舒巴坦匹酯在肉雞體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究

何 斌，操繼躍，陳 潔，陸 征，李在建，楊文海，童新紅，江 暉

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，武漢430070；2.武漢市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，武漢430208）

舒巴坦匹酯（Sulbactam Pivoxyl）為 β-內(nèi)酰胺酶抑制劑藥物，常以舒巴坦為原料，在其基礎(chǔ)上引入（2，2-二甲基-1-氧代丙氧）甲基而得的酯類化合物。在胃腸道吸收后進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，在血液中迅速轉(zhuǎn)化為舒巴坦而發(fā)揮抑酶作用［1-2］，與直接口灌舒巴坦相比，提高了其血藥濃度和生物利用度；舒巴坦通過與β-內(nèi)酰胺酶不可逆性結(jié)合而發(fā)揮對(duì)酶的抑制作用，保護(hù)β-內(nèi)酰胺類藥物對(duì)敏感細(xì)菌原有的抗菌活性。因此，臨床上常將其與β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)產(chǎn)酶耐藥菌發(fā)揮協(xié)同增效作用，提高耐藥菌的敏感性［3-4］。但是，目前國(guó)內(nèi)外未見舒巴坦匹酯及其相關(guān)物質(zhì)在家禽體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的研究報(bào)道。因此，為了掌握其在家禽體內(nèi)的吸收、分布、轉(zhuǎn)化及消除規(guī)律，為家禽養(yǎng)殖臨床用藥提供理論指導(dǎo)，開展其在肉雞體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)研究顯得十分必要。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 美國(guó)Agilent 1100型高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，Agilent ZORBAX SB-Aq柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；原料藥品均由四川華蜀動(dòng)物藥業(yè)有限公司提供，舒巴坦鈉原料藥，批號(hào)：20100312，含量 98%；舒巴坦匹酯原料藥，批號(hào)：20100406，含量99%；舒巴坦對(duì)照品，上海安譜科學(xué)儀器有限公司提供，批號(hào)：CDCT-C 16986600，含量：99.0%。乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，確立色譜條件為如下：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-Aq柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)為 210 nm；流動(dòng)相為乙腈：0.01 mol／L KH2PO4（pH 4.0） ＝ 7 ∶93；流速為1.0 mL／min；進(jìn)樣量為20 μL；柱溫為（30±0.1） ℃。

1.2.2 血漿樣品處理 舒巴坦：準(zhǔn)確吸取血漿0.5 mL，加入 1.0 mol／L HCl溶液 0.5 mL，旋渦振蕩1 min，然后加入3 mL乙醚提取兩次，每次旋渦振蕩1 min，3000 r／min離心，準(zhǔn)確吸取乙醚層，合并兩次乙醚提取液于10 mL尖底聚丙烯離心管中，35℃水浴蒸干，殘留物加200 μL流動(dòng)相充分溶解，12000 r／min 高速離心10 min，取上清20 μL 進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。

1.2.3 血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 向9支5 mL聚丙烯離心管中各加入0.5 mL空白血漿，留一支作空白對(duì)照，然后依次加入對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)工作液，便得到藥物濃度依次為 0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 μg／mL的血漿樣品。按照舒巴坦血漿樣品處理方法處理后，進(jìn)樣分析。分別以測(cè)得舒巴坦的峰面積（A）為橫坐標(biāo)，濃度（C）為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得舒巴坦的回歸方程為C＝ 0.0332A+0.0011，r為 0.9992。

1.2.4 方法學(xué)驗(yàn)證 取空白血漿0.5 mL，分別添加適量舒巴坦標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度分別為 10、1.0、0.1 μg／mL的血漿樣品，按照血漿樣品的處理方法處理，并進(jìn)行HPLC檢測(cè)，每個(gè)濃度設(shè)置5個(gè)平行，測(cè)定結(jié)果為日內(nèi)變異系數(shù)在5%以內(nèi)；重復(fù)檢測(cè)5 d，測(cè)定結(jié)果為日間變異系數(shù)在10%以內(nèi)。舒巴坦的萃取回收率為89.69%～96.33%；LOD、LOQ分別為 0.01、0.04 μg／mL。

1.2.5 藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)用三黃肉雞購(gòu)于養(yǎng)雞場(chǎng)，35日齡，雌雄各半，試驗(yàn)前適應(yīng)飼喂7 d，給藥前將20羽三黃肉雞隨機(jī)分成兩組，禁食12 h，采用單一兩期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別給藥。貴要靜脈注射和口灌兩種給藥方式，其中一組以含舒巴坦3.75 mg／kg.B.W（舒巴坦一般與阿莫西林等抗生素按照4：1聯(lián)合應(yīng)用，獸藥典規(guī)定阿莫西林的臨床使用劑量為15 mg／kg.B.W）劑量于貴要靜脈注射舒巴坦鈉注射液，另一組以1 mL／kg.B.W劑量口灌舒巴坦匹酯口灌液（舒巴坦的濃度為3.75 mg／mL），間隔10 d，交叉重復(fù)給藥。

貴要靜脈注射給藥后，剝離另一側(cè)貴要靜脈，分別于 0.083、0.167、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8 h 采血1 mL左右；口灌給藥后，分別于 0.083、0.167、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、12 h 采血 2 mL 左右，置于已加肝素鈉的聚丙烯離心管中，以3000 r／min離心15 min，取上清液于-20℃冷凍保存，待測(cè)定。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析 方法學(xué)驗(yàn)證考察數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件分析處理；藥時(shí)曲線圖和消除動(dòng)態(tài)圖采用Excel軟件繪制；藥物動(dòng)力學(xué)模型擬合及參數(shù)計(jì)算均采用3P97藥動(dòng)學(xué)軟件分析，藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)可根據(jù)公式進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 色譜行為 通過反復(fù)多次試驗(yàn)所建立的色譜條件，基線平穩(wěn)，藥物峰形良好，樣品中阿莫西林及舒巴坦在各自的色譜條件下均能與雜質(zhì)峰良好分離。結(jié)果表明，本測(cè)定方法簡(jiǎn)便，穩(wěn)定，分檢測(cè)效率高，色譜峰良好（圖1～圖3）。

