• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    cGVHD患者外周血中CD45RA+和CD45RO+T淋巴細(xì)胞亞群的特點及其臨床意義

    2014-11-27 10:26:52王春苗羅燕飛甘慧泉周茂華
    中國免疫學(xué)雜志 2014年8期
    關(guān)鍵詞:記憶性移植物百分比

    羅 盈 王春苗 林 婷 羅燕飛 甘慧泉 周茂華

    (廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院/廣東省人民醫(yī)院,廣州 510000)

    異基因造血干細(xì)胞移植(Allogeneic haematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是目前治愈惡性血液病最有希望的手段,其最終目標(biāo)是通過供體來源的免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮移植物抗腫瘤(Graftversus-leukemia,GVL)效應(yīng)清除異??寺 5獹VL往往伴隨移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease,GVHD)的發(fā)生,引起多臟器的損傷,免疫缺陷和感染。目前GVHD仍然是影響造血干細(xì)胞移植的療效,限制其臨床廣泛應(yīng)用的主要因素之一??刂艷VHD的發(fā)生成為造血干細(xì)胞移植中迫切需要解決的問題。以往研究顯示,供體T細(xì)胞是誘導(dǎo)GVHD發(fā)生最為重要的致病細(xì)胞,這種致病性T細(xì)胞引起組織損傷,并伴有大量凋亡的發(fā)生[1]。本文就是探討在cGVHD患者外周血中CD45RA+與CD45RO+T細(xì)胞亞群的特點及其與病情之間的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 病例選擇 64例異基因造血干細(xì)胞移植患者均來自2001年3月至2009年9月廣東省人民醫(yī)院,其中男43例,女21例,年齡14~58歲,平均(29.6±9.1)歲。所有病例均首次植入成活,獲得造血重建。在64例患者中,未發(fā)生cGVHD發(fā)生21例,輕度cGVHD 15例,中度 cGVHD 18例,重度 cGVHD 10例。

    1.2 方法

    1.2.1 移植前預(yù)處理方案 改良的白消安/環(huán)磷酰胺(Bu/Cy)方案:Bu 1.0 mg/(kg·6 h),用 3 d;阿糖孢苷(Ara-C)2 g/m2,1 次;Cy 60 mg/kg,2 次,或單次全身照射+環(huán)磷酰胺(TBI/Cy)方案以通知線加速器為照射源(單次全身照射700~800 cGy;Cy 1.8 g/m2,2 次)。

    1.2.2 移植物抗宿主病(GVHD)預(yù)防 HLA相合移植后,給予環(huán)胞霉素A(CsA)、霉酚酸酯(MMF)及短程甲氨蝶呤(MTX)方案預(yù)防GVHD。HLA配型不合者靜脈滴注兔抗胸腺球蛋白(ATG),2.5 mg/kg,3~4 d。

    1.2.3 cGVHD的診斷和分級標(biāo)準(zhǔn) cGVHD的診斷主要是根據(jù)皮膚改變、口腔黏膜累及程度、肝功指標(biāo)、四肢關(guān)節(jié)累及情況以及病理結(jié)果進(jìn)行診斷。根據(jù)慢性移植物抗宿主病全球分級標(biāo)準(zhǔn)[2],綜合考慮患者臨床表現(xiàn)、實驗室檢查結(jié)果、放射學(xué)特征等因素,人們把有cGVHD特征的患者依照器官受損范圍及程度分為輕、中、重度3級。輕度cGVHD:僅有1~2個器官或部位受損(肺除外),無明顯功能影響(器官或部位受損為1級);器官或部位受損1級時癥狀相對較輕,如:皮膚改變的面積<18%且沒有硬化特征,口腔干燥、黏膜輕度萎縮但不影響進(jìn)食,ALT或AST低于正常上限值的2倍,體重減輕<5%,關(guān)節(jié)輕度僵硬但不影響日常生活活動等。中度cGVHD:①至少有1個器官或部位有表現(xiàn),但大部分功能還存在(器官或部位受損為2級);②3個或更多器官部位受損,但功能沒有完全損失(器官或部位受損為1級),肺部受損為1級,肺功能檢測指標(biāo):1 s用力呼氣容積(FEV1)為60%~79%或肺功能評分(LFS)3~5,走一樓層的階梯就感覺到呼吸困難。重度cGVHD:大部分功能受損,肺部受損為2級。器官或部位受損2級時,癥狀明顯加重,皮膚改變的面積達(dá)19%~50%或有表面硬化癥特征,口腔黏膜中度受損并在一定程度上影響進(jìn)食,丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶或天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶為正常上限值的2~5倍,體重減輕5%~15%,關(guān)節(jié)僵硬或攣縮并輕到中度影響日常生活活動,肺功能指標(biāo)FEV1 40%~59%或LFS 6~9,在平地走路就能感覺到呼吸困難。

