大承氣湯對不完全性腸梗阻大鼠血清中IL-1和IL-6及回盲部形態(tài)學的影響

尹抗抗，閆云云，張文將，梁 媛，趙 梁，盧金冬，譚達全，4，鄧冰湘*

（1.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙410208；2.湖南中醫(yī)藥大學2012 級碩士研究生，湖南 長沙410208；3.湖南中醫(yī)藥大學2011 級碩士研究生，湖南 長沙410208；4.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長沙410006）

腸梗阻是臨床最常見的急腹癥之一，受阻部位的腸道內(nèi)容物阻塞于腸管內(nèi)，造成腸管擴張，出現(xiàn)腹痛、腹脹、停止排氣、嘔吐等癥狀，且其診斷復雜、死亡率高，如何早期發(fā)現(xiàn)后對其進行有效、安全的治療引起人們的重視[1]。 在腸梗阻中以不完全性腸梗阻較為易治療且多見。 治療不完全性腸梗阻主要目的是在不損傷腸道的基礎上使腸道內(nèi)容物順利排出。 其中通里攻下法是治療不完全性腸梗阻等引起的急腹癥最常用的治法。 腸梗阻在中醫(yī)學屬于“腸結”的范疇[2]。 中醫(yī)認為“不通則痛”是腸梗阻的發(fā)病機制，應采用通里攻下法進行治療。 大承氣湯是通里攻下法的代表方，臨床上常用來治療不完全性腸梗阻。 本實驗用手術方法來造成大鼠不完全性腸梗阻模型，探討不同劑量的大承氣湯對不完全性腸梗阻大鼠模型血清中IL-1、IL-6 含量的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康SD 大鼠60 只，雌雄各半，體質量（225.6±22.3）g，均購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2011-0003。

1.1.2 試藥 大承氣湯組成： 酒大黃12 g， 厚樸24 g，枳實12 g，芒硝9 g，購自湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥劑科，先煎枳實、厚樸約25 min，再納入大黃煎煮10 min，去渣，然后加入溶化芒硝[3]。

1.1.3 主要儀器 DNM-9602 酶標儀（北京普朗新技術有限公司）；電子分析天平（梅特勒—托利多儀器有限公司）；TDZ4-WS 低速自動平衡離心機（湘儀離心機儀器有限公司）；切片機（美國 AO820 型）、顯微鏡（麥克奧迪公司生產(chǎn)）。

1.1.4 主要試劑 酶聯(lián)免疫法（ELISA）試劑盒：由Bio-Swamp Life Science 試劑公司提供。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 動物適應性飼養(yǎng)7 d， 實驗時將60 只實驗大鼠按隨機數(shù)字表法分為6 組：空白對照組，模型對照組，假手術組，大承氣湯高、中、低劑量組（以下簡稱高、中、低劑量組），每組10 只。

1.2.2 造模 將大鼠用10%水合氯醛(300 mg/kg)麻醉，備皮后碘伏消毒，酒精脫碘后于腹中線下1/3處開腹，暴露回盲部，用直徑為3.2 mm 的中心靜脈管與回腸腸管并排放置， 在距回盲部1 cm 處用圓針和絲線穿透腸系膜繞過腸管和中心靜脈導管一并結扎，最后抽出中心靜脈導管，造成不完全性腸梗阻，然后將腹壁逐層縫合[3]。 術后常規(guī)喂養(yǎng)，整個手法要輕柔以減輕對腸管的刺激，手術過程嚴格遵循無菌操作原則，術后繼續(xù)常規(guī)喂養(yǎng)。 假手術組方法相同，只用針線穿透腸系膜而不結扎，空白對照組不做任何處理。

1.2.3 灌胃方法 各組均在手術造模前0.5 h 及造模后連續(xù)給藥3 d，每天上午9 點開始進行灌胃。大承氣湯高、中、低劑量組，根據(jù)人與大鼠的體表面積進行換算， 三種劑量呈等比數(shù)列4∶2∶1， 分別給予11.6、5.8、2.9g/(kg·d)，空白對照組、假手術組、模型對照組給予相同劑量的生理鹽水[4]。 術后要注意大鼠的保暖和傷口護理，傷口在每次灌胃后用碘伏進行消毒，并保持籠內(nèi)墊料的干爽舒適，避免引起傷口感染。 實驗中模型對照組、高劑量組、中劑量組各有一只大鼠死亡，可能是手術操作不當導致死亡。

