湖南綏寧青錢柳中槲皮素、山柰素含量測定

陳丹++史蕾喆++李柯++李若存

摘 要：目的：建立綏寧青錢柳中槲皮素和山柰素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），檢測波長360 nm。結(jié)果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD為1.15%；山柰素99.51%，RSD為2.05%。結(jié)論：該方法可靠、便捷，可以作為控制青錢柳藥材質(zhì)量的方法。

關(guān)鍵詞：青錢柳 槲皮素 山柰素 高效液相色譜法

中圖分類號： R282 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青錢柳為胡桃科青錢柳屬植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我國獨有的單種屬植物，是國家重點保護的瀕危植物之一，屬三類保護植物。青錢柳廣泛分布于江西、浙江、江蘇、安徽、福建、臺灣、湖北、四川、貴州、云南等地海拔420～2500 m的山區(qū)、溪谷或石灰?guī)r山地。后經(jīng)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，我省綏寧縣[1]亦有分布。研究表明青錢柳葉中富含黃酮、三萜、甾體類化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度約為蔗糖的250倍。這些化合物成分能有效降低甘三脂和膽固醇，使其具有降血壓、降血糖、降血脂的功能，同時對增強人體免疫力、抗氧化、抗衰老有獨特作用。本文采用高效液相色譜法對綏寧產(chǎn)青錢柳中黃酮類化合物進(jìn)行了含量測定[4-7]，為進(jìn)一步開發(fā)和利用青錢柳提供依據(jù)。

1 儀器、試劑與藥材

1.1 儀器

高效液相色譜儀（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）；EC2006色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（大連依利特分析儀器有限公司）。槲皮素（批號100081-200907），供含量測定用；山柰素（批號110861-201209），供含量測定用，均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純（均為湖南匯虹試劑有限公司提供），水為重蒸餾水。藥材采自湖南綏寧縣，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為青錢柳葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）為流動相；檢測波長為360 nm。理論塔板數(shù)按槲皮素峰計應(yīng)不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備

取槲皮素對照品、山柰素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。對照品與供試品色譜圖分別見圖1、圖2。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，槲皮素回歸方程為：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回歸方程為：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999結(jié)果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。數(shù)據(jù)見表1，表2；標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖3、圖4。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定其峰面積積分值，其結(jié)果見表3，表4。

2.6 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取供試品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，結(jié)果見表5，表6。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批號藥材共6份，按上述方法測定其峰面積積分值，結(jié)果見表7，表8。

2.8 回收率試驗

精密稱取槲皮素含量為1.27 mg/g、山柰素含量為2.22 mg/g藥材約0.75 g，共6份，分別精密加入槲皮素對照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素對照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述測定法項下的方法測定含量，結(jié)果見表9、表10。

2.9 不同采收時間青錢柳藥材含量測定

分別取不同采收時間青錢柳葉粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見表11。

3 討論

我們對湖南省綏寧縣產(chǎn)青錢柳葉不同采收期的含量結(jié)果表明，槲皮素與山柰素在藥材中的總量以6月份含量最高，依據(jù)二種成分的綜合含量，結(jié)合青錢柳的生長期、采收量及產(chǎn)地的氣候因素等，青錢柳的采收期以6月為宜。

參考文獻(xiàn)

[1] 曾躍輝，劉新華，鄭紅發(fā)，等.青錢柳資源利用與開發(fā)研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青錢柳化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黃錫山，陸園園，等.青錢柳化學(xué)成分的研究[J].中成藥，2008，30（2）：238-240.

[4] 酈宏巖，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC測定青錢柳中槲皮素和山柰素的含量[J].藥學(xué)與臨床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鵬，劉韶，李新中，等.HPLC測定地錦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中藥材，2005，28（8）：666-667.