    1.2.4 試劑和設(shè)備(1)鼠FITC-IgG1/PE-IgG1/PE-Cy5.5-IgG1、FITC-CD45/PE-CD14、FITC-CD4、PE-CD45RA、PE-CD45RO、PE-Cy5-CD8 單克隆抗體(monocolonal antibody,McAb)購自 Beckman-Coulter公司。紅細(xì)胞裂解液為0.83%氯化銨,洗滌液為含0.5%小牛血清的 PBS,固定液為1%多聚甲醛。(2)主要儀器是美國Becton Dickinson公司的FACSCalibur流式細(xì)胞儀。

    1.2.5 檢測方法(1)留取移植后(70±3)d患者清晨空腹靜脈血2 ml,EDTA-K2抗凝。(2)抗體組合為:① FITC-IgG1/PE-IgG1/PE-Cy5.5-IgG1;②FITC-CD45/PE-CD14;③FITC-CD4/PE-CD45RA/PE-Cy5-CD8;④FITC-CD4/PE-CD45RO/PE-Cy5-CD8;(3)各檢測管中加入相應(yīng)組合的熒光素標(biāo)記的McAb 各 5 μl,再加入混勻的抗凝血 50 μl,混勻,室溫避光孵育20 min。加入溶血素2 ml,混勻,放置5~10 min,待紅細(xì)胞裂解。1 000~1 200 r/min離心5 min,棄上清液,懸浮細(xì)胞,加入PBS 2 ml,混勻,800~1 000 r/min離心5 min,棄上清液。懸浮細(xì)胞,加入固定液 300 μl,混勻,放置 2℃~8℃ 避光處,24 h內(nèi)上機(jī)分析。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包處理,各計量資料用表示。通過兩個獨立樣本t檢驗分析無cGVHD組與cGVHD組間各檢測指標(biāo)有無差異,如P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;進(jìn)一步應(yīng)用單因素方差分析對各組均數(shù)做顯著性檢驗,如多組比較有顯著性差異,再采用q檢驗作樣本之間的兩兩比較,P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 與未發(fā)生cGVHD相比,cGVHD患者外周血中CD4+CD45RA+細(xì)胞百分比均明顯降低(P<0.05),CD4+CD45RO+細(xì)胞百分比均明顯增高(P<0.05)。CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+細(xì)胞百分比均無明顯改變,見表1。

    2.2 輕、中、重度cGVHD組分別與未發(fā)生cGVHD組比較,CD4+CD45RA+細(xì)胞百分比均明顯低于未發(fā)生cGVHD組(P<0.05),CD4+CD45RO+細(xì)胞百分比均明顯高于未發(fā)生cGVHD組(P<0.05)。CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+細(xì)胞百分比均無明顯改變。不同程度(輕、中、重度)的cGVHD之間比較,CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+細(xì)胞百分比均無明顯改變,見表2。

    表1cGVHD組和無cGVHD組外周血CD4+CD45RA+,CD4+CD45RO+,CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+檢測結(jié)果(%,)Tab.1 Determination results of CD4+CD45RA+,CD4+CD45RO+,CD8+CD45RA+and CD8+CD45RO+in peripheral blood of non-cGVHD and cGVHD(%,)

    表1cGVHD組和無cGVHD組外周血CD4+CD45RA+,CD4+CD45RO+,CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+檢測結(jié)果(%,)Tab.1 Determination results of CD4+CD45RA+,CD4+CD45RO+,CD8+CD45RA+and CD8+CD45RO+in peripheral blood of non-cGVHD and cGVHD(%,)

    Note:Compared with non-cGVHD group,1)P <0.05.

