高效液相色譜法測(cè)定硫酸沙丁胺醇

肖雪紅

（寶雞職業(yè)技術(shù)學(xué)院 化學(xué)工程系，陜西 寶雞 721013）

硫酸沙丁胺醇是一種長(zhǎng)效β2-受體激動(dòng)劑，臨床上用于緩解由支氣管哮喘、急性支氣管炎、喘息性支氣管炎或肺氣腫等氣道阻塞性疾病引起的呼吸困難等癥狀.目前，硫酸沙丁胺醇的檢測(cè)方法主要以采用紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器的液相色譜法為主［1-7］.本文作者使用反相-高效液相色譜-電化學(xué)法檢測(cè)（RPHPLC-ECD）測(cè)定了片劑中的硫酸沙丁胺醇的含量.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

安科TCL-16C離心機(jī)（上海蘭科儀器有限公司）；HP-1100高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），包括四元梯度泵（G1311A），二極管陣列檢測(cè)器（G1315A）和電化學(xué)檢測(cè)器（1049A），色譜數(shù)據(jù)通過(guò)HP工作站采集獲得；DL-180型超聲清洗器（象山縣石浦海天電子儀器廠）；IX-501型pH計(jì)（北京大學(xué)化學(xué)系）；WG-2003臺(tái)式干燥箱（重慶試驗(yàn)設(shè)備廠一分廠）；Milli-QG超純水制備儀（美國(guó)Millipore公司）.

硫酸沙丁胺醇購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，純度≥99%；甲醇為色譜純；冰醋酸為分析純；所用水為超純水；硫酸沙丁胺醇片由江蘇亞邦愛(ài)普森搖曳有限公司生產(chǎn).

1.2 溶液制備

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取硫酸沙丁胺醇對(duì)照品適量，置于25mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，振蕩均勻后得硫酸沙丁胺醇（3.70×102mg·L-1）的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液.其他不同濃度的各對(duì)照品溶液由單一儲(chǔ)備液稀釋得到.

1.2.2 供試品溶液的制備

稱取適量散裝硫酸沙丁胺醇藥片，研細(xì)，取其粉末0.040 0g置于50mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入甲醇25.00 mL，稱定其重量.用頻率為35%±5%kHz，功率為180W超聲儀超聲10min，取出，放至室溫后再稱定重量，然后用甲醇補(bǔ)足減失的重量，振蕩均勻.取出3mL溶液于5mL離心試管中，3 000r·min-1下離心5 min，吸取上清液并用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液.

1.3 色譜條件

采用長(zhǎng)度為150mm、外徑為4.6mm和內(nèi)徑為5.0μm的Zorbax SB-C18色譜柱（美國(guó)Agilent公司）；流動(dòng)相包括（A）甲醇、（B）水-冰醋酸（pH＝3.00）.采用梯度洗脫，其洗脫程序如下：0min時(shí)A-B（體積比10∶90），10min時(shí)A-B（體積比40∶60），流速為1.0mL·min-1；ECD的工作電位為1.0V，柱溫為30℃.按上述條件獲得的對(duì)照品（a）和樣品（b）的色譜圖見(jiàn)圖1.硫酸沙丁胺醇的保留時(shí)間為4.41min.

圖1 硫酸沙丁胺醇對(duì)照品（a）和樣品（b）色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of salbutamol sulfate（a）and sample（b）

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系考察

準(zhǔn)確移取“1.2.1”項(xiàng)下所配制的一定體積的硫酸沙丁胺醇對(duì)照品儲(chǔ)備液于10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制硫酸沙丁胺醇濃度分別為0.944，8.44，16.9，33.8mg·L-1的系列對(duì)照品溶液，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾.取對(duì)照品溶液10.0μL，按所選色譜條件進(jìn)樣，平行測(cè)定3次，以平均峰面積積分值Y對(duì)質(zhì)量濃度w（mg·L-1）進(jìn)行線性回歸，獲得硫酸沙丁胺醇的回歸方程.其相關(guān)參數(shù)、相關(guān)系數(shù)、線性范圍見(jiàn)表1.結(jié)果表明：硫酸沙丁胺醇在0.944～33.8mg·L-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好.

表1 硫酸沙丁胺醇的斜率、截距、相關(guān)系數(shù)、線性范圍和檢出限（n＝3）Table 1 Slope，intercept，linear ranges and limit of detection of salbutamol sulfate（n＝3）

2.2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取已知含量的硫酸沙丁胺醇粉末9份，每份10mg，將其分別置于25mL容量瓶中，每3份為一組.向三組硫酸沙丁胺醇樣品中分別準(zhǔn)確加入濃度為2.7×102mg·L-1的硫酸沙丁胺醇對(duì)照品溶液0.6 mL，0.1mL和0.02mL.按照已選定好的方法制備溶液后，按照本實(shí)驗(yàn)中所描述的色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10.0μL，重復(fù)進(jìn)樣3次，采用外標(biāo)法計(jì)算加入對(duì)照品后供試品溶液中硫酸沙丁胺醇的含量，三種不同濃度的樣品加樣回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表2所示.