[6] 楊燕飛.HPLC測定金膽片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成藥，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 鄭瑁，孫蘭香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素總含量的HPLC法測定[J].中國新藥雜志，2005，14（5）：592-594.endprint

摘 要：目的：建立綏寧青錢柳中槲皮素和山柰素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），檢測波長360 nm。結(jié)果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD為1.15%；山柰素99.51%，RSD為2.05%。結(jié)論：該方法可靠、便捷，可以作為控制青錢柳藥材質(zhì)量的方法。

關(guān)鍵詞：青錢柳 槲皮素 山柰素 高效液相色譜法

中圖分類號： R282 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青錢柳為胡桃科青錢柳屬植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我國獨有的單種屬植物，是國家重點保護的瀕危植物之一，屬三類保護植物。青錢柳廣泛分布于江西、浙江、江蘇、安徽、福建、臺灣、湖北、四川、貴州、云南等地海拔420～2500 m的山區(qū)、溪谷或石灰?guī)r山地。后經(jīng)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，我省綏寧縣[1]亦有分布。研究表明青錢柳葉中富含黃酮、三萜、甾體類化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度約為蔗糖的250倍。這些化合物成分能有效降低甘三脂和膽固醇，使其具有降血壓、降血糖、降血脂的功能，同時對增強人體免疫力、抗氧化、抗衰老有獨特作用。本文采用高效液相色譜法對綏寧產(chǎn)青錢柳中黃酮類化合物進(jìn)行了含量測定[4-7]，為進(jìn)一步開發(fā)和利用青錢柳提供依據(jù)。

1 儀器、試劑與藥材

1.1 儀器

高效液相色譜儀（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）；EC2006色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（大連依利特分析儀器有限公司）。槲皮素（批號100081-200907），供含量測定用；山柰素（批號110861-201209），供含量測定用，均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純（均為湖南匯虹試劑有限公司提供），水為重蒸餾水。藥材采自湖南綏寧縣，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為青錢柳葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）為流動相；檢測波長為360 nm。理論塔板數(shù)按槲皮素峰計應(yīng)不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備

取槲皮素對照品、山柰素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。對照品與供試品色譜圖分別見圖1、圖2。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，槲皮素回歸方程為：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回歸方程為：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999結(jié)果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。數(shù)據(jù)見表1，表2；標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖3、圖4。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定其峰面積積分值，其結(jié)果見表3，表4。

2.6 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取供試品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，結(jié)果見表5，表6。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批號藥材共6份，按上述方法測定其峰面積積分值，結(jié)果見表7，表8。

2.8 回收率試驗

精密稱取槲皮素含量為1.27 mg/g、山柰素含量為2.22 mg/g藥材約0.75 g，共6份，分別精密加入槲皮素對照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素對照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述測定法項下的方法測定含量，結(jié)果見表9、表10。

2.9 不同采收時間青錢柳藥材含量測定

分別取不同采收時間青錢柳葉粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見表11。

3 討論

我們對湖南省綏寧縣產(chǎn)青錢柳葉不同采收期的含量結(jié)果表明，槲皮素與山柰素在藥材中的總量以6月份含量最高，依據(jù)二種成分的綜合含量，結(jié)合青錢柳的生長期、采收量及產(chǎn)地的氣候因素等，青錢柳的采收期以6月為宜。

參考文獻(xiàn)

[1] 曾躍輝，劉新華，鄭紅發(fā)，等.青錢柳資源利用與開發(fā)研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青錢柳化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黃錫山，陸園園，等.青錢柳化學(xué)成分的研究[J].中成藥，2008，30（2）：238-240.

[4] 酈宏巖，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC測定青錢柳中槲皮素和山柰素的含量[J].藥學(xué)與臨床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鵬，劉韶，李新中，等.HPLC測定地錦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中藥材，2005，28（8）：666-667.