    Groups n CD4+CD45RA+ CD4+CD45RO+ CD8+CD45RA+ CD8+CD45RO +Non-cGVHD 21 50.29±13.62 68.52±14.71 83.82±82.47±9.20 50.13±15.91 7.93 47.34±12.90 cGVHD 33 37.29±13.471) 82.60±13.701)

    表2 輕、中、重度 cGVHD各組和無 cGVHD組外周血 CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和 CD8+CD45RO+檢測結(jié)果(%,)Tab.2 Determination results of CD4+CD45RA+,CD4+CD45RO+,CD8+CD45RA+and CD8+CD45RO+in peripheral blood of non-cGVHD and cGVHD within different grade(%,)

    表2 輕、中、重度 cGVHD各組和無 cGVHD組外周血 CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和 CD8+CD45RO+檢測結(jié)果(%,)Tab.2 Determination results of CD4+CD45RA+,CD4+CD45RO+,CD8+CD45RA+and CD8+CD45RO+in peripheral blood of non-cGVHD and cGVHD within different grade(%,)

    Note:Compared with non-cGVHD group,1)P <0.05.

    Groups n CD4+CD45RA+ CD4+CD45RO+ CD8+CD45RA+ CD8+CD45RO +Non-cGVHD 21 50.29±13.62 68.52±14.71 83.82±80.55±15.82 55.44±8.45 7.93 47.34±12.90 Light cGVHD 15 36.96±12.651) 80.50±10.811) 83.14±10.30 53.10±19.01 Mide cGVHD 18 38.16±14.791) 82.27±6.151) 83.10±15.39 45.87±15.54 Severe cGVHD 10 35.15±13.441) 86.05±11.481)

    3 討論

    GVHD是allo-HSCT后在受者體內(nèi)植活的供者淋巴細(xì)胞對宿主器官發(fā)生的以免疫性損傷為主要特征的免疫性疾病。GVHD的發(fā)生率和嚴(yán)重程度與主要組織相容性抗原的相合程度,移植物中T淋巴細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系最為密切。由于主要組織相容性抗原的復(fù)雜性和多態(tài)性,絕大多數(shù)造血干細(xì)胞移植是在不完全相合的情況下進(jìn)行的,其GVHD的發(fā)生率達(dá)70%,GVHD的相關(guān)死亡率占移植死亡的50%以上[3]??梢奊VHD的發(fā)生幾率很高,預(yù)后也很差。而臨床對于GVHD的診斷仍停留在疾病的發(fā)病過程中,沒有一項獨立的實驗室預(yù)測指標(biāo)能有效診斷GVHD的發(fā)生。為此,我們對64例異基因造血干細(xì)胞移植患者進(jìn)行回顧性分析,分析無cGVHD組與cGVHD組間CD45RA+和CD45RO+T細(xì)胞的變化,以了解 CD45RA+和 CD45RO+T細(xì)胞亞群與cGVHD發(fā)生之間的關(guān)系。

    CD45RA和CD45RO是CD45(白細(xì)胞共同抗原)的2種異型,均屬Ⅰ型跨膜蛋白,廣泛存在于白細(xì)胞表面,其胞漿均具有酪氨酸磷酸酶活性,在淋巴細(xì)胞的發(fā)育成熟、功能調(diào)節(jié)及信號傳遞中具有重要意義。根據(jù)CD45亞型的表達(dá)與否,可以大致將人的T細(xì)胞分為初始型T細(xì)胞(CD45RA+T細(xì)胞)和記憶性T細(xì)胞(CD45RO+T細(xì)胞)。初始型T細(xì)胞與記憶性T細(xì)胞的功能有所不同。CD45RA+的初始型T細(xì)胞不分泌IFN-γ、IL-4或IL-5,只產(chǎn)生低水平的IL-2,具有抑制免疫的作用[4]。而CD45RO+記憶性T細(xì)胞可以分泌IL-2、IL-4或IFN-γ等多種細(xì)胞因子,當(dāng)再一次接觸同一抗原刺激時,其活化閾值更低,有較強(qiáng)的效應(yīng)功能[5]。有一項免疫缺陷鼠(無脾、淋巴結(jié)和黏膜淋巴組織)移植模型研究顯示,只要幾千個同種反應(yīng)性記憶性T細(xì)胞向移植物遷移,就能介導(dǎo)移植排斥反應(yīng)[6]。