表2 硫酸沙丁胺醇的加標(biāo)回收率（n＝3）Table 2 Recoveries of salbutamol sulfate（n＝3）

2.3 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取一定體積的“1.2.1”項(xiàng)下所配制的硫酸沙丁胺醇對(duì)照品儲(chǔ)備液加入10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成對(duì)照品溶液，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾.按照本實(shí)驗(yàn)中所描述的對(duì)照品溶液的制備方法和所選擇的色譜條件進(jìn)樣，連續(xù)測(cè)定6次，每次10.0μL，計(jì)算硫酸沙丁胺醇的含量的RSD為4.6%.

準(zhǔn)確稱取硫酸沙丁胺醇片劑粉末（0.010 0g）5份，根據(jù)“1.2.2”項(xiàng)所述方法制備溶液后，依照“1.3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行分析，計(jì)算硫酸沙丁胺醇的含量的RSD為2.1%.

對(duì)供試品溶液在8h之內(nèi)每隔1h進(jìn)樣10.0μL，記錄色譜峰面積，測(cè)得硫酸沙丁胺醇的含量的RSD為1.2%；對(duì)供試品溶液在8d內(nèi)每隔24h進(jìn)樣10.0μL，記錄色譜峰面積，測(cè)得硫酸沙丁胺醇的峰面積積分值的RSD為3.5%.

2.4 樣品分析

分別稱取不同批號(hào)的藥片三份，依照“1.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，移取10.0μL，按照選定好的色譜條件測(cè)定硫酸沙丁胺醇的峰面積，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算其含量，結(jié)果見(jiàn)表3.

表3 樣品中硫酸沙丁胺醇含量測(cè)定結(jié)果Table 3 Determination results of salbutamol sulfate in sample /（mg·g-1，n＝3）

2.5 提取條件的選擇

考察了水、25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇和甲醇作為提取溶劑對(duì)提取效率的影響.按照“1.2溶液制備”中“1.2.2”項(xiàng)所述操作進(jìn)行提取，然后按照“1.3”項(xiàng)中的色譜條件測(cè)定.結(jié)果表明，隨著甲醇濃度的增加，硫酸沙丁胺醇的峰面積逐漸增加.同時(shí)，考察了提取時(shí)間為10，20，30，40和50min時(shí)對(duì)被測(cè)物質(zhì)提取效率的影響.結(jié)果表明，隨著超聲提取時(shí)間的增加，硫酸沙丁胺醇的峰面積并未明顯增加.實(shí)驗(yàn)中，選擇甲醇為提取溶劑，超聲提取時(shí)間為10min.

2.6 醋酸水溶液pH的影響

實(shí)驗(yàn)中，考察了醋酸水溶液pH為2.62，3.00，3.50，4.00，5.02和7.00時(shí)，對(duì)硫酸沙丁胺醇色譜分離效果的影響.結(jié)果表明，隨著pH的增加，容量因子幾乎無(wú)任何變化，硫酸沙丁胺醇的保留時(shí)間也無(wú)明顯變化.同時(shí)，考慮到色譜柱所能承受的最高酸度，實(shí)驗(yàn)中采用醋酸水溶液的pH為3.00.

2.7 工作電位的選擇

吸取硫酸沙丁胺醇的對(duì)照品儲(chǔ)備液500μL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按照“1.3”項(xiàng)所述色譜條件，分別進(jìn)樣10.0μL，考察電位范圍為0.3～1.1 V時(shí)硫酸沙丁胺醇在電極上的響應(yīng)情況，獲得相應(yīng)的電流電位曲線（見(jiàn)圖2）.由圖2可見(jiàn)，隨著電位的增加，硫酸沙丁胺醇的電化學(xué)響應(yīng)一直在增加.同時(shí)，考慮到電壓過(guò)大，基線噪音增加，信噪比降低，實(shí)驗(yàn)中選擇的工作電位為1.0V（相對(duì)于Ag/AgCl參比電極）.

圖2 硫酸沙丁胺醇的電流電位曲線Fig.2 Curves of current versus potential for the oxidation salbutamol sulfate

3 結(jié)論

建立了市售片劑中硫酸沙丁胺醇的高效液相色譜-電化學(xué)測(cè)定新方法.與文獻(xiàn)報(bào)道［2-3］的方法相比，本法具有線性范圍寬的優(yōu)點(diǎn).

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典，二部［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：734.

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