)，充分利用溶劑。

因原料的粉碎度、溶劑濃度、料液比、提取溫度、時間、次數(shù)、提取方式以及設(shè)備條件等因素都能影響提取效率，所以必須加以綜合考慮[13-14]。溶劑熱法提取絞股藍皂苷工藝相對簡單，設(shè)備要求低，便于工業(yè)化生產(chǎn)，但溶劑熱提取難以取得理想的破壁效果，存在耗時長，能耗高，提取率低，溶劑損耗大等問題，需要輔助其他更有效的破壁提取措施來克服單純?nèi)軇崽崛〉娜秉c。

1.2 超聲波提取

超聲波的作用是輔助溶劑提取，彌補單純?nèi)軇崽崛∑票诓焕硐氲娜毕?。超聲波的空化效應及引起的一系列次級效應能實現(xiàn)破壁、加速提取成分的擴散釋放的作用。另外，超聲波也可以轉(zhuǎn)化為熱能加快樣品中有效成分的擴散速度，從而更高效、快速提取植物細胞內(nèi)容物[15-16]。陳艷莉[17]利用超聲法提取絞股藍皂苷，可以大大縮短提取時間，并提高絞股藍皂苷的浸出率，且隨著超聲時間的延長皂苷提取率相應提高，但并不是無限提高，所以選擇合適的超聲時間也很重要。林碩等[18]選擇不同頻率的超聲波進行提取，并與傳統(tǒng)水浴提取的結(jié)果進行對比，發(fā)現(xiàn)超聲波頻率對絞股藍皂苷的提取過程有顯著影響，28kHz超聲波對絞股藍皂苷提取過程的強化作用明顯，但40kHz時超聲波提取效果與傳統(tǒng)水浴提取無明顯差異，超聲波提取絞股藍皂苷工藝提取結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。

需要注意的是，超聲波提取雖無需額外的熱源，但由于超聲波的熱效應，必須合理優(yōu)化超聲功率和時間，適當控制溫度不要超出一定范圍，防止皂苷過熱分解。另外，容器壁的厚薄及容器在超聲波裝置中的位置都會影響超聲提取的結(jié)果，而且目前實驗研究都是處于小規(guī)模，要用于大規(guī)模生產(chǎn)，還有待于進一步解決工程設(shè)備的放大問題，如超聲場的范圍和強度、噪聲的控制、超聲的大功率問題都制約著超聲波在工業(yè)化生產(chǎn)中的大規(guī)模應用。

1.3 酶法提取

絞股藍的細胞壁主要是由纖維素和果膠組成，而皂苷等有效成分往往包裹在細胞壁內(nèi)，目前絞股藍皂苷酶法提取工藝主要是利用纖維素酶及果膠酶破壞細胞壁組成成分，增加絞股藍皂苷的溶出率，從而提高提取率。

纖維素酶可以破壞β-D-葡萄糖苷鍵連接，從而使植物細胞壁破壞，減小有效成分的溶出阻力。鄧美林等[19]利用纖維素酶法提取絞股藍總皂苷，將絞股藍粉碎至120目，酶用量0.4%、酶解溫度45℃、提取時間為150m in、提取溫度為50℃等條件下，絞股藍總皂苷提取率為3.81%。黃山等[20]同樣采用纖維素酶提取絞股藍總皂苷，在最佳工藝條件下，絞股藍總皂苷提取率達4.60%，與熱水浸提法相比提取率提高了17.05%。果膠酶能夠破壞絞股藍細胞壁中的果膠物質(zhì)，同纖維素酶一樣有破除細胞壁加快皂苷溶出的效果。林碩等[21]研究了酶用量、pH、酶解溫度、酶解時間對果膠酶法提取絞股藍皂苷的影響。經(jīng)過正交法優(yōu)化提取工藝為：果膠酶用量為0.35%，pH為4.0，酶解溫度為50℃，酶解時間為90m in，高溫滅酶提取16min，皂苷得率達7.9201%，較常規(guī)的水酶法提取增加了9.4148%。