    人類身體中存在相當(dāng)數(shù)量的CD45RO+T細(xì)胞,即同種反應(yīng)性記憶性T細(xì)胞。這種細(xì)胞的產(chǎn)生是由于暴露在同種抗原下,比如妊娠、輸血或早先的器官移植。然而,這種CD45RO+同種反應(yīng)性記憶性T細(xì)胞也存在于從未接觸過外源組織的個體中[7]。此次實驗結(jié)果顯示發(fā)生cGVHD患者體內(nèi)的CD4+CD45RO+T細(xì)胞明顯高于無 cGVHD患者,提示CD4+CD45RO+T細(xì)胞的存在數(shù)量與移植后發(fā)生cGVHD有密切關(guān)系。我們可以推測cGVHD的發(fā)生可能是由交叉反應(yīng)性記憶性T細(xì)胞所介導(dǎo)。這類記憶性T細(xì)胞可能是早先與病毒或細(xì)菌性抗原接觸所產(chǎn)生,能識別同種抗原。它們再次接觸到相同的抗原后,迅速大量活化,產(chǎn)生細(xì)胞因子,發(fā)生一系列免疫反應(yīng),攻擊正常的組織細(xì)胞,造成了器官組織功能的損害。但輕、中、重度的 cGVHD之間的CD4+CD45RO+T細(xì)胞比較無明顯變化,提示CD4+CD45RO+T細(xì)胞與病情的進(jìn)展無明顯關(guān)系。

    在本研究中,CD8+亞群并未與CD4+亞群呈現(xiàn)出一致性變化。與對照組比較,發(fā)生不同程度的cGVHD患者體內(nèi)CD8+CD45RO+T細(xì)胞均無明顯變化。這可能與標(biāo)本采集時間有關(guān)。在allo-HSCT小鼠模型研究中發(fā)現(xiàn)[8],在GVHD發(fā)生過程中有抗原特異性記憶性CD8+T細(xì)胞形成,但記憶性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量呈現(xiàn)一定的波動,在移植后14 d達(dá)到最高峰,28 d時開始下降。對細(xì)胞表面的凋亡相關(guān)分子表達(dá)分析提示記憶性CD8+T細(xì)胞的減少與凋亡的發(fā)生有關(guān)。以往研究也表明記憶性CD8+T細(xì)胞和記憶性CD4+T細(xì)胞的產(chǎn)生和維持途徑有所不同[9],受多種因素制約,還需要進(jìn)一步的研究。

    也有人猜測,患者通過造血干細(xì)胞移植后,CD4+CD45RA+T細(xì)胞均明顯降低,是因為造血干細(xì)胞移植能有效切斷患者CD4+CD45RA+T細(xì)胞的供給途經(jīng),這種變化有利于患者的長期緩解[10]。但這些理論需要更多的實驗來證實。

    綜上所述,本實驗結(jié)果表明,異基因造血干細(xì)胞移植后,發(fā)生cGVHD患者外周血中CD4+CD45RA+T細(xì)胞明顯減少,CD4+CD45RO+T細(xì)胞明顯增多,CD4+的同種反應(yīng)性記憶性T細(xì)胞可能對cGVHD的發(fā)生具有極其深遠(yuǎn)的意義。通過檢測CD4+CD45RO+T細(xì)胞的百分比,以及CD4+CD45RA+T細(xì)胞和CD4+CD45RO+T細(xì)胞的比例可以輔助我們判斷cGVHD的發(fā)生。

    [1]Ferrara JLM,Levy R,Chao NJ.Pathophysiologic mechanisms of acute graft-vs-host disease[J].Biol Blood Marrow Transplant,1999,5(6):347-356.

