金雞系列制劑質(zhì)量的初步評(píng)價(jià)

黃 云，楊艷模，林 海*

（1.湖南食品藥品職業(yè)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410208；2.常德市第一人民醫(yī)院，湖南 常德415003；3.湖南省中藥不良成分快速檢測(cè)及脫除工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙410001；4.湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院，湖南 長(zhǎng)沙410001）

現(xiàn)已上市的金雞系列產(chǎn)品有膠囊、顆粒、分散片、薄膜片、糖衣片。 金雞顆粒（沖劑）為金雞系列制劑的原研藥，由金櫻根、功勞木、雞血藤、兩面針、千金拔、穿心蓮6 味中藥提取制得[1-2]。 經(jīng)查閱國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)，《中華人民共和國(guó)藥典》1977年版已有金雞沖劑的處方及劑量的明確記載，其他制劑皆由沖劑簡(jiǎn)單改變而來(lái)。 據(jù)國(guó)家頒布的這5個(gè)品種的現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)記載，僅分散片規(guī)定采用高效液相色譜法（HPLC）檢測(cè)小檗堿，其他都只有薄層色譜（TLC）鑒別，尚無(wú)含量測(cè)定。 《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部中， 對(duì)功勞木中的鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的總量做出了規(guī)定， 用HPLC測(cè)定功勞木中的兩種生物堿含量， 總量不得少于0.80%[3-6]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)TLC 鑒別、含量測(cè)定及特征譜圖比對(duì)對(duì)金雞系列制劑的5個(gè)品種質(zhì)量進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。

1 材料

1.1 儀器

Shimadzu LC-20A 高效液相色譜儀（日本島津公司）；Waters Alliance 高效液相色譜儀（美國(guó)沃特斯公司）；Dionex Ultimate 3000 高效液相色譜儀（美國(guó)戴安公司）；XP205 型電子分析天平（梅特勒公司）。

1.2 試藥

藥根堿(批號(hào)110733-101108)， 巴馬汀(批號(hào)110732-201108)，小檗堿(批號(hào)110713-201212) 均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所， 供含量測(cè)定用；硅膠薄層板(青島海洋)，乙腈(色譜純，Honeywell)，其他試劑為分析純。 樣品見(jiàn)表1。

2 方法和結(jié)果

2.1 TLC 鑒別

取相當(dāng)于分散片5 片處方劑量下的各制劑，參照國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YPZ09402008 金雞分散片 “鑒別”項(xiàng)下金櫻根、 兩面針的鑒別的薄層條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示： 各品種所有批次的色譜圖基本一致，顆粒劑與薄膜衣片、 糖衣片的圖譜主要斑點(diǎn)位置相同，膠囊劑和分散片圖譜主要斑點(diǎn)位置相同。 結(jié)果見(jiàn)圖1～2（見(jiàn)封三彩圖）。

表1 金雞系列制劑來(lái)源及批號(hào)

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 Agilent ZORBAX SB C18(150 mm×4.6 mm×5 μm)； 流動(dòng)相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（磷酸調(diào)pH 3.2）=22∶78。 流速為0.8 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm。在上述色譜條件下，各成分分離度良好。 見(jiàn)圖3。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取對(duì)照品藥根堿、巴馬汀、小檗堿適量于棕色量瓶中，加乙腈-水=3∶7溶液溶解定容，得對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液。 稀釋混合成混合對(duì)照品溶液母液，備用。

圖3 金雞膠囊樣品（A）、陰性樣品（B）、對(duì)照品(C)的HPLC 圖

2.2.3 供試品溶液制備 （1）金雞膠囊：精密稱(chēng)取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物1.5 g，置100 mL 具塞錐形瓶中，用70%甲醇-鹽酸（100∶1）20 mL，冷浸，超聲處理45 min，放冷，補(bǔ)足減少的質(zhì)量，搖勻；高速離心10 min，精取上清液10 mL 加入中性氧化鋁柱層析純化。 無(wú)水乙醇洗脫，收集其中鮮黃色色帶部分，蒸干，殘?jiān)右译?水=3∶7 混合溶液溶解，移到10 mL量瓶中定容至刻度，0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液即得。 （2）金雞分散片：精密稱(chēng)取片重差異項(xiàng)下粉末約0.3 g。 后續(xù)步驟同“金雞膠囊”。 （3）金雞顆粒：精密稱(chēng)取裝量差異項(xiàng)下粉末約30 g。精密加入70%甲醇-鹽酸（100∶1）混合溶液40 mL，稱(chēng)定質(zhì)量。后續(xù)步驟同“金雞膠囊”。 （4）金雞薄膜衣片：精密稱(chēng)取片重差異項(xiàng)下粉末約1.0 g，后續(xù)步驟同“金雞膠囊”。（5）金雞糖衣片：精密稱(chēng)取片質(zhì)量差異項(xiàng)下約0.5g。后續(xù)步驟同“金雞膠囊”。

2.2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 以濃度為橫坐標(biāo)， 峰面積為縱坐標(biāo)， 得回歸方程Y藥根堿=5.59×104x-4 878 （R2=0.999 9，n=7），Y巴馬汀=6.06×104x+2 320（R2=0.999 9，n=7），Y小檗堿=5.81×104x+1 783（R2=0.999 9，n=7），表明藥根堿、 巴馬汀和小檗堿分別在0.758 8～189.696 0，0.283 3～70.821 9，0.692 2～173.053 2 μg/mL 范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6 次測(cè)定。 結(jié)果藥根堿、巴馬汀和小檗堿峰面積的RSD 分別是0.67%、0.08%、0.47%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24 h 取樣測(cè)定。結(jié)果藥根堿、巴馬汀和小檗堿的RSD 分別是0.60%、0.52%、0.63%（n=6），表明供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 藥根堿、巴馬汀和小檗堿的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)（μg/粒）分別為54.79、35.09、30.80，RSD分別為0.56%、0.64%、1.62%（n=6）， 表明方法重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的金雞膠囊樣品約0.75 g，共6 份，精密稱(chēng)定。 按照50%的取樣量+余下50%含量的對(duì)照品平行做6 份的方法， 各精密加入藥根堿、 巴馬汀和小檗堿對(duì)照品適量，按“2.2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。 結(jié)果藥根堿、 巴馬汀和小檗堿的加樣回收率分別為98.02%、98.68%、98.31%，RSD 分別為1.08%、1.17%、1.41%（n=6）。 表明方法回收率良好。

