替米考星腸溶微丸的制備及其評價

韓萌萌，李沙沙，孫朋超，梁 倩，李敏營，張娜娜，趙永星

（鄭州大學(xué)藥學(xué)院，鄭州450001）

替米考星是由泰樂菌素的水解產(chǎn)物半合成的一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，對防治畜禽由胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌、支原體等感染引起的肺炎、禽支原體病及泌乳動物的乳腺炎有良好的效果［1］。由于替米考星在酸性環(huán)境中不穩(wěn)定，目前國內(nèi)外上市的替米考星劑型僅有替米考星預(yù)混劑、注射液等［2］，這些劑型不僅成本高，而且給藥不方便。微丸屬于口服多劑量劑型，不僅給藥方便，而且藥物的體內(nèi)吸收速度均勻且個體間生物利用度差異較小［3］。為了解決替米考星在酸性環(huán)境中不穩(wěn)定［4］，口服在胃中易被破壞以及藥物味苦［1］的問題，本實驗將替米考星制備成腸溶微丸制劑，并對其進(jìn)行了表征和初步評價。

1 材料與方法

1.1 材料 替米考星和花生殼粉（河南官渡獸藥制造有限公司）、微晶纖維素（安徽山河藥輔料股份有限公司）、藥用淀粉和藥用糊精（曲阜市藥用輔料有限公司）、十二烷基硫酸鈉（山東聊城安信藥用輔料有限公司）、歐巴代?腸溶薄膜包衣預(yù)混劑（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司）。

1.2 儀器設(shè)備 E-50擠出滾圓設(shè)備（重慶英格造粒包衣技術(shù)有限公司）、Mini DPL 0.2型流化床（重慶精工機(jī)械）、RCZ-8B溶出儀（天大天發(fā)科技有限公司）、Nikon Eclipse 80i型熒光顯微鏡（日本Nikon公司）、UV-2450紫外分光光度計（日本島津）、Nicolet 380-紅外分光光度計（美國賽默飛世爾科技）、DSC-200F3差示掃描量熱儀（德國耐馳科學(xué)儀器貿(mào)易上海有限公司）。

1.3 制備方法

1.3.1 微丸的制備 按處方量稱取藥物與輔料，過100目篩，混合均勻，以1%羥丙基甲基纖維素為粘合劑制軟材，用孔徑1.0 mm的篩網(wǎng)以30 r／min的擠出速度擠出，擠出后在滾圓機(jī)內(nèi)以800 r／min的速度滾轉(zhuǎn)1.5 min，微丸于60℃流化床干燥1 h，篩分后取16～24目的微丸作為合格的微丸。

1.3.2 微丸的包衣 用80%的乙醇配制濃度為10%的腸溶包衣液，磁力攪拌1 h，使其充分溶解，過100目篩備用。將合格的微丸置于流化床中，設(shè)置進(jìn)風(fēng)溫度為70℃，物料溫度為60℃。風(fēng)機(jī)頻率25 Hz，霧化壓力0.06 MPa，蠕動泵流速2 mL／min，包衣結(jié)束后，固化 30 min［5］，得替米考星腸溶微丸。

1.4 替米考星含量測定 紫外分光光度計掃描替米考星溶液，結(jié)果顯示其在292 nm波長處有最大吸收。在此波長下測系列濃度的供試品溶液和各供試品溶液的吸光度［6］。以樣品吸光度（A）對濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得直線方程 A＝0.0559C－0.0045 （R2＝ 0.9999） 。 結(jié)果顯示替米考星濃度在6～45 μg／mL范圍內(nèi)與吸光度有良好的線性關(guān)系，可用于替米考星的含量測定。

取替米考星微丸適量，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于替米考星25 mg），置于100 mL容量瓶中，加水至使其完全溶解，定容至刻度。量取10 mL稀釋至100 mL，作為供試品溶液。同法稱取原料藥適量，制得25 μg／mL的替米考星作為對照品溶液，在292 nm的波長下，分別測定吸光度，計算得到替米考星微丸相對含藥量為103.00%。

1.5 替米考星微丸釋放度的測定 參照2010版《中國藥典》附錄 XD釋放度測定法第二法［7］，以900 mL 0.l mol／L鹽酸溶液作為溶出介質(zhì)，設(shè)置溫度（37士0.5）℃，各取1 g微丸投入溶出杯中，采用槳法，轉(zhuǎn)速 100 r／min，分別于 20、40、60、80、100、120 min取樣，取樣量2 mL，10 mL容量瓶定容。結(jié)束后，棄去酸液，立即加入pH 6.8的磷酸鈉緩沖溶液繼續(xù)運轉(zhuǎn)，分別于 130、140、150、160 min 取樣，取1 mL溶出液至10 mL容量瓶定容，紫外測定吸光度，計算藥物的累積釋放量［8］。

1.6 替米考星微丸的確證 將藥物、藥物與輔料的物理混合物和替米考星腸溶微丸進(jìn)行紅外掃描，比較其紅外光譜圖，可以判斷藥物在微丸中的變化，由替米考星主要官能團(tuán)的特征峰的變化，進(jìn)一步確定藥物在制劑中的存在狀態(tài)。另外，差示掃描量熱儀分別測3組物質(zhì)的熔點，根據(jù)其熔點的變化，可以推斷藥物在制備的過程中藥物存在形式的變化。

