DNA倍體分析和癌胚抗原檢測(cè)在胸腔積液診斷中價(jià)值

鄭百波

[摘要] 目的 對(duì)胸腔積液患者的胸水脫落細(xì)胞進(jìn)行DNA倍體分析和癌胚抗原檢測(cè)，將兩種方法進(jìn)行比較，評(píng)估其診斷價(jià)值。方法 選取經(jīng)過臨床確診的56例胸腔積液患者作為觀察組，56例良性胸腔積液患者作為對(duì)照組，對(duì)胸水脫落細(xì)胞進(jìn)行DNA倍體分析和癌胚抗原檢測(cè)。結(jié)果 DNA倍體分析的特異度為80.36%，靈敏度為83.93%，Youden指數(shù)為0.7029；CEA檢測(cè)的特異度為96.43%，靈敏度為60.71%，Youden指數(shù)為0.5714，兩種診斷方法在靈敏度和特異度方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01），而在Youden指數(shù)方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 DNA倍體分析檢測(cè)胸腔積液的靈敏度和特異度更高，如果和CEA聯(lián)用，診斷價(jià)值更高。

[關(guān)鍵詞] DNA倍體分析；癌胚抗原；胸腔積液；診斷價(jià)值

[中圖分類號(hào)] R4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2014）07（b）-0022-02

胸腔積液是一種常見的胸膜病變，其發(fā)生原因有很多，但最主要的是結(jié)核性和惡性腫瘤[1]。對(duì)于胸腔積液的傳統(tǒng)診斷方法主要包括依據(jù)細(xì)胞學(xué)檢查、細(xì)菌學(xué)檢查以及胸膜活檢進(jìn)行確認(rèn)[2]。目前DNA倍體分析和癌胚抗原檢測(cè)被應(yīng)用到臨床，在診斷惡性胸腔積液方面也有較大的臨床價(jià)值[3]。該研究選取該院2011年1月—2013年1月間收治的患者112例，旨在探討采用DNA倍體分析和癌胚抗原檢測(cè)對(duì)胸腔積液患者的胸水脫落細(xì)胞進(jìn)行診斷分析，以評(píng)估這兩種方法的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的患者112例，綜合分析患者的病史、影像學(xué)資料、各項(xiàng)檢查結(jié)果，獲得最終的診斷結(jié)果。將已經(jīng)確診的患者隨機(jī)分成兩組，其中實(shí)驗(yàn)組56例，均為惡性胸腔積液患者，男27例，女29例，年齡34～75歲，平均47歲，對(duì)照組56例，均為良性胸腔積液患者，男24例，女32例，年齡32～77歲，平均50歲，兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 DNA倍體分析 選擇美國(guó)Becton Dick-inson公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，DNA倍體分析試劑盒中的A液為細(xì)胞膜穿透液，B液為RNA消化酶，C液為PI染液，光源為氬離子激光器，輸出功率為15 w，波長(zhǎng)為630 nm，保證峰的變異系數(shù)（CV）<5%，可以采用雞血紅細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行調(diào)節(jié)[4]。主要包括以下幾個(gè)步驟：①對(duì)所有患者均進(jìn)行胸腔穿刺，從得到的胸水中取出50 mL進(jìn)行抗凝處理。②將處理之后的胸水采用1 200轉(zhuǎn)離心5 min，留下沉淀舍棄上清液，采用生理鹽水進(jìn)行洗滌和重復(fù)離心直至沉淀中出現(xiàn)紅細(xì)胞。③將紅細(xì)胞充分溶解，搖勻震蕩，并且避光靜置10 min后，采用1 200轉(zhuǎn)離心5 min，留下沉淀舍棄上清液。④采用PBS液對(duì)沉淀進(jìn)行1～2次洗滌，采用1 200轉(zhuǎn)離心5 min，留下沉淀舍棄上清液，制成單細(xì)胞懸液。⑤從單細(xì)胞懸液中取出1 mL，向其中加入250 μL的A液，然后再加入200 μL的B液，在室溫條件下進(jìn)行10 min的孵育。⑥然后向孵育后的單細(xì)胞懸液中加入200 μL的冷C液，放到冰箱中進(jìn)行10 min的避光孵育，并將冰箱溫度調(diào)至4 ℃。⑦從冰箱中取出細(xì)胞懸液，采用300目篩網(wǎng)進(jìn)行過濾，最后進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。采用健康人外周血淋巴細(xì)胞作為正常二倍體標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，選擇每例患者的10 000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定，將結(jié)果用單參數(shù)組方圖顯示，采用Cell-Quest軟件獲取細(xì)胞信息，采用ModFitLt軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。將被測(cè)標(biāo)本細(xì)胞DNA含量峰均道值與對(duì)照二倍體峰值之比為記作DNA指數(shù)，即DI。若為正常人，其細(xì)胞的二倍體DI范圍是（1±0.1）；若為患者，在DI>1.1或者DI<0.9且組方圖上出現(xiàn)兩個(gè)相分離的峰時(shí)，可以判定其為異倍體，陽性[5]。

1.2.2 癌胚抗原檢測(cè) 選擇德國(guó)拜耳公司生產(chǎn)的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定方法為化學(xué)發(fā)光免疫法，診斷標(biāo)準(zhǔn)為：癌胚抗原>10 μg/L，則為陽性[6]。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，定量資料根據(jù)數(shù)據(jù)的正態(tài)分布與否，對(duì)兩種診斷方法的診斷指數(shù)、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、靈敏度和準(zhǔn)確度等進(jìn)行計(jì)算，并采用U檢驗(yàn)比較診斷指標(biāo)，采用χ2比較組間陽性率。

