苓桂術(shù)甘湯對急性心梗后心室重構(gòu)模型大鼠心功能及血清BNP的影響*

龔曉燕，王 靚，黃金玲，施 慧，王桐生，洪星輝，華明柳

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥 230038）

苓桂術(shù)甘湯（linggui zhu-gan decoction，LGZGD）為仲景名方，是溫陽益氣、健脾化飲的代表方。在前期的研究中我們發(fā)現(xiàn)該方能夠有效地干預(yù)心梗后6周模型大鼠的心臟舒縮性[1-2]。為進(jìn)一步探明苓桂術(shù)甘湯干預(yù)心梗后心室重構(gòu)（ventricular remodeling，VR）的作用和機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)擬通過觀察苓桂術(shù)甘湯對急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）后心室重構(gòu)2周模型大鼠心功能的影響及各組大鼠血清B型鈉尿肽（B-type natriuretic peptide，BNP）含量的變化，進(jìn)一步為苓桂術(shù)甘湯早期預(yù)防心衰的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動物

清潔級SD大鼠80只，雄性（♂），體質(zhì)量（200±20）g，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK（皖）2011-002。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)5d。

1.2 藥品與試劑

苓桂術(shù)甘湯參考文獻(xiàn)[3]方法，由安徽省亳州市興和藥業(yè)有限公司制成干浸膏粉末，含生藥量4.8g/g（其中桂皮醛含量9.945mg/g，甘草酸含量：14.71mg/g），4℃冰箱密封保存?zhèn)溆?；卡托普利：中美上海施貴寶制藥有限公司，批號009031；BNP試劑盒：上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司。

1.3 主要儀器

Power Lab數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)：澳大利亞埃德公司；HX-300S型小型動物呼吸機(jī)：成都泰盟科技有限公司；Multiskan MK2型酶標(biāo)儀：芬蘭Labsystem公司。

2 方法

2.1 動物模型復(fù)制、分組及給藥

取SD大鼠70只，參照參考文獻(xiàn)[1-2]用冠狀動脈結(jié)扎法復(fù)制急性心肌梗死模型。以心電圖S-T段抬高伴肢體導(dǎo)聯(lián)R波高尖，作為結(jié)扎成功的標(biāo)準(zhǔn)。另取10只SD大鼠只穿線但不結(jié)扎冠狀動脈作為假手術(shù)組。手術(shù)過程按照無菌操作要求進(jìn)行。造模2周后除假手術(shù)組（蒸餾水10mL/kg灌胃）外，其余存活模型大鼠隨機(jī)分為5組（每組12只）：模型組，苓桂術(shù)甘湯小、中、大劑量組（2.1g/kg，4.2g/kg，8.4g/kg，按體表面積法換算，相當(dāng)于成人日常用量的1、2、4倍），卡托普利組（4.375mg/kg）。灌胃（ig）給藥（容積為10mL/kg體質(zhì)量），模型組與假手術(shù)組灌胃等容積蒸餾水，連續(xù)處理4周。

2.2 血流動力學(xué)指標(biāo)測定

于最后第二次藥后禁食12h，2%戊巴比妥鈉25mg/kg腹腔麻醉后進(jìn)行血流動力學(xué)檢測。參考文獻(xiàn)[1]方法分離右頸總動脈，用Power Lab數(shù)據(jù)采集分析記錄儀測定左心室收縮末壓力（LVSP）、左心室舒張期末壓（LVEDP）、左室內(nèi)壓最大收縮率（+dp/dtmax）、左室內(nèi)壓最大舒張率（-dp/dtmax）。

2.3 采用ELISA法檢測血清BNP含量

末次給藥后30min，采用腹腔注射20%烏拉坦（5mL/kg）的方法麻醉各組大鼠，腹主動脈采血。血液常溫下靜置30min后，離心分離血清，用酶標(biāo)儀檢測BNP含量。

3 統(tǒng)計(jì)方法

采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。連續(xù)型變量用（±s）表示，多樣本均數(shù)比較用one-way ANOVA法，多個均數(shù)比較采用LSD法。

4 結(jié)果

4.1 對心室重構(gòu)模型大鼠血流動力學(xué)的影響

由表1可見，行冠狀動脈結(jié)扎術(shù)后模型組大鼠與假手術(shù)組相比，LVSP與+dp/dtmax、-dp/dtmax均明顯下降（P＜0.01），LVEDP 明顯升高（P＜0.01）；造模2周后連續(xù)給予苓桂術(shù)甘湯和卡托普利干預(yù)4周后，各組大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)均有顯著改善：苓桂術(shù)甘湯小、中、大劑量組大鼠LVSP、+dp/dtmax和-dp/dtmax均顯著上升，LVEDP顯著下降，與模型組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 苓桂術(shù)甘湯急性心梗后2周干預(yù)對心室重構(gòu)模型大鼠血流動力學(xué)的影響（x±s）