2.2.9 樣品測(cè)定 分別采用外標(biāo)法計(jì)算金雞制劑中藥根堿、巴馬汀和小檗堿的量。 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 金雞系列制劑樣品含量測(cè)定結(jié)果 （±s，μg）

表2 金雞系列制劑樣品含量測(cè)定結(jié)果 （±s，μg）

劑 型膠囊（粒）顆粒（袋）分散片（片）糖衣片（片）薄膜衣片（片）生產(chǎn)廠家廣西A廣東A廣東B廣西A湖南A廣東B廣東A廣西A廣西A批次8 2 2 3 5 4 2 2 6巴馬汀均值62.59±24.06 34.42±10.66 74.88±0.10 26.83±14.44 523.36±33.44 35.37±6.21 97.06±3.03 41.74±10.11 83.88±6.00藥根堿均值95.24±27.83 79.19±17.87 117.24±6.27 41.91±17.01 526.78±26.94 34.39±5.18 158.48±0.50 64.76±20.53 119.83±6.15小檗堿均值45.61±17.22 27.81±0.40 47.33±3.73 25.42±12.77 2101.39±16.11 27.70±4.11 91.31±3.48 39.83±7.36 78.66±6.86

2.3 金雞系列制劑樣品的特征圖譜

采用二極管陣列200～400 nm 掃描，在265 nm處生物堿主要成分鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿均有較強(qiáng)的吸收，檢測(cè)到其他色譜峰特征性強(qiáng)的成分響應(yīng)值也較好。 采集此波長(zhǎng)下60 min 色譜圖作為特征圖譜，結(jié)果見(jiàn)圖4～8。

3 討論

圖4 金雞膠囊色譜圖

圖5 金雞分散片色譜圖

圖6 金雞顆粒色譜圖

圖7 金雞薄膜衣片色譜圖

圖8 金雞糖衣片色譜圖

3.1 金雞系列制劑每次服用劑量為： 顆粒劑1 袋、膠囊劑4 粒，其余糖衣片、薄膜衣片、分散片均為6片，日服3 次。 含量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，同一廠家（廣西A）的4 種劑型中，單次供患者服用總生物堿量，以顆粒劑94.16 mg 最低， 而薄膜衣片高達(dá)1 694.22 mg，兩者相差近20 倍， 糖衣片877.98 mg 與膠囊劑813.76 mg 較接近。 在排除生產(chǎn)投料、飲片質(zhì)量差異及人員操作的因素外， 可推斷提取工藝不同。 由于這些制劑是在原研藥顆粒劑的基礎(chǔ)上通過(guò)簡(jiǎn)單改劑型而來(lái)， 批準(zhǔn)生產(chǎn)前沒(méi)有進(jìn)行臨床驗(yàn)證，其療效是否跟原研藥一致，有待于進(jìn)一步確證。

3.2 特征圖譜顯示，顆粒劑與薄膜衣片、糖衣片所含成分基本一致；而膠囊劑和分散片的色譜圖中，少了一個(gè)特征峰。 同一廠家，其飲片來(lái)源應(yīng)是一致的，若采用相同的生產(chǎn)工藝，其特征圖譜應(yīng)基本一致，由此可以初步推斷，金雞分散片、金雞膠囊與顆粒劑、薄膜衣片和糖衣片的提取工藝存在質(zhì)的差異。

3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

將不同劑型之間的生物堿含量， 應(yīng)用SPSS 16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行H 檢驗(yàn)，驗(yàn)證不同劑型之間所測(cè)生物堿含量差異，進(jìn)一步確定不同劑型之間質(zhì)量存在明顯差異。 以劑型和廠家為變量名，建立數(shù)據(jù)文件。 其統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 金雞系列制劑生物堿含量的H 檢驗(yàn)結(jié)果

故按α=0.05 水準(zhǔn)可認(rèn)為5 種劑型所測(cè)生物堿含量差異大， 驗(yàn)證了提取工藝明顯不一致的結(jié)論。故有必要將含量檢測(cè)訂入各品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.4 本文選取的指標(biāo)僅限于化學(xué)成分，故不免存在一定的局限性。 若能結(jié)合采用藥效和臨床研究，其方法和結(jié)果會(huì)更全面而客觀。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S]一部.北京：人民衛(wèi)生出版社，1977：771.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S]一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：296；79.

[3]劉士旺.金雞沖劑質(zhì)量研究[J].中成藥，1992，14(4)：9-10.

[4]張火旺. HPLC 法測(cè)定金雞片中原兒茶酸的含量[J]. 中國(guó)藥房，2012，23(16)：1 525-1 526.

[5]Dkless K，Schlottfeldt JL，Pasqual M，et al. Inhibition of invitrolymphocyte tansformation by the isoquinoline alkaloid berberine [J]. Pham Pharmacol，1995（47）：1 092-1 031.

[6]黃毅婷，游勇基.功勞木藥材特征圖譜研究和生物堿含量測(cè)定[J].海峽藥學(xué)，2012，24(1)：68-70.