圖1 空白血漿對(duì)照色譜圖

圖2 空白血漿添加舒巴坦色譜圖（1.0 μg／mL）

圖3 舒巴坦樣品色譜圖

2.2 藥物動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù) 按照試驗(yàn)設(shè)定方案進(jìn)行給藥和樣品處理，經(jīng)高效液相色譜分析檢測(cè)、軟件分析計(jì)算。靜脈注射舒巴坦和口灌舒巴坦匹酯的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表1～表2。

靜脈注射舒巴坦鈉后，藥-時(shí)曲線符合無吸收二室開放模型，其藥-時(shí)方程為 C ＝6.4838e-7.6842t+3.9915e-0.7541t，口灌舒巴坦匹酯后，藥-時(shí)曲線符合有吸收一室開放模型，其藥-時(shí)方程為 C＝1.4554e-0.3392t-1.4554e-8.0039t。 根據(jù)兩者 AUC 得舒巴坦匹酯的生物利用度F為66.96%±5.95%。藥物在血漿中的藥-時(shí)曲線見圖4～圖5。

表1 靜脈注射舒巴坦鈉（3.75 mg／kg.B.W）在肉雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù) （n＝20）

表2 口灌舒巴坦匹酯 （3.75 mg／kg.B.W）在肉雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù) （n＝20）

圖4 舒巴坦鈉靜注給藥的血藥濃度-時(shí)間曲線

3 討論

圖5 舒巴坦匹酯口灌給藥的血藥濃度-時(shí)間曲線

本試驗(yàn)中，建立了舒巴坦的高效液相色譜檢測(cè)方法，方法簡(jiǎn)單、快速。舒巴坦具有很多活性基團(tuán)，在液相色譜檢測(cè)時(shí)，藥物中的陽(yáng)離子易與色譜柱中游離的硅羥基經(jīng)范德華力作用或發(fā)生離子反應(yīng)，使其在色譜柱中被吸附，洗脫時(shí)間延長(zhǎng)，導(dǎo)致色譜峰拖尾。在進(jìn)行分析時(shí)，選擇雙峰端C18硅膠色譜柱或者選擇洗脫能力較強(qiáng)的流動(dòng)相均可以有效解決這種問題。本試驗(yàn)比較了Agilent Extend-C18和Agilent ZORBAX SB-Aq兩種色譜分析柱的分析效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Extend-C18色譜柱的色譜峰出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，色譜峰對(duì)稱性不符合分析要求，在流動(dòng)相中添加乙酸胺、三乙胺防等防拖尾試劑，也不能抑制其拖尾。進(jìn)行分析總結(jié)后發(fā)現(xiàn)Extend-C18色譜柱主要用于偏堿性藥物（pH 2～12）的分離，三乙胺主要抑制堿性藥物的色譜峰拖尾。最后采用ZORBAX SB-Aq色譜柱，適用于酸性條件下（pH 1～7）酸性藥物的分離，且適合高水相的流動(dòng)相，可以走100%純水，符合本試驗(yàn)流動(dòng)相中95%的高水相的要求，色譜峰無拖尾現(xiàn)象，對(duì)稱性達(dá)0.9以上，舒巴坦的藥物峰與雜質(zhì)峰分離良好，有效的提高了檢測(cè)的靈敏度，使藥物與雜質(zhì)得到了有效分離。

目前未見舒巴坦在禽類相關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)方面的報(bào)道，相關(guān)動(dòng)力學(xué)特征不好比較；本試驗(yàn)測(cè)出舒巴坦匹酯在肉雞體內(nèi)的生物利用度為66.96%±5.95%，比舒巴坦鈉20%的生物利用度要高很多，這與楊永革［5］等報(bào)道的舒巴坦匹酯在人體內(nèi)的生物利用度80%要低一些，這可能是種屬的差異，主要是與禽類的消化道結(jié)構(gòu)功能有腺胃和肌胃，影響藥物吸收；以及禽類體溫較高，代謝較快等原因所致。

舒巴坦匹酯的藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)表明，舒巴坦匹酯在肉雞體內(nèi)吸收迅速、分布快，與［6-8］研究報(bào)道的β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物阿莫西林、氨芐西林等在肉雞體內(nèi)的消除半衰期和達(dá)峰時(shí)間較相近，顯示舒巴坦匹酯與β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物阿莫西林、氨芐西林等［9-10］在肉雞體內(nèi)具有相似的藥動(dòng)學(xué)特征，舒巴坦匹酯的藥動(dòng)學(xué)研究，提供其在機(jī)體內(nèi)的吸收、分布、轉(zhuǎn)化和排泄的規(guī)律，這對(duì)臨床藥劑量、給藥方案的擬定和舒巴坦匹酯與β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物阿莫西林、氨芐西林等藥物的聯(lián)合使用具有重要的臨床指導(dǎo)意義。但舒巴坦匹酯與β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物阿莫西林、氨芐西林等聯(lián)合應(yīng)用于肉雞的藥物動(dòng)力學(xué)特征是否相似，有待進(jìn)一步研究。

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