彌羅松酚胃漂浮片的制備

付英杰，王建安，侯 林，田景振*

(1.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東日照 276826;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南 250355)

彌羅松酚 (Ferruginol，化學(xué)名稱 (4bS，8aS)-4b，5，6，7，8，8a，9，10-八氫-4b，8，8-三甲基-2-(1-甲乙基)-3-菲酚，分子式 C20H30O，Mr為286.45)，又被稱為鐵銹醇、鐵銹羅漢柏醇，母核為三環(huán)二萜松香烷。其提取或合成方法較多，如從松柏綱 (如羅漢松、側(cè)柏葉、日本雪松、美國紅杉、香榧)或唇形科 (如丹參、輪葉婆婆納、三葉鼠尾草)的新鮮植株或粗提物中進(jìn)行分餾提?。?］，利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行提?。?-3］，以脫氫松香胺為起始原料進(jìn)行合成［4］等。彌羅松酚已被發(fā)現(xiàn)具有多種活性，如抗菌、保護(hù)心臟、抗氧化、抗瘧原蟲［5-6］、抗?jié)儭⒈Ｗo(hù)由乙醇誘導(dǎo)的胃損害、改善胃黏膜抗氧化特性［7］、抗腫瘤［8］等，但在醫(yī)藥上的應(yīng)用較少，目前僅在工業(yè)上被用作增香劑。

國內(nèi)因酒精所致胃損傷的病例甚多，臨床常用組胺受體拮抗劑、質(zhì)子泵抑制劑或抗幽門螺旋桿菌藥物。如替丁類藥物往往具有苦味或不愉快的硫磺氣味，且具有較大的副作用及不良反應(yīng)。Areche［7］等研究了彌羅松酚的作用機(jī)制及毒性，其作用機(jī)制為:刺激前列腺素2(PGE2)的合成而加強(qiáng)胃壁的抗炎作用和維持還原型谷胱甘肽 (GSH)的水平而改善胃黏膜的抗氧化能力，此外還可促進(jìn)胃液的分泌而升高胃液pH值及降低可滴定酸度，但對胃黏液分泌無影響。彌羅松酚安全性高 (口服急性毒性實驗LD50＞3 g/kg)，來源廣泛，氣味患者易接受。但由于在胃內(nèi)持續(xù)時間較短，且用量較小 (小鼠25 mg/kg)，因此制成能夠持續(xù)在胃內(nèi)釋藥的制劑較為合適，本實驗擬將其制備成胃內(nèi)漂浮片。

1 實驗材料

1.1 儀器 電子天平 (北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);天平 (上海精科天平廠)，單沖壓片機(jī)(上海遠(yuǎn)東制藥機(jī)械總廠);標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩 (浙江省上虞市滬江儀器沙篩廠);UV-754紫外分光光度計(上海精密科技儀器有限公司);FW100型高速萬能粉碎機(jī) (天津市泰斯特儀器有限公司);YD-1片劑硬度測試儀 (天津創(chuàng)興電子設(shè)備制造有限公司);電熱溫度控制干燥箱 (上海申光儀器儀表有限公司)。

1.2 試劑 彌羅松酚 (純度95.7%，實驗室自制)。II號丙烯酸樹脂 (Eudragit II，連云港萬泰醫(yī)藥材料有限公司，20110108);微晶纖維素(MCC，浙江中維藥業(yè)有限公司，20071124);十八醇 (廣州越迪化工有限公司，20110415);硬脂酸 (SA，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，20101008);羥丙甲纖維素 (HPMCK4M，山東陽谷江北化工有限公司，20100826);硬脂酸鎂(MS，諸暨市三合化工工貿(mào)有限公司，20090321);其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 彌羅松酚測定方法

2.1.1 對照品溶液的配制 精密量取槲皮素對照品溶液 (154.6 μg/mL)1 mL于25 mL量瓶中，加80%乙醇定容。制成每1 mL含槲皮素6.184 μg的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的配制 取彌羅松酚 (自制)20 mg，精密稱定，置1000 mL量瓶中，加80%乙醇適量溶解并稀釋至刻度。

2.1.3 顯色劑的配制 為0.1 mol/LFeCl3-0.008 mol/L K3［Fe(CN)6］(1∶1)的混合溶液，臨用前現(xiàn)配。

2.1.4 測定波長的確定 精密量取對照品溶液和供試品溶液各1.0 mL，置10 mL量瓶中，加入顯色劑0.8 mL，暗處放置5 min，加0.1 mol/L的HCl至刻度，暗處放置30 min。以蒸餾水為空白，于200～800 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果樣品和對照品在相同波長處有最大吸收，最大吸收波長為755 nm。

2.1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置于10 mL量瓶中，加入顯色劑0.8 mL，暗處放置5 min，加0.1 mol/L的HCl至刻度，暗處放置30 min。以蒸餾水為空白，在755 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度 (μg/mL)為橫坐標(biāo)，繪得標(biāo)準(zhǔn)曲線為 A=0.0334C+1.0413，r=0.9992。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.618μg/mL～3.710 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.6 含量測定方法學(xué)考察

2.1.6.1 精密度實驗 精密量取供試品溶液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加入顯色劑0.8 mL，暗處放置5 min，加0.1 mol/L的HCl至刻度，暗處放置30 min。以蒸餾水為空白，在755 nm波長處測定吸光度。連續(xù)5次測定同一供試品，結(jié)果RSD為1.53%，表明方法精密度良好。