[6] 楊燕飛.HPLC測定金膽片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成藥，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 鄭瑁，孫蘭香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素總含量的HPLC法測定[J].中國新藥雜志，2005，14（5）：592-594.endprint

摘 要：目的：建立綏寧青錢柳中槲皮素和山柰素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），檢測波長360 nm。結(jié)果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD為1.15%；山柰素99.51%，RSD為2.05%。結(jié)論：該方法可靠、便捷，可以作為控制青錢柳藥材質(zhì)量的方法。

關(guān)鍵詞：青錢柳 槲皮素 山柰素 高效液相色譜法

中圖分類號： R282 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青錢柳為胡桃科青錢柳屬植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我國獨有的單種屬植物，是國家重點保護的瀕危植物之一，屬三類保護植物。青錢柳廣泛分布于江西、浙江、江蘇、安徽、福建、臺灣、湖北、四川、貴州、云南等地海拔420～2500 m的山區(qū)、溪谷或石灰?guī)r山地。后經(jīng)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，我省綏寧縣[1]亦有分布。研究表明青錢柳葉中富含黃酮、三萜、甾體類化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度約為蔗糖的250倍。這些化合物成分能有效降低甘三脂和膽固醇，使其具有降血壓、降血糖、降血脂的功能，同時對增強人體免疫力、抗氧化、抗衰老有獨特作用。本文采用高效液相色譜法對綏寧產(chǎn)青錢柳中黃酮類化合物進(jìn)行了含量測定[4-7]，為進(jìn)一步開發(fā)和利用青錢柳提供依據(jù)。

1 儀器、試劑與藥材

1.1 儀器

高效液相色譜儀（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）；EC2006色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（大連依利特分析儀器有限公司）。槲皮素（批號100081-200907），供含量測定用；山柰素（批號110861-201209），供含量測定用，均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純（均為湖南匯虹試劑有限公司提供），水為重蒸餾水。藥材采自湖南綏寧縣，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為青錢柳葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）為流動相；檢測波長為360 nm。理論塔板數(shù)按槲皮素峰計應(yīng)不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備

取槲皮素對照品、山柰素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。對照品與供試品色譜圖分別見圖1、圖2。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，槲皮素回歸方程為：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回歸方程為：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999結(jié)果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。數(shù)據(jù)見表1，表2；標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖3、圖4。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定其峰面積積分值，其結(jié)果見表3，表4。

2.6 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取供試品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，結(jié)果見表5，表6。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批號藥材共6份，按上述方法測定其峰面積積分值，結(jié)果見表7，表8。

2.8 回收率試驗

精密稱取槲皮素含量為1.27 mg/g、山柰素含量為2.22 mg/g藥材約0.75 g，共6份，分別精密加入槲皮素對照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素對照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述測定法項下的方法測定含量，結(jié)果見表9、表10。

2.9 不同采收時間青錢柳藥材含量測定

分別取不同采收時間青錢柳葉粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見表11。

3 討論

我們對湖南省綏寧縣產(chǎn)青錢柳葉不同采收期的含量結(jié)果表明，槲皮素與山柰素在藥材中的總量以6月份含量最高，依據(jù)二種成分的綜合含量，結(jié)合青錢柳的生長期、采收量及產(chǎn)地的氣候因素等，青錢柳的采收期以6月為宜。

參考文獻(xiàn)

[1] 曾躍輝，劉新華，鄭紅發(fā)，等.青錢柳資源利用與開發(fā)研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青錢柳化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黃錫山，陸園園，等.青錢柳化學(xué)成分的研究[J].中成藥，2008，30（2）：238-240.

[4] 酈宏巖，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC測定青錢柳中槲皮素和山柰素的含量[J].藥學(xué)與臨床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鵬，劉韶，李新中，等.HPLC測定地錦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中藥材，2005，28（8）：666-667.

[6] 楊燕飛.HPLC測定金膽片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成藥，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 鄭瑁，孫蘭香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素總含量的HPLC法測定[J].中國新藥雜志，2005，14（5）：592-594.endprint