1.3 檢測指標

1.3.1 標本的采集和保存 造模后72 h 由腹主動脈取血置入真空采血管中，3 000 r/min 離心10 min，取血清置于-20 ℃冰箱保存。

1.3.2 血清中IL-1、IL-6 含量測定 采用ELISA方法檢測血清中IL-1、IL-6 含量， 酶標儀讀出的標準品以及樣本的OD 值， 利用標準品的OD 值及其相對應的濃度，以OD 值為橫坐標，濃度為縱坐標，繪制標準曲線，擬合回歸方程，根據(jù)樣本測得的OD值計算出濃度。

1.3.3 回盲部組織形態(tài)學評價 處死大鼠后即刻剪取回盲部組織，用生理鹽水輕柔沖洗腸腔內(nèi)容物后，無菌濾紙吸干水分，肉眼觀察回盲部后立即浸泡于10%甲醛中，固定24 h 后石蠟包埋。 切片后按常規(guī)蘇木精-伊紅染色法（HE）染色。 觀察其形態(tài)學改變，并參照Axaki Y[5]及Yulpinar MA[6]結腸損傷綜合得出評分標準，觀察各組的黏膜損傷、隱窩破壞、黏膜水腫、間質水腫、炎性細胞浸潤損傷。 若無損傷得分為0，輕度損傷得分為1，中度損傷得分為2，重度損傷得分為3，將該組中不同觀察組織損傷得分相加，得出綜合損傷分數(shù)，即為該組的損傷得分。

1.4 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 17.0 統(tǒng)計學軟件進行分析， 實驗結果所有數(shù)據(jù)均采用“±s”表示，多組間均數(shù)比較用單因素方差分析， 組間兩兩比較方差齊者用LSD 檢驗，方差不齊者用Dunnett’s T3 檢驗，非正態(tài)分布資料改用秩和檢驗， 以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠血清中IL-1、IL-6 含量比較

與空白對照組比較， 模型對照組血清中IL-1、IL-6 含量顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，說明造模成功；經(jīng)藥物干預后，各組血清中IL-1、IL-6含量不同程度下調，與模型對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，以高劑量組最為顯著，其次分別為中劑量組和低劑量組，說明具有一定的量效關系。 結果見表1。

2.2 各組大鼠回盲部腸黏膜形態(tài)直觀變化

模型對照組大鼠回盲部腸腔擴張、充血、瘀血，蠕動減慢甚至消失，顏色變暗，腸壁偶有炎性黏液，證明回盲部損傷較為嚴重。 空白對照組和假手術組肉眼觀察無明顯變化。 各給藥組損傷程度漸輕，大承氣湯高、中劑量組與模型對照組比較，回盲部黏膜形態(tài)無明顯變化。

2.3 各組大鼠回盲部腸黏膜的顯微觀察比較

HE 染色后發(fā)現(xiàn)空白對照組和假手術組回盲部結構無明顯變化，黏膜結構正常。 模型對照組回盲部黏膜有大量滲出，上皮細胞腫脹，細胞界限不清，間質明顯水腫，大量炎性細胞浸潤偶有上皮細胞壞死、脫落。 大承氣湯高、中、低劑量組與模型對照組比較，回盲部上皮細胞腫脹減輕，炎細胞浸潤明顯減少，無明顯水腫、滲出，未發(fā)現(xiàn)上皮細胞壞死、脫落。其中高劑量組大鼠回盲部黏膜損傷最輕，如圖1所示（見封三彩圖）。

2.4 各組大鼠回盲部黏膜損傷程度評分比較

在顯微鏡下，對腸損傷進行觀察，依據(jù)“1.3.3”的評分方法， 對各組回盲部黏膜損傷進行評分，計算各組均數(shù)及標準差。 結果顯示：空白對照組、假手術組回盲部組織黏膜評分均為0 分；模型對照組回盲部黏膜損傷評分（12.01±1.21），而各藥物組均有不同程度改善回盲部黏膜損傷的作用，與模型對照組比較，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，以低劑量組最為明顯，其次為中劑量組和高劑量組。 結果見表1。