    [2]Filipovich AH,Weisdorf D,Pavletic S,et al.National institutes of health consensus development project on criteria for clinical trials in chronic graft-versus-host disease:I.diagnosis and staging working group report[J].Biol Blood Marrow Transplant,2005,11(12):945-956.

    [3]Robin M,Porcher R,De Castro Araujo R,et al.Risk factor for late infections after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation from a matched related donor[J].Biol Blood Marrow Transplant,2007,13(11):1304-1312.

    [4]畢勝利,戰(zhàn)思恩,宋玉國,等.慢性乙型肝炎患者外周血CD45RA+,CD45RO+T淋巴細(xì)胞亞群的特點及臨床意義[J].中國免疫學(xué)雜志,2007,23(6):570-573.

    [5]徐高四,陳江華.記憶性T細(xì)胞與移植免疫關(guān)系研究現(xiàn)狀[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2006,31(9):922-924.

    [6]Chalasani G,Dai Z,Konieczny BT,et al.Recall and propagation of allospecific memory T cells independent of secondary lymphoid organs[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99:6175.

    [7]Le Moine A,Vokaer B,Charbonnier LM.A brief focus on memorycells in transplantation[J].Transplant Proc,2009,41(8):3361-3362.

    [8]丘 凌,何 珊,曹 琦,等.同種記憶性CD8+T細(xì)胞與移植物抗宿主病相關(guān)性的研究[J].實驗動物與比較醫(yī)學(xué),2007,27(3):163-166.

    [9]Machura E,Mazur B,Pieniazek W,et al.Expression of naive/memory(CD45RA/CD45RO)markers by peripheral blood CD4+and CD8+T cells in children with asthma[J].Arch Immunol Ther Exp(Warsz),2008,56(1):55-62.

    [10]陳軍浩,歐陽建,孫雪梅,等.自身免疫病患者自體造血干細(xì)胞移植后CD4+CD45RA+及CD4+CD45RO+T輔助淋巴細(xì)胞亞群的改變[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2005,20(6):1-3.