2 結(jié)果

根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果和文獻(xiàn)報道［9］，影響微丸成型的因素主要是微晶纖維素的處方量，而包衣增重對微丸釋放度影響較大。因此，本文就這兩個因素進(jìn)行考察，結(jié)果如下。

2.1 不同處方量的微晶纖維素對微丸成型性的影響 保持其他因素不變，通過改變填充劑花生殼粉和微晶纖維素的量來制備微丸。結(jié)果如圖1所示，微晶纖維素的處方量分別是15%、25%、30%時，在電子顯微鏡下觀察，4倍鏡下微丸的形狀分別如圖1中A、B、C所示；40倍鏡下微丸的表面分別如圖1中 D、E、F 所示。

2.2 包衣增重量對微丸釋放度的影響 腸溶微丸的溶出度主要受到腸溶包衣材料性質(zhì)的影響，腸溶包衣材料的厚度在一定程度上決定著微丸的釋放速率［10］。固定處方中原輔料的量，考察不同包衣增重（5%、10%、15%）對藥物釋放的影響。由圖2可知，在酸性介質(zhì)中，包衣增重不同的微丸2 h后釋放度分別達(dá)到67.46%、9.98%、5.97%。在pH 6.8的磷酸緩沖鹽介質(zhì)中，最終累積釋放量分別達(dá)到94.00%、90.78%、69.60%。

圖2 包衣增重量對微丸釋放度的影響

2.3 替米考星微丸的確證

2.3.1 紅外分析 替米考星、替米考星與輔料的物理混合物、替米考星微丸紅外光譜見圖3所示。根據(jù)參考文獻(xiàn)［11］其中在特征區(qū) 3450 cm-1，指紋區(qū)1200 cm-1是叔醇羥基的特征峰，2960 cm-1、2920 cm-1是甲基、亞甲基的伸縮振動峰，1650 cm-1是叔胺中碳氮鍵的伸縮振動峰，1050～1100 cm-1是六元單氧環(huán)中碳氧單鍵伸縮振動峰。

2.3.2 差示掃描量熱分析 替米考星、替米考星與輔料的物理混合物、替米考星微丸DSC圖譜見圖4所示。替米考星為單峰，熔點為101.2℃；替米考星和輔料物理混合物的熔點在105.1℃；替米考星微丸在100℃沒有固定的熔點。

圖4 替米考星（A）、替米考星與輔料的物理混合物（B）和替米考星微丸（C）的DSC圖譜

3 討論

本實驗考察微晶纖維素用量與替米考星微丸成型性的關(guān)系，15%的微晶纖維素成型性最差，滾圓后成不規(guī)則狀，表面粗糙；30%的微晶纖維素成型性相對較好，微丸粒徑也比較均勻，表面光滑。結(jié)果表明微晶纖維素用量越大，微丸越圓整、成型性越好、收率也越高。包衣膜增重對替米考星釋放的影響顯著，且隨著包衣增重的增加，藥物在酸性釋放介質(zhì)中的釋放度逐漸降低，隨著時間的延長，在緩沖鹽釋放介質(zhì)中包衣膜出現(xiàn)不同程度的溶解，導(dǎo)致釋放速率增大。包衣增重5%的處方在酸中釋放較快，2 h內(nèi)藥物釋放量達(dá)到60%以上，140 min后在磷酸鹽中釋放量達(dá)到90%以上；包衣增重15%的處方在酸中釋放緩慢，在磷酸鹽中釋放不足70%；包衣增重10%的處方在酸中2 h內(nèi)釋放不超過10%，在緩沖鹽介質(zhì)釋放實驗中，藥物達(dá)到腸溶的效果，160 min后藥物釋放達(dá)到90%以上。按照腸溶制劑的要求［7］，腸溶制劑在酸中釋放量不超過10%，在磷酸鹽中釋放不低于70%。因此包衣增重10%的微丸在腸道中溶解釋放的效果最好。

擠出滾圓法是制備球形微丸一種比較理想的方法，其設(shè)備操作簡單，生產(chǎn)能力強(qiáng)、成本低，制得的含藥微丸載藥量高［12］。紅外圖譜結(jié)果顯示：A、B在3450 cm-1的位置出現(xiàn)強(qiáng)的-OH伸縮振動峰，但C中此特征峰消失，說明藥物中的-OH被掩蓋起來，同時在1050～1100 cm-1處，A、B中有明顯的藥物中六元單氧環(huán)的特征峰，但在C中此官能團(tuán)的特征峰消失，初步證明了替米考星制成微丸后是以固體分散體的形成存在［13］。結(jié)合差示掃描量熱分析實驗結(jié)果，替米考星微丸圖C與物理混合物圖B相比，峰形發(fā)生比較大的變化，其中100℃左右的峰完全消失，也沒有形成新峰，進(jìn)一步證實替米考星以無定型固體共沉淀物的形式形成固體分散體?？赡苁窃谥苽湮⑼柽^程中，藥物經(jīng)混合、制軟材、擠出滾圓等一系列處方工藝后，藥物高度分散在微丸中，以無定型固體共沉淀物的形式得到穩(wěn)定的固體分散體，有利于藥物的溶出［14］。結(jié)合釋放度實驗，在緩沖鹽中藥物釋放量明顯增大，可以達(dá)到腸溶釋放的效果且有利于增加藥物的吸收，提高藥物的生物利用度。因此，本實驗制備替米考星腸溶微丸的方法具有可行性。

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