可以看出，研究者大多只考慮一種酶的作用，相比傳統(tǒng)的溶劑熱提取雖然能夠提高絞股藍皂苷的提取率，但與超聲波提取相比明顯耗時較長，而且酶的加入增加了生產(chǎn)成本、生產(chǎn)步驟和能耗，下一步可以嘗試多種酶的復配組合提取，發(fā)揮不同種酶的優(yōu)勢，加強破壁效果，提高絞股藍皂苷的得率。另外，酶法提取必須綜合考慮酶的濃度、溫度、抑制劑和引發(fā)劑等對提取物的影響才有可能克服酶法的缺點并應用于實際生產(chǎn)。

1.4 微波提取

微波提取由于能對提取體系中的不同組分進行選擇性加熱，因此具有較好的選擇性，且熱效率高、升溫快速均勻，可大大提高提取物純度，方便分離后處理[22-23]。該技術(shù)大多作為輔助措施用于天然產(chǎn)物的水提、醇提。但微波提取應用于提取絞股藍皂苷的文獻較少，僅南昌大學的郭輝力等[24]相對系統(tǒng)地研究過以微波輔助提取絞股藍皂苷，提出了微波干法預處理-乙醇快速浸泡提取的新工藝，并與傳統(tǒng)的乙醇回流提取進行比較，不僅提取時間縮短了近9h，提取率也提高了15.8%。此工藝較直接用溶劑浸泡進行微波輻射，能有效避免絞股藍細胞內(nèi)外同時加熱與微波能被溶劑消耗而造成破壁不理想的情況出現(xiàn)，這樣既可提高微波提取效率，節(jié)省能源，又可簡化微波提取裝置，降低投入成本，利于工業(yè)化生產(chǎn)。雖然絞股藍皂苷的微波提取研究較少，但同類型的皂苷，如人參皂苷[22，25-26]，國內(nèi)外研究還是比較深入的，可以作為絞股藍皂苷微波提取的參考。

微波可以產(chǎn)生瞬時高溫，必須合理控制微波時間。為了減少高溫的影響，可分次進行微波輻射，冷卻至室溫再進行第二次微波輻射，減少熱分解以便提高皂苷得率。絞股藍在提取前應粉碎至合適粒度，既增大提取溶劑與物料的接觸面積，提高微波提取的效率，又可防止雜質(zhì)過度暴露，增加后續(xù)處理難度。目前微波提取設(shè)備的研發(fā)相對成熟，可以滿足各類大、中、小企業(yè)的生產(chǎn)需求。

1.5 超臨界CO2萃取

由于超臨界CO2只能有效地萃取親脂性物質(zhì)，對相對質(zhì)量分子較大、羥基多、極性較大的皂苷類物質(zhì)提取其產(chǎn)率普遍較低，需要加入夾帶劑、表面活性劑以及其他強化措施來提高產(chǎn)率[27-28]。為了提高皂苷產(chǎn)率，羅登林等[29]采用超聲強化超臨界CO2萃取人參皂苷，與單純的超臨界CO2萃取相比超聲的加入能明顯提高超臨界CO2萃取人參皂苷的萃取率和生產(chǎn)效率，這可能是由于超聲的破碎細胞壁作用導致溶質(zhì)擴散阻力減小，增加了與超臨界流體的接觸面積。之后他又將特定的表面活性劑、乙醇和水形成反相微乳液引入到超臨界CO2體系中增加對皂苷的溶解度，并與乙醇/水/超臨界CO2萃取進行比較，發(fā)現(xiàn)其萃取率是乙醇/水/超臨界CO2萃取的3.2倍[30]。

除了采取強化措施來提高超臨界CO2萃取皂苷的萃取率和生產(chǎn)效率外，也應該注意萃取前樣品的制備和預處理，比如樣品粒度、樣品的裝填密度、樣品溶液的酸堿度等都影響溶質(zhì)的擴散速度和皂苷的存在形式從而影響皂苷得率及皂苷的化學結(jié)構(gòu)[31]。

1.6 超高壓提取

超高壓提取的升壓、保壓、卸壓過程能夠加速溶劑與細胞基質(zhì)間的擴散、滲透、溶解，使提取速率大大提高，提取時間大大縮短[32]。雖然利用超高壓提取絞股藍中皂苷的文獻鮮有報道，但超高壓在人參皂苷提取方面的成果可以作為重要參照。吉林大學的陳瑞戰(zhàn)等[33-35]在超高壓技術(shù)提取人參皂苷方面成果較多，他們探討了不同提取溶劑、溶劑濃度、提取壓力、溶劑與原料比、提取時間等因素對皂苷得率的影響，并將超高壓提取法與回流提取、超聲提取、微波提取、超臨界CO2萃取等方法進行了比較，研究發(fā)現(xiàn)超高壓在提取具有提取率高、溶雜少、能耗低、操作方便、快速等優(yōu)點，而且超高壓是在常溫下操作，能最大程度地保留生物活性物質(zhì)及各種營養(yǎng)成分的天然結(jié)構(gòu)，避免了因熱效應引起的有效成分變性、損失、藥理活性降低等問題，同時超高的壓力也使絕大多數(shù)細菌失活，有利于產(chǎn)品的保藏。

另外，在一定壓力下所產(chǎn)生的凝聚作用可以打破酶和基質(zhì)間的隔離，使酶活上升，加速酶促反應[36]。繼續(xù)提高壓力，既可以增加皂苷溶出率又可以改變酶蛋白的結(jié)構(gòu)而起到鈍酶的作用[37]，防止內(nèi)容物過多溶出，增加后續(xù)純化的難度。超高壓如果輔助酶法提取，既可充分發(fā)揮酶的催化活性，又可充分利用超高壓破壁、鈍酶的作用，雙重作用增強破壁效果。綜上可以看出，超高壓提取完全可以作為絞股藍皂苷提取的重要研究方向。雖然超高壓有諸多優(yōu)勢，但仍面臨一些實際問題，如提取工藝參數(shù)的協(xié)同效應、有限的提取容積、設(shè)備的產(chǎn)能、設(shè)備投資費用等。

2 絞股藍皂苷純化方法

絞股藍皂苷經(jīng)一定方法提取后，其中往往含有大量的雜質(zhì)，不僅影響絞股藍產(chǎn)品的品質(zhì)，而且很大程度上影響了理化參數(shù)的測定、療效的評價、以及相關(guān)標準的制定等深層次的研究，因此對粗提物的分離純化具有十分重要的實用價值和理論意義。

2.1 大孔吸附樹脂分離純化

大孔樹脂具有良好的選擇性、吸附量大、易洗脫、耐污染、再生處理后重復使用，因而在天然產(chǎn)物有效成分分離純化領(lǐng)域的應用不斷增加[38-39]。羅婭君等[40]考察了D101、D141、NAK-Ⅱ、AB-8型等3種大孔吸附樹脂富集、純化絞股藍總皂苷的工藝，經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，D-101型純化效果最好，絞股藍總皂苷含量可以達到50.69%。在最優(yōu)工藝條件下，絞股藍總皂苷可達89.61%（以人參皂苷Rb3計）。劉振洋等[41]研究了AB-8、ADS-7、D-101、HPD-100、HPD-300、HPD-700型等6種大孔吸附樹脂對絞股藍總皂苷的飽和吸附量、洗脫量及洗脫率，除ADS-7型大孔吸附樹脂外其他5種型號對絞股藍總皂苷的靜態(tài)吸附能力均較好，其中AB-8型的靜態(tài)飽和吸附量最大，為120.25mg·g-1干樹脂，而HPD-700型樹脂吸附的洗脫率最高，可達80.34%，其吸附量大、收率高、洗脫率高等優(yōu)點，綜合比較，將HPD-700型大孔樹脂應用于絞股藍總皂苷的初級純化是非常合適的。