4.2 苓桂術(shù)甘湯對心室重構(gòu)模型大鼠血清BNP含量的影響

由表2可見，行冠狀動脈結(jié)扎術(shù)后模型大鼠與假手術(shù)組比血清BNP含量明顯升高（P＜0.01）；而分別在造模2周后，連續(xù)給予苓桂術(shù)甘湯干預(yù)4周后的各組大鼠血清BNP含量明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，或P＜0.01）。

表2 苓桂術(shù)甘湯對急性心梗2周后模型大鼠血清BNP 的影響（±s）

表2 苓桂術(shù)甘湯對急性心梗2周后模型大鼠血清BNP 的影響（±s）

注：與假手術(shù)組比，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01；與卡托普利組比，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 劑量/g·kg-1 動物數(shù)/n BNP/ng·L-1假手術(shù)組 - 10 183.416±14.081模型組 - 8 295.822±24.856△△卡托普利組 0.004 10 238.708±12.467**小量組 2.100 9 245.028±20.347**中量組 4.200 10 221.858±13.908**#大量組 8.400 10 217.356±18.155**##

5 討論

急性心肌梗死可激活神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)制和細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，導(dǎo)致左心室的進(jìn)行性擴(kuò)張和外形的改變，即為心室重構(gòu)。目前認(rèn)為心室重構(gòu)是AMI后發(fā)生慢性心衰的重要病理基礎(chǔ)。

BNP是一種心血管肽類激素，主要由心室分泌，能敏感而特異地反映左心室功能變化。引起B(yǎng)NP分泌增加的主要因素是心室擴(kuò)張或心室壓力增高，當(dāng)心臟容量負(fù)荷或壓力負(fù)荷增加時，心臟合成和分泌BNP并釋放入血，使血中BNP濃度增高[4-5]。韓玲等[6]對慢性心力衰竭（CHF）患者BNP與中醫(yī)辨證分型的關(guān)系進(jìn)行了臨床研究，發(fā)現(xiàn)陽虛病人的BNP含量明顯高于其他證型的病人，他們認(rèn)為心陽是心臟泵血功能的決定因素，與本課題組“心陽氣虛是心衰之本、貫穿心衰病機(jī)始終”的觀點(diǎn)具有一致性。

苓桂術(shù)甘湯方出自張仲景《傷寒雜病論》，是溫陽化飲的代表方，方中茯苓養(yǎng)心益脾，淡滲利水；桂枝辛溫通陽，兩藥相配通陽化氣、利水滲濕。本實(shí)驗(yàn)在既往研究基礎(chǔ)上[1-2]，觀察苓桂術(shù)甘湯對急性心肌梗死后早期干預(yù)的作用。本研究結(jié)果顯示，對急性心肌梗死后2周模型大鼠用苓桂術(shù)甘湯連續(xù)干預(yù)4周，與模型組相比，血流動力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)顯著改善，同時我們發(fā)現(xiàn)血漿BNP水平與LVEDP呈正相關(guān)性。苓桂術(shù)甘湯小、中、大劑量組大鼠LVSP、+dp/dtmax和-dp/dtmax均顯著上升，LVEDP顯著下降，大鼠血清BNP含量明顯降低，均與模型組比有顯著性差異（P＜0.01或P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)表明苓桂術(shù)甘湯對AMI大鼠心臟舒縮性能具有顯著的改善作用，其作用與降低大鼠血清BNP含量密切相關(guān)。

綜上所述，我們認(rèn)為苓桂術(shù)甘湯可以顯著改善AMI后心室重構(gòu)模型大鼠心功能，降低大鼠血清BNP含量，有效發(fā)揮阻抑心室重構(gòu)的作用。結(jié)合本課題組前期研究基礎(chǔ)，我們認(rèn)為苓桂術(shù)甘湯可以有效阻抑心室重構(gòu)，防治CHF，下一步課題組將進(jìn)一步就其干預(yù)心室重構(gòu)的機(jī)制做深入探討。

[1]黃金玲，桑方方，王桐生，等.苓桂術(shù)甘湯對充血性心衰竭大鼠心臟指數(shù)與血流動力學(xué)的影響 [J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，28（5）：58-60.

[2]方海雁，黃金玲，桑方方，等.苓桂術(shù)甘湯對慢性心衰大鼠AngⅡ、ET-1、TNF-α 和IL-β 的影響[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，29（2）：53-55.

[3]黃金玲，王慧慧，陳慧芳，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選苓桂術(shù)甘湯的提取工藝[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，30（6）：65-67.

[4]劉恩華.急性心肌梗死患者心肌損傷標(biāo)志物動態(tài)監(jiān)測價值的比較[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2010（2）：65-67.

[5]龔厚文.BNP，NT-proBNP檢測在心力衰竭中的應(yīng)用進(jìn)展[J].西南軍醫(yī)，2010（1）：99-101.

[6]韓玲.心力衰竭患者腦鈉肽、左室射血分?jǐn)?shù)與中醫(yī)辨證分型關(guān)系的臨床研究[J].新疆中醫(yī)藥，2009（2）：18-20.