    猜你喜歡
    記憶性移植物百分比
    本刊常用的不需要標(biāo)注中文的縮略語(二)
    器官移植中記憶性T細(xì)胞的研究進(jìn)展
    黏膜記憶性T 細(xì)胞功能
    普通照明用自鎮(zhèn)流LED燈閃爍百分比測量不確定度分析
    電子制作(2017年20期)2017-04-26 06:57:46
    記憶性B細(xì)胞體外擴(kuò)增影響因素的研究進(jìn)展①
    肝癌患者外周血Treg、Th17百分比及IL-17水平觀察
    表現(xiàn)為扁平苔蘚樣的慢性移植物抗宿主病一例
    超聲修復(fù)有記憶性鉛蓄電池研究
    前交叉韌帶移植物和對側(cè)前交叉韌帶的存活率:至少15年的隨訪研究
    商貿(mào)投資最適宜國家和地區(qū)
    海外星云 (2012年24期)2012-04-29 00:30:09
    99热这里只有是精品50| 亚洲精品一区av在线观看| 麻豆国产av国片精品| 91av网站免费观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | www.自偷自拍.com| 人妻夜夜爽99麻豆av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99国产极品粉嫩在线观看| 午夜影院日韩av| 最好的美女福利视频网| 亚洲无线在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲第一电影网av| 在线观看66精品国产| www日本黄色视频网| 91成年电影在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 一本精品99久久精品77| 成人一区二区视频在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 在线观看66精品国产| 99国产精品一区二区三区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 中文字幕最新亚洲高清| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲五月天丁香| 中国美女看黄片| 69av精品久久久久久| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品 国内视频| 最新在线观看一区二区三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 波多野结衣高清无吗| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产真实乱freesex| 天堂影院成人在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 男人舔女人下体高潮全视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲av五月六月丁香网| 两个人免费观看高清视频| 露出奶头的视频| 制服诱惑二区| 一本精品99久久精品77| 中文亚洲av片在线观看爽| 欧美黑人精品巨大| 日韩高清综合在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 婷婷亚洲欧美| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 两个人视频免费观看高清| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久性视频一级片| 最新美女视频免费是黄的| 欧美日韩精品网址| 在线永久观看黄色视频| 亚洲五月天丁香| 狂野欧美激情性xxxx| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲美女黄片视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品永久免费网站| 曰老女人黄片| 99国产极品粉嫩在线观看| 黄色视频不卡| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产探花在线观看一区二区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 丰满人妻一区二区三区视频av | 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| svipshipincom国产片| 国产真人三级小视频在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品一区二区精品视频观看| 91九色精品人成在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| netflix在线观看网站| 国产午夜精品论理片| 一级毛片精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲国产高清在线一区二区三| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 身体一侧抽搐| 免费看a级黄色片| 午夜免费观看网址| 最近视频中文字幕2019在线8| 中亚洲国语对白在线视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲自拍偷在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲成av人片在线播放无| 日韩精品青青久久久久久| 国产一区二区激情短视频| 国产成人aa在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲成人久久性| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲免费av在线视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产私拍福利视频在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美在线黄色| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲av成人av| 99国产综合亚洲精品| 香蕉国产在线看| 看免费av毛片| 男人舔奶头视频| 亚洲av电影在线进入| 亚洲免费av在线视频| 日本熟妇午夜| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 很黄的视频免费| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产av在哪里看| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产亚洲欧美98| 不卡av一区二区三区| avwww免费| 1024视频免费在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 成人av一区二区三区在线看| 九九热线精品视视频播放| 男人的好看免费观看在线视频 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 日韩欧美国产一区二区入口| 男人舔奶头视频| 国产成年人精品一区二区| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 18禁观看日本| 欧美性猛交黑人性爽| 国产亚洲欧美98| 成年版毛片免费区| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美丝袜亚洲另类 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品国产高清国产av| 久久天堂一区二区三区四区| 最近在线观看免费完整版| 亚洲国产欧美网| 美女免费视频网站| 亚洲成av人片免费观看| 日韩国内少妇激情av| 久久亚洲精品不卡| 可以在线观看的亚洲视频| 无限看片的www在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 久久香蕉激情| 免费无遮挡裸体视频| 国产91精品成人一区二区三区| 久久香蕉激情| 成人国产综合亚洲| 丰满的人妻完整版| 后天国语完整版免费观看| 国产精品野战在线观看| 一a级毛片在线观看| 日本 欧美在线| 九色国产91popny在线| 身体一侧抽搐| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| www.