表1 各組大鼠血清中IL-1、IL-6 水平及回盲部黏膜損傷程度比較 （±s）

表1 各組大鼠血清中IL-1、IL-6 水平及回盲部黏膜損傷程度比較 （±s）

注：與空白對照組比較△△P＜0.01；與模型對照組比較**P＜0.01。

組 別空白對照組假手術組模型對照組低劑量組中劑量組高劑量組n 10 10 9 10 9 9 IL-1(ng/L)8.92±0.37 12.52±1.40**27.76±1.06△△16.52±1.18△△**15.28±0.42△△**12.30±0.61△△**IL-6(ng/L)22.97±1.96 44.41±2.08**65.10±3.13△△49.20±2.42△△**38.15±1.60△△**32.52±1.80△△**損傷評分（分）0.00±0.00 0.00±0.00**12.01±1.21△△4.80±1.03△△**6.87±1.13△△**9.47±1.24△△**

3 討論

多項研究已經(jīng)證明，在創(chuàng)傷及感染等應激情況下，腸黏膜屏障功能受到了削弱或損害，易致不完全性腸梗阻的發(fā)生，使腸道細菌、毒素迅速增加，并激發(fā)各種細胞因子和炎性介質的增多，形成瀑布樣效應，引起嚴重的細胞損傷，最終可導致全身各器官的損害進而多器官功能衰竭而死亡[7]。 機體對各種外來損傷具有一定的抵抗力，其防御系統(tǒng)主要包括巨噬細胞及其產(chǎn)生的細胞因子，如IL-1、IL-6 等，當各種因子過度釋放時，會導致細胞因子平衡被打破，引起全身的炎性損傷，過度的炎性損傷會導致休克、免疫抑制、凝血障礙等嚴重的反應甚至會危及生命。

IL-1 是炎癥因子之一， 促進機體各種炎癥因子的分泌，會導致微循環(huán)障礙；是一種致熱原，大量產(chǎn)生會引起內(nèi)分泌紊亂， 使體溫升高引發(fā)發(fā)熱和惡病質。IL-6 可誘導急性期炎性反應的產(chǎn)生，促進多種免疫細胞的分化和活化，血清或血漿中IL-6 的濃度可敏感地反映出組織損傷的程度[8]。 其主要特征是誘導急性蛋白反應，能夠使機體發(fā)熱、白細胞增多、血管通透性增加，使原有癥狀加重，全身反應更加明顯，從而形成惡性循環(huán)[9]。 在不完全性腸梗阻中導致?lián)p傷作用的機制可能為：IL-1、IL-6 可引起血管過度擴張、血流瘀滯，導致組織器官低灌流；IL-1、IL-6 對組織器官有直接毒性作用， 可以滅活與能量代謝或抗氧化有關的酶，還可以直接損傷DNA，導致能量衰竭和細胞死亡。 IL-1、IL-6 可引起腸通透性增高，導致細菌移位和內(nèi)毒素血癥[10]。不完全性腸梗阻形成后各種有毒物質在體內(nèi)堆積、 共同作用會導致胃腸黏膜屏障破壞，細菌、內(nèi)毒素進入血液形成腸源性感染。內(nèi)毒素引起體內(nèi)IL-1、IL-6 等因子的分泌增加，導致內(nèi)環(huán)境失衡更加嚴重，進一步加重腸道黏膜的破壞，產(chǎn)生各種炎癥反應和發(fā)熱反應。

本實驗中模型對照組血清IL-1、IL-6 含量明顯高于空白對照組和中、高劑量組(P＜0.01)，提示模型對照組刺激IL-1、IL-6 的釋放大幅度增加， 大承氣湯抑制體內(nèi)IL-1、IL-6 的釋放， 降低血清中IL-1、IL-6 含量，減輕其引起的器官毒性反應、腸管擴張、發(fā)熱、凝血障礙等癥狀；減少血清中IL-1、IL-6 含量增加引起各種炎癥細胞因子的產(chǎn)生、釋放和腸源性炎性介質的吸收。 大承氣湯高劑量組與中、低劑量組比較血清中IL-1、IL-6 含量均有明顯降低 (P＜0.01)， 其高劑量組對減少血清中IL-1、IL-6 含量的作用明顯優(yōu)于中、低劑量組，達到減輕各種癥狀的治療目的。 以上對比實驗研究證明，臨床上采用大承氣湯治療不完全性腸梗阻有非常好的應用前景，且大承氣湯濃度對不完全性腸梗阻的治療具有較大的影響作用，臨床使用時應充分考慮到大承氣湯的濃度，以達到其最佳療效。

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