2 結(jié)果

2.1 胸水DNA倍體分析結(jié)果

在試驗(yàn)組中的56例患者，有47例胸水DNA倍體檢測(cè)為陽性，9例DNA倍體檢測(cè)為陰性，陽性率為83.93%；在對(duì)照組56例中，有11例檢測(cè)為陽性，45例為陰性，陽性率為19.64%。P=0.324，兩組陽性率相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.005，V2=32.16，V=1）。

2.2 胸水CEA檢測(cè)結(jié)果

在試驗(yàn)組中56例患者，有34例為陽性，22例為陰性，陽性率為60.71%；在對(duì)照組56例中，有2例為陽性，54例為陰性，陽性率為3.57%。P=0.187，兩組陽性率相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.005，V2=28.15，V=1）。

2.3 胸水的DNA倍體分析和癌胚抗原檢測(cè)診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)結(jié)果

采用胸水DNA倍體分析，靈敏度=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%=83.93%，特異度=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%=80.36%，Youden 指數(shù)=（靈敏度+特異度）-1=0.7029；采用癌胚抗原檢測(cè)，靈敏度=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%=60.71%，特異度=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%=96.43%，Youden 指數(shù)=（靈敏度+特異度）-1=0.5714。由此可見，兩種診斷方法在靈敏度和特異度方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Youden 指數(shù)P>0.05。endprint

3 討論

呼吸內(nèi)科常見的疾病之一就是胸膜疾病，對(duì)于胸腔積液患者，由于腫瘤細(xì)胞侵犯胸膜時(shí)癌細(xì)胞會(huì)直接在胸腔內(nèi)釋放腫瘤標(biāo)志物，如果發(fā)生異常，腫瘤標(biāo)志物已大量吸收入血，則血清內(nèi)腫瘤標(biāo)志物的水平將會(huì)明顯升高[7]，而且胸腔液含量、形成速度及患者體質(zhì)均影響患者呼吸困難的程度，若積液含量多且形成較快，則患者肺臟功能受到影響，會(huì)出現(xiàn)端坐呼吸、呼吸困難加重甚至發(fā)紺等[8]。由于以往的診斷方法具有很多缺點(diǎn)，所以我們現(xiàn)在多采用DNA倍體分析和癌胚抗原檢測(cè)。DNA倍體分析的主要基于如下原理：正常人體細(xì)胞含23對(duì)染色體，DNA含量穩(wěn)定，為二倍體，只有當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入分裂期時(shí)細(xì)胞DNA含量增加，但是腫瘤細(xì)胞由于異常增殖，往往使染色體發(fā)生突變，染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)目發(fā)生異常，常形成三倍體和亞倍體等，所以可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)的染色體進(jìn)行檢測(cè)，如果為異倍體，則提示可能出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞，但是由于有些腫瘤細(xì)胞可能會(huì)在復(fù)制時(shí)彌補(bǔ)其染色體丟失的部分，造成DNA含量平衡，而且在實(shí)體腫瘤中有很多都為二倍體腫瘤，檢測(cè)過程中若非整倍體峰很小則顯示不出來，由于種種原因也會(huì)造成DNA倍體分析出現(xiàn)假陰性，所以要仔細(xì)分析，采用多種診斷方法進(jìn)行準(zhǔn)確診斷。而癌胚抗原應(yīng)用也比較廣泛，它是一種大分子的糖蛋白，是腫瘤標(biāo)志物之一，在血清中含量較低，但是在癌癥患者的血清中含量則顯著增多，而且該物質(zhì)不容易進(jìn)入血液循環(huán)，也不容易被代謝，特異度極高，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

在該研究中，DNA倍體分析的特異度達(dá)到了80.36%，綜合反應(yīng)靈敏度和特異度的Youden指數(shù)也達(dá)到0.7029，可見DNA倍體分析具有良好的診斷價(jià)值； CEA的靈敏度為60.71%，特異度為96.43%，Youden指數(shù)為0.5714。二者的靈敏度和特異度相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01），但兩者的Youden指數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。由此可見，兩種診斷方法在靈敏度和特異度方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上，采用DNA倍體分析檢測(cè)胸腔積液更加簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，能夠彌補(bǔ)傳統(tǒng)診斷方法的不足。將大大提高診斷率，有效提高患者的生存質(zhì)量，值得臨床推廣應(yīng)用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳紹森.細(xì)胞DNA倍體分析聯(lián)合腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)對(duì)惡性胸腔積液的診斷價(jià)值[J].廣東醫(yī)學(xué)，2013，34（2）：236.

[2] 姜濤.DNA倍體分析在胸腔積液診斷中應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修，2012，36（16）：28.

[3] 張恒.胸腔積液腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷價(jià)值[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2011，7（12）：1362.

[4] 陳連周.血清五種主要腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)在肺癌診斷中的臨床價(jià)值[J].中國(guó)醫(yī)藥，2012，3（10）：617.

[5] 張心中.心鈉素、癌胚抗原及鐵蛋白聯(lián)合測(cè)定對(duì)良、惡性胸腔積液的鑒別價(jià)值[J].山東醫(yī)藥，2012（5）：223.

[6] 楊勝茹.四項(xiàng)生化指標(biāo)的比值在胸腔積液鑒別診斷中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，23（2）：120.

[7] 馮家伍.腺苷脫氨酶測(cè)定在結(jié)核性胸膜炎中的應(yīng)用[J].河北醫(yī)學(xué)，2010，2（13）：148.

[8] 鄢斌.聯(lián)合檢測(cè)血清及胸水LDH、ADA、CEA、CA153對(duì)胸水性質(zhì)的鑒別價(jià)值[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2011，25（10）：1505.

（收稿日期：2014-04-13）endprint