熟女人妻精品国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 一进一出抽搐动态| 手机成人av网站| 久久久久久九九精品二区国产 | 看黄色毛片网站| 男女那种视频在线观看| 不卡av一区二区三区| 国产视频一区二区在线看| 亚洲精品在线美女| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品欧美国产一区二区三| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久精品国产综合久久久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国模一区二区三区四区视频 | 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 丰满的人妻完整版| 国产日本99.免费观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日本 av在线| 香蕉国产在线看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品国产亚洲在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 精品人妻1区二区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 天堂影院成人在线观看| 色在线成人网| 1024手机看黄色片| 白带黄色成豆腐渣| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲第一电影网av| 亚洲乱码一区二区免费版| 夜夜爽天天搞| 欧美乱码精品一区二区三区| 黄片小视频在线播放| 午夜激情福利司机影院| 在线a可以看的网站| 国产精品九九99| 老司机午夜福利在线观看视频| 全区人妻精品视频| 免费观看人在逋| 日韩欧美国产在线观看| 在线视频色国产色| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美三级亚洲精品| 欧美成人性av电影在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 色综合亚洲欧美另类图片| 午夜激情福利司机影院| 免费在线观看影片大全网站| 又大又爽又粗| 一本大道久久a久久精品| 99精品欧美一区二区三区四区| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲精品在线美女| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲欧美激情综合另类| 一区二区三区激情视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久久久久久久中文| 国产91精品成人一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| 91字幕亚洲| 久久精品成人免费网站| 欧美性长视频在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲av成人精品一区久久| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美色视频一区免费| 欧美激情久久久久久爽电影| 制服丝袜大香蕉在线| 看免费av毛片| 久久天堂一区二区三区四区| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 免费在线观看影片大全网站| 极品教师在线免费播放| 色老头精品视频在线观看| 精品国产亚洲在线| 亚洲成人精品中文字幕电影| 在线观看一区二区三区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久99热这里只有精品18| 桃红色精品国产亚洲av| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99re在线观看精品视频| av视频在线观看入口| 女人被狂操c到高潮| 午夜激情av网站| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 免费在线观看黄色视频的| 中出人妻视频一区二区| 黄片小视频在线播放| videosex国产| 男女视频在线观看网站免费 | 免费看a级黄色片| 免费看美女性在线毛片视频| 免费观看精品视频网站| 亚洲一区中文字幕在线| 波多野结衣高清作品| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 不卡一级毛片| 久久久久九九精品影院| 欧美性长视频在线观看| 成在线人永久免费视频| 精品第一国产精品| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美一区二区精品小视频在线| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 国产高清视频在线观看网站| 国产区一区二久久| 久久精品人妻少妇| 男人的好看免费观看在线视频 | 一个人观看的视频www高清免费观看 | 久久中文字幕人妻熟女| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲男人天堂网一区| 国产久久久一区二区三区| 色哟哟哟哟哟哟| 这个男人来自地球电影免费观看| 99国产精品一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| √禁漫天堂资源中文www| 久久久久久人人人人人| 1024手机看黄色片| 精品不卡国产一区二区三区| cao死你这个sao货| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久久久久久久免费视频了| 久久这里只有精品中国| 国产激情久久老熟女| 嫩草影视91久久| 真人一进一出gif抽搐免费| 天天一区二区日本电影三级| 日韩欧美免费精品| 久久 成人 亚洲| 波多野结衣高清作品| 亚洲av电影不卡..在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 最近在线观看免费完整版| 亚洲熟女毛片儿| 日本免费a在线| 午夜成年电影在线免费观看| 美女免费视频网站| av福利片在线| 亚洲 国产 在线| 午夜福利在线观看吧| 婷婷亚洲欧美| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日本一二三区视频观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲成人国产一区在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产av又大| 欧美不卡视频在线免费观看 | 日韩国内少妇激情av| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲电影在线观看av| 国产成人精品无人区| 国产av麻豆久久久久久久| 老汉色av国产亚洲站长工具| 级片在线观看| 在线观看一区二区三区| 欧美极品一区二区三区四区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 99久久国产精品久久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| tocl精华| 久热爱精品视频在线9| 男女视频在线观看网站免费 | 亚洲av美国av| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 一进一出抽搐动态| 熟女电影av网| 在线观看免费日韩欧美大片| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲性夜色夜夜综合| 在线观看舔阴道视频| 国产av不卡久久| 一本精品99久久精品77| 宅男免费午夜| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产不卡一卡二| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 此物有八面人人有两片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲成av人片免费观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲五月婷婷丁香| 久久国产精品影院| 久久精品成人免费网站| 婷婷精品国产亚洲av| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲第一电影网av| 国产成年人精品一区二区| 欧美一级a爱片免费观看看 | 看免费av毛片| 亚洲av美国av| 国产1区2区3区精品| 久久中文看片网| 久久人妻av系列| 国产免费av片在线观看野外av| 天堂影院成人在线观看| 欧美黑人精品巨大| 高清在线国产一区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产高清videossex| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲自拍偷在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 我要搜黄色片| www日本在线高清视频| 露出奶头的视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 97碰自拍视频| 亚洲精品美女久久av网站| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久香蕉精品热| 国产三级中文精品| 一个人免费在线观看电影 | x7x7x7水蜜桃| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产一区二区在线观看日韩 | 中文字幕久久专区| 99久久精品热视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久 成人 亚洲| 亚洲,欧美精品.