2.1.6.2 穩(wěn)定性實驗 精密量取供試品溶液1.0 mL，按“2.1.6.1”項下操作，分別于顯色后15、30、45、60、90、120、150、180 min 測定，結(jié)果在120 min內(nèi)RSD為2.58%。120 min后吸光度不穩(wěn)定，表明在2 h內(nèi)方法穩(wěn)定性良好。

2.1.6.3 重復(fù)性實驗 精密量取5份供試品溶液各1.0 mL，分別按“2.1.6.1”項下操作，測定吸光度。結(jié)果RSD為2.86%，表明方法重復(fù)性良好。

2.1.6.4 加樣回收率實驗 精密量取9份供試品溶液 (總酚含量19.14 μg/mL)各1.0 mL，分為3組，每組分別加入槲皮素對照品溶液 (6.182 μg/mL)1.6、2.0、2.4 mL，按 “2.1.6.1”項下操作，測定吸光度，計算回收率。結(jié)果回收率為98.57%，RSD為3.04%。

2.2 休止角的測定 制備胃漂浮制劑時常用到的輔料有 HPMC、Eudragit、SA、十八醇、MCC等，設(shè)計表1中8個處方進(jìn)行輔料篩選。首先將原輔料過80目篩混勻，加入硬脂酸鎂，充分混勻，測定休止角，結(jié)果見表1。8個處方的粉末流動性均較好，可采用直接粉末壓片的制備工藝。

2.3 片劑的制備方法 按處方量稱取各組分，分別粉碎，過80目篩，充分混合后加入硬脂酸鎂，混勻。使用單沖壓片機(jī)淺凹沖模干法直接壓片，控制片重1 g，壓力4 kg/cm2，得外觀白色片劑。

2.4 片劑漂浮性能測定 以體外釋放度和體外漂浮性為指標(biāo)，進(jìn)一步進(jìn)行處方篩選。將8個處方片劑各取50片，分別放入900 mL的0.1 mol/LHCl中，觀察起漂情況、8 h后漂浮片數(shù)及最大持漂時間，結(jié)果見表1。

2.5 片劑釋放性能測定 采用《中國藥典》2010年版二部附錄X D釋放度測定法第一法［10］，用轉(zhuǎn)籃法測定8組處方所制備片劑 (每組6片)的體外釋放度。方法:釋放介質(zhì)為0.1 mol/L HCl 900 mL，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為37℃，每隔0.5 h取樣1次，每次1 mL，所取樣品經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，并及時在操作容器中補(bǔ)充相同介質(zhì)1 mL，自取樣至濾過在30 s內(nèi)完成。濾液置10 mL量瓶中，加入顯色劑0.8 mL，暗處放置5 min，加0.1 mol/L的 HCl至刻度，暗處放置30 min，于755 nm波長下測定吸光度。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算不同時間的藥物濃度和累積釋放度，并換算為累計釋放率。結(jié)果見表2。

2.6 實驗結(jié)果

表1 片劑處方及漂浮性能考察Tab.1 Prescription of tablet and investigation of tablet floating performance

表2 片劑累計釋放率考察 (%)Tab.2 Investigation of tablet cumulative release rate(%)

2.7 結(jié)果分析

2.7.1 處方1和2采用HPMC為胃漂浮材料，HPMC量越高，起漂時間顯著延長。在考察中初期緩釋性能較好，但多數(shù)片劑在1.5 h后出現(xiàn)裂口現(xiàn)象，片型逐漸破碎，藥物迅速釋放，漂浮時間較短。

2.7.2 處方3和4采用EudragitⅡ為胃漂浮材料，結(jié)果由EudragitⅡ制得漂浮片的起漂時間極短，但由于不使用HPMC，凝膠骨架不能形成，其緩釋性能差，溶蝕速度快，2 h內(nèi)藥物基本全部釋放，且多數(shù)片劑發(fā)生變形，因而漂浮片數(shù)少，但發(fā)現(xiàn)最大漂浮時間較長;同時含有硬脂酸處方 (9 h)的漂浮時間較十八醇 (7.5 h)長，且十八醇在壓片過程中容易出現(xiàn)粘沖，因而不宜選用十八醇作為助漂劑。

2.7.3 綜合上述因素考慮，在處方5、6、7、8中同時加入HPMC和EudragitⅡ，并相應(yīng)調(diào)整了其他輔料的比例。結(jié)果起漂時間均在60 s以下，其中處方5加入HPMC量為20%，凝膠骨架形成時間較慢，漂浮及緩釋性能有一定改善，但片劑5 h后開始破碎，藥物迅速釋放;處方6、7漂浮性能和緩釋性能均較好，其中7為優(yōu)選處方。處方8加入HPMC量為50%，釋放性能較好，但6 h后多數(shù)片劑開始沉沒，漂浮性能較差。

2.7.4 處方7漂浮片2 h平均累積釋放度為19%，藥物沒有出現(xiàn)有突釋現(xiàn)象;6 h累積釋放度為64.19%，且釋藥速率出現(xiàn)減慢趨勢。10 h累積釋放度大于90%，符合2010版中國藥典二部附錄XIX D緩釋制劑指導(dǎo)原則［11］。

2.7.5 按照《中國藥典》2010年版二部附錄XIX D的要求對處方7漂浮片釋放數(shù)據(jù)