大孔吸附樹脂法是目前純化工藝較簡單，效率較高，收率和純度都比較理想的絞股藍皂苷富集和純化方法，完全可以替代傳統(tǒng)溶劑萃取純化工藝。但大孔吸附樹脂純化技術(shù)在絞股藍皂苷純化的應用中更多的關(guān)注目標產(chǎn)物的純化，而忽略了大孔樹脂預處理效果及提取物中樹脂殘留物和裂解產(chǎn)物的檢測，因此對大孔樹脂純化的絞股藍產(chǎn)品需制定合理的限量標準來確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全。

2.2 膜分離法

膜分離是以選擇性的透過膜為分離介質(zhì)，利用膜兩側(cè)不同的電位差、濃度差或者壓力差使原料中的組分選擇性透過一定孔徑的膜，從而實現(xiàn)混合物分離、提純、濃縮的過程[42-43]。利用膜分離進行純化時，為了提高處理速度、處理量以及穩(wěn)定性，往往采用不同孔徑的膜進行多步過濾。易克傳等[44]分別選用陶瓷微濾膜和超濾膜進行兩步膜分離，在溶液溫度40℃、過濾壓差0.24MPa條件下，利用孔徑0.5μm的陶瓷膜對絞股藍粗取液進行預處理，保障了下一步超濾的穩(wěn)定性。在后續(xù)的研究中選擇截留相對分子質(zhì)量為3×104的超濾膜，在溶液溫度40℃、操作壓力2MPa的條件下純化絞股藍皂苷，工藝過程穩(wěn)定，產(chǎn)品純度較高[45]。

采用不同截留分子量的膜進行分步膜分離，處理量大，處理效果較為理想，可以很好的實現(xiàn)絞股藍皂苷的連續(xù)化生產(chǎn)，有很好的工業(yè)前景。當然，膜分離也存在污染嚴重、清洗困難、膜更換困難、造價較高等實際問題，但隨著膜分離研究開發(fā)的深入，必將推動粗提液分離純化的工業(yè)化進程。

2.3 硅膠柱色譜分離純化

絞股藍成分中的多糖、黃酮等水溶性物質(zhì)由于極性較大，易吸附于硅膠上，而極性較弱的皂苷不易被吸附，而容易被洗脫下來，因此根據(jù)這個性質(zhì)，可利用硅膠柱色譜法將絞股藍中的總皂苷與其他物質(zhì)分離開來。

孔玉瓊等[46]利用用硅膠柱色譜分離絞股藍總皂苷，以氯仿-甲醇混合液為流動相進行梯度洗脫，薄層層析法跟蹤檢測。將5000g絞股藍干草經(jīng)乙醇提、石油醚脫脂、正丁醇萃取、AB-8大孔吸附樹脂脫糖、D-296陰離子交換樹脂脫色后得到總皂苷7.87g，取5g絞股藍總皂苷進行硅膠柱色譜分離，在體積比為9.5∶0.5和9∶1的氯仿-甲醇洗脫液洗脫下得到3種較純的絞股藍皂苷的單體組分，得率分別為2.6%、3.0%和5.2%。經(jīng)高效液相色譜檢測其純度，組分A、B、C純度分別為88.73%、93.11%和78.54%。3種皂苷較粗品純度得到很大提高。KIM JH等[47]將得到的絞股藍粗提液先用大孔樹脂HP-20分離純化，然后將甲醇洗脫的部分真空干燥成粉，之后進行硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）洗脫，洗脫組分進一步經(jīng)過ODS硅膠柱（洗脫液∶甲醇-水）得到絞股藍皂甙GC1-7等單體。Hu L等[48]選取地上部分的絞股藍依次用汽油、三氯甲烷和甲醇浸提，然后用水和正丁醇的混合溶液萃取甲醇提取液，取正丁醇層進行硅膠柱色譜分離，洗脫液為三氯甲烷-甲醇-水（7∶3∶0.1），收集洗脫組分進行RP-18色譜分離（洗脫液：甲醇-水或乙腈-水），最后得到9種化合物，經(jīng)檢測其中有6種為已知絞股藍皂苷。

硅膠柱色譜分離純化絞股藍皂苷使研究和評價絞股藍單體生物活性成為可能，但由于硅膠柱步驟繁瑣，增加了生產(chǎn)成本，降低了生產(chǎn)效率，僅適合實驗室作方法機理研究，無法工業(yè)化推廣。

2.4 高速逆流色譜法

高速逆流色譜有效地分離強極性的組分，實現(xiàn)物質(zhì)的對流分配，具有較強的適應性[49]，能在一個流程中分離樣品中極性差異極大的各個組分，為從復雜的天然產(chǎn)物粗制品中提取不同特性的有效成分提供了有利條件[50]。

目前高速逆流色譜已經(jīng)成功運用于與絞股藍皂苷為同類皂苷的人參皂苷。孫成賀等[51]應用制備型高速逆流色譜，選擇乙酸乙酯-正丁醇-水（1∶6∶7）組成溶劑系統(tǒng)對人參超聲粗提液進行分離，所得溶液用甲醇重結(jié)晶，最終得到人參皂苷Re固體，高效液相色譜分析純度達到98.84%。張敏等[52]以醋酸乙酯-正丁醇-水-醋酸（4∶3∶0.02）作為制備型高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)分離人參皂苷，得到Re、Rg1、Rg33種人參皂苷單體化合物，經(jīng)高效液相色譜檢測其純度均達到95%以上。

絞股藍皂苷的分離多用大孔樹脂和硅膠柱色譜分離，有時候為了得到更純的單體還要利用ODS硅膠柱進一步純化，其預處理過程復雜，耗時較長且處理量小，而應用高速逆流色譜粗提物經(jīng)簡單處理后即可直接分離，制備量比傳統(tǒng)方法大，純度也較高。高速逆流色譜也有其不足之處，如溶劑消耗多、檢測限較低、靈敏度較差，有時為了提高精度必須與液相色譜聯(lián)用，且不適合皂苷的大量制備。

2.5 泡沫分離法

泡沫分離技術(shù)是通過鼓泡的方式，將粗提液中具有表面活性的物質(zhì)吸附在氣泡表面，隨氣泡上升過程中得到富集，并帶出溶液，達到濃縮純化的目的[53-54]。絞股藍皂苷具有親水性的糖體和疏水性的皂苷元，是一種非離子型表面活性成分，并且具有良好的起泡性，因此完全具備泡沫分離的前提[54]。

修志龍等[55]采用泡沫分離技術(shù)，通過改變不同的通氣量、料液濃度、pH、進料量以及通氣操作方式等因素，發(fā)現(xiàn)各因素均對皂苷濃縮的結(jié)果均有顯著影響，且鼓泡對不同的皂苷單體濃縮作用有明顯差異，其中皂苷Rb1、Rb2、Rd有顯著的濃縮效果，而Re和Rg1的濃度基本無變化。王琳等[56]利用用泡沫分離法對絞股藍粗提液中的皂苷進行分離，最佳分離工藝條件下皂苷回收率為49.20%，富集比可達4.51。

泡沫分離在分離純化絞股藍皂苷方面還不成熟，泡沫分離設(shè)備的性能的改善、多級泡沫分離設(shè)備的研制、表面活性劑在氣-液界面發(fā)生分離的吸附機理以及絞股藍皂苷的吸附特性還有待于繼續(xù)深入研究。不可否認的是，隨著泡沫分離技術(shù)的日益成熟，必將促進其在皂苷濃縮純化的工業(yè)化應用。

3 展望

目前對絞股藍皂苷的研究多數(shù)集中在絞股藍總皂苷的粗提上，且提取方法多為傳統(tǒng)的方法，在超臨界萃取和超高壓提取方面鮮有研究。后續(xù)的絞股藍皂苷純化研究相對較少，在新技術(shù)的研究及綜合運用上明顯不足，尤其對某些絞股藍皂苷單體開展的較少，這嚴重制約著絞股藍皂苷的藥效研究和絞股藍產(chǎn)品的競爭力。迄今為止，國內(nèi)外對絞股藍皂苷提取、純化的研究深度明顯不夠，鑒于絞股藍獨特的生理功效和廣闊的市場前景，應加強絞股藍新工藝提取和分離純化的研究，以便于深入分析和綜合利用絞股藍。

[1]向善榮.中國絞股藍研究與資源開發(fā)利用[M].南昌：江西高校出版社，1997.

[2]N Masahiro.Two Glycosides of Nonel Demmarane Alcohol From Gynostemma Pentaphyllm[J].Chem Pharm Bull，1981，29（3）：779-783.

[3]Tsunematu Takemoto，Shigenobu Arihara，K Yoshikawa，et al. Studies on the Constituents of Cucurbitaceae Plants.Xiv.on the Saponin Constituents of Gynostemma Pentaphyllum Makino[J]. Yakugaku Zasshi，1984，104（10）：1043-1049.

[4]Tsunematsu Takemoto，S Arihara，T Nakajima，et al.Studies on the Constituents of Gynostemma Pentaphyllum Makino.I. Structures of Gypenoside I-xiv[J].Yakugaku Zasshi，1983，103（2）：173-185.

[5]C Müller，A Gardemann，G Keilhoff，et al.Prevention of Free Fatty Acid-induced Lipid Accumulation，Oxidative Stress，and Cell Death in Primary Hepatocyte Cultures By a Gynostemma Pentaphyllum Extract[J].Phytomedicine，2012，19（5）：395-401.

[6]樸香蘭，吳倩.絞股藍研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21（7）：1758-1760.

[7]王睿.絞股藍皂苷提取工藝研究進展[J].廣西輕工業(yè)，2010（7）：16-17.

[8]周建華，張興亞.絞股藍開發(fā)研究新進展及應用[J].食品科技，2010，35（2）：74-77.

[9]林碩，高學玲，岳琳娜，等.正交法優(yōu)選絞股藍皂苷提取工藝及穩(wěn)定性研究[J].中國食品添加劑，2009（2）：89-92.

[10]劉曉穎，曾仕廉，鄧傳軍，等.絞股藍皂甙的提純及性質(zhì)研究[J].安徽大學學報：自然科學版，1996，20（4）：58-60，62.

[11]仇小艷，李向民，苗玲，等.絞股藍總皂甙提取方法的比較研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2008，8（10）：1936-1938.

[12]楊昱，白靖文，俞志剛.超聲輔助提取技術(shù)在天然產(chǎn)物提取中的應用[J].食品與機械，2011，27（1）：170-174.

[13]陳武，伍曉春，鄒盛勤，等.絞股藍總皂苷提取工藝的研究[J].食品與機械，2008，24（1）：75-77.

[14]易克傳，徐凱，楊萍，等.動態(tài)連續(xù)逆流提取絞股藍皂苷的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012（2）：244-247.

[15]Giancarlo Cravotto，Luisa Boffa，Stefano Mantegna，et al. Improved extraction of vegetable oils under high-intensity ultrasound and/or microwaves[J].Ultrasonics Sonochemistry，2008，15（5）：898-902.

[16]JRuiz-jiménez，F(xiàn) Priego-capote，M D Luque de Castro. identification and quantification of trans fatty acids in bakery productsby gas Chromatography-mass spectrometry after dynamic ultrasound-assisted extraction[J].Journal of Chromatography A，2004，1045（1）：203-210.

[17]陳艷莉.超聲法提取絞股藍皂甙[J].現(xiàn)代應用藥學，1994，11（6）：11.

[18]林碩，岳琳娜，高學玲，等.超聲波強化提取絞股藍皂苷的工藝研究[J].食品科學，2009，30（14）：72-75.

[19]鄧美林，付莉，吳天祥.纖維素酶法提取絞股藍總皂苷的研究[J].貴州農(nóng)業(yè)科學，2009，37（2）：15-17.

[20]黃山，公衍玲，金宏.酶法提取絞股藍總皂苷工藝條件的優(yōu)化[J].食品工業(yè)科技，2009（4）：178-180，273.

[21]林碩，岳琳娜，高學玲，等.果膠酶提取絞股藍皂苷的工藝研究[J].中國食物與營養(yǎng)，2009（4）：21-24.

[22]Yutang Wang，Jingyan You，Yong Yu，et al.Analysis of ginsenosides in panax ginseng in high pressure microwaveassisted extraction[J].Food Chemistry，2008，110（1）：161-167.

[23]王青豪，方芳，張熊祿.微波輔助提取絞股藍黃酮工藝研究[J].食品科學，2010（22）：149-152.

[24]郭輝力，鄧澤元.微波干法輔助提取絞股藍總皂苷的研究[J].食品與機械，2009，25（1）：68-71.

[25]Yuping Bai，Lisha Zhao，Chenling Qu，et al.Microwave degradation of floatation-enriched ginsenoside extract from panax Quinquefolium L.leaf[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2009，57（21）：10252-10260.

[26]Joong-Ho Kwon，Jacqueline M R Bélanger，J R Jocelyn Paré，et al.Application of the microwave-assisted process（mapTM）to the fastextraction ofginseng saponins[J].Food Research International，2003，36（5）：491-498.

[27]Denglin Luo，Haili Yuan，Jianxue Liu.Extraction of ginsenosides from ginseng in supercritical CO2By means of different enhanced techniques[C].Bioinformatics and Biomedical Engineering（icbbe），2010 4th International Conference，2010：1-4.

[28]李倩，蒲彪.超臨界流體萃取技術(shù)在天然產(chǎn)物活性成分提取中的應用[J].食品與發(fā)酵科技，2011，47（3）：11-14，27.

[29]羅登林，聶英，鐘先鋒，等.超聲強化超臨界CO2萃取人參皂苷的研究[J].農(nóng)業(yè)工程學報，2007，23（6）：256-258.

[30]羅登林，聶英，劉建學，等.超臨界CO2反相微乳萃取人參中人參皂苷的研究[J].中草藥，2007，38（7）：1003-1006.

[31]楊必成，楊義芳.超臨界流體萃取中藥及天然產(chǎn)物的樣品制備和預處理方法研究進展[J].中草藥，2010，41（8）：1391-1394.

[32]嚴隴兵，劉鄰渭，林靜雅，等.石榴皮多酚超高壓提取物的純化、分離及功能性研究[J].食品工業(yè)科技，2012（22）：168-171，177.

[33]Ruizhan Chen，F(xiàn)anleiMeng，Shouqin Zhang，et al.Effects of ultrahigh pressure extraction conditions on yields and antioxidant activity ofginsenoside from ginseng[J].Separation and Purification Technology，2009，66（2）：340-346.

[34]陳瑞戰(zhàn)，張守勤，王長征.正交實驗優(yōu)化超高壓提取人參中人參皂苷的工藝研究[J].中草藥，2005，36（3）：365-368.

[35]陳瑞戰(zhàn)，張守勤，王長征，等.超高壓提取西洋參皂苷的工藝研究[J].農(nóng)業(yè)工程學報，2005，21（5）：150-154.

[36]Eddie Morild.The theory of pressure effects on enzymes[J]. Advances in Protein Chemistry，1981，34（3）：93-166.

[37]Marc Hendrickx，Linda Ludikhuyze，Ilse Van den broeck，et al.Effects of high pressure on enzymes related to food quality [J].Trends in Food Science&Technology，1998，9（5）：197-203.

[38]Jing Li，Howard A Chase.Development of adsorptive（nonionic）macroporous resins and their uses in the purification of pharmacologically-active natural products from plant sources[J]. Natural Product Reports，2010，27（10）：1493-1510.

[39]Irving M Abrams，John R Millar.A History of the Origin and Development ofmacroporous ion-exchange Resins[J].Reactive and Functional Polymers，1997，35（1）：7-22.

[40]羅婭君，李輝容，帥小燕.大孔吸附樹脂純化綿陽產(chǎn)絞股藍總皂苷的研究[J].化學研究與應用，2010，22（7）：884-888.

[41]劉振洋，劉延澤，劉改嵐，等.絞股藍總皂苷的閃式提取和純化工藝研究[J].中草藥，2009，40（7）：1071-1073.

[42]王紹堃，孫暉，王喜軍.膜分離技術(shù)及其在中藥提取分離中的應用[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，6（12）：1093-1096.

[43]陳余.膜分離技術(shù)在中藥提取分離中的應用[J].化學工程與裝備，2013（2）：126-128.

[44]易克傳，岳鵬翔，李慧.膜分離技術(shù)純化絞股藍皂苷[J].北京工商大學學報：自然科學版，2010，28（3）：23-26.

[45]易克傳，岳鵬翔，曾其良，等.超濾膜純化絞股藍皂苷的工藝[J].生物加工過程，2012，10（4）：35-37.

[46]孔玉瓊，金鳳燮，魚紅閃.絞股藍總皂苷中單體皂苷的分離純化[J].大連工業(yè)大學學報，2011，30（3）：173-176.

[47]Ji Ho Kim，Yong Nam Han.Dammarane-type saponins from gynostemma pentaphyllum[J].Phytochemistry，2011，72（11）：1453-1459.

[48]Lihong Hu，Zhongliang Chen，Yuyuan Xie.Dammarane-type glycosides from gynostemma pentaphyllum[J].Phytochemistry，1997，44（4）：667-670.

[49]Yoichiro Ito.Recent Advances in Counter-current Chromatography[J].Journal of Chromatography A，1991，538（1）：3-25.

[50]石雪萍，吳亮亮，張衛(wèi)明.高速逆流色譜法分離花椒中的黃酮化合物[J].食品科學，2013（12）：6-10.

[51]孫成賀，王英平，劉繼永，等.HSCCC法分離制備人參果中人參皂苷Re[J].中藥材，2008，31（4）：527-529.

[52]張敏，陳瑞戰(zhàn)，竇建鵬，等.人參中的人參皂苷高速逆流色譜法分離[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，23（2）：403-405.

[53]劉穎，木泰華，孫紅男，等.泡沫分離技術(shù)在食品及化工業(yè)中的應用現(xiàn)狀[J].食品工業(yè)科技，2013（13）：354-358.

[54]張海濱，何毓敏，張長城，等.泡沫分離法提取竹節(jié)參總皂苷的工藝優(yōu)選[J].中國實驗方劑學雜志，2013（1）：18-20.

[55]修志龍，張代佳，賈凌云，等.泡沫分離法分離人參皂苷[J].過程工程學報，2001，11（3）：289-292.

[56]王琳，吳兆亮，趙艷麗，等.泡沫分離絞股藍粗提液中絞股藍皂苷的工藝研究[J].中草藥，2008，39（2）：203-206.

Research process in extraction and purification of gypenoside

Gypenoside was main active substance of gynostemma pentaphylla，which had great development value and potential app lication because of its unique function of anti-fatigue，anti-aging，anti-mutagenic，im p roving the immune capacity，regulation of cardiovascular and neurological imp rovement.In this paper，the research p rog ress of gypenosidess was d iscussed from its extraction and purification.It p rovided good c lues and evidence for further study on extraction and purification p rocess of gypenoside.

gypenoside；extraction；purification

TS201.1

A

1002-0306（2014）18-0378-06

10.13386/j.issn1002-0306.2014.18.077

2013－12－31 *通訊聯(lián)系人

張新宇（1964-），男，高級工程師，研究方向：食品加工。

安徽省科技計劃（1301032155）；國家自然科學基金（31371844，31071556）；國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃（2011AA100801）。

ZHANG Xin-yu1，ZHANG Di2，WANG Lin2，XU Zuo-hua1，LIU Kun2，ZENG Qing-mei2，*

（1.Findshe Funland Bio-Pharmaceutical Limited Corporation，F(xiàn)uyang 236500，China；2.Engineering Research Center of Bio-process，HefeiUniversity of Technology，Hefei230009，China）