| xxxwww97欧美| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲黑人精品在线| 一区二区三区国产精品乱码| 天堂动漫精品| 国产伦在线观看视频一区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产成人精品无人区| 精品久久久久久久久久久久久| 国产精品久久久av美女十八| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 免费看日本二区| 国产一区在线观看成人免费| 免费看日本二区| 全区人妻精品视频| 国产成人av教育| 一进一出抽搐gif免费好疼| 三级国产精品欧美在线观看 | 中亚洲国语对白在线视频| 全区人妻精品视频| 高清毛片免费观看视频网站| 全区人妻精品视频| 久久香蕉激情| 一区二区三区高清视频在线| 又大又爽又粗| 久久精品人妻少妇| 99久久国产精品久久久| 国产野战对白在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 午夜福利18| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲美女黄片视频| 欧美极品一区二区三区四区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲第一电影网av| 久久精品影院6| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲av美国av| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久国产精品麻豆| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产精品久久久久久精品电影| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲真实伦在线观看| 99热这里只有精品一区 | avwww免费| 色综合欧美亚洲国产小说| АⅤ资源中文在线天堂| 国产在线精品亚洲第一网站| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 大型av网站在线播放| 亚洲一区中文字幕在线| 国产精品久久视频播放| 大型黄色视频在线免费观看| 很黄的视频免费| 免费看a级黄色片| 首页视频小说图片口味搜索| 久久中文看片网| 久久久精品大字幕| 黄色视频,在线免费观看| 午夜日韩欧美国产| 精品国产乱码久久久久久男人| 一级黄色大片毛片| 中国美女看黄片| 婷婷亚洲欧美| 一级作爱视频免费观看| 此物有八面人人有两片| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品av视频在线免费观看| 少妇的丰满在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 舔av片在线| 观看免费一级毛片| 亚洲激情在线av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 91麻豆av在线| 亚洲 国产 在线| 日韩高清综合在线| 国产熟女xx| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲成人免费电影在线观看| 69av精品久久久久久| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产真人三级小视频在线观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 小说图片视频综合网站| 天天添夜夜摸| 一级毛片高清免费大全| 亚洲美女黄片视频| 麻豆国产av国片精品| 精品福利观看| 久久久精品欧美日韩精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品一区二区三区四区五区乱码| 12—13女人毛片做爰片一| 久9热在线精品视频| 亚洲专区国产一区二区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国内精品一区二区在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产熟女xx| 欧美日韩乱码在线| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 精品久久久久久久久久免费视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 国内精品久久久久精免费| 麻豆国产97在线/欧美 | 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美成人性av电影在线观看| 国产黄片美女视频| 女警被强在线播放| 午夜福利高清视频| 久久草成人影院| 99热只有精品国产| 真人做人爱边吃奶动态| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 色哟哟哟哟哟哟| 色综合欧美亚洲国产小说| 午夜免费观看网址| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 麻豆久久精品国产亚洲av| xxxwww97欧美| 亚洲美女视频黄频| 精品日产1卡2卡| 天堂√8在线中文| 搡老熟女国产l中国老女人| 又大又爽又粗| 999久久久国产精品视频| 色尼玛亚洲综合影院| 床上黄色一级片| 国产1区2区3区精品| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产亚洲av高清不卡| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产av一区二区精品久久| netflix在线观看网站| 国产成人精品无人区| 又黄又粗又硬又大视频| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美日韩精品网址| 一级片免费观看大全| 久久久久久免费高清国产稀缺| 无人区码免费观看不卡| 香蕉av资源在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 免费观看人在逋| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| xxxwww97欧美| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产1区2区3区精品| 岛国在线免费视频观看| 精品国产亚洲在线| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久这里只有精品中国| 精品国产乱子伦一区二区三区| 搡老妇女老女人老熟妇| 黑人操中国人逼视频| 亚洲国产欧美人成| 我要搜黄色片| 国产伦在线观看视频一区| 69av精品久久久久久| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日本免费a在线| 婷婷精品国产亚洲av| 久久久久性生活片| 一级a爱片免费观看的视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 精品国产亚洲在线| 俺也久久电影网| 全区人妻精品视频| 久久久国产成人免费| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲一区中文字幕在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲色图av天堂| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产精品亚洲一级av第二区| 成人午夜高清在线视频| 黄色成人免费大全| 久久精品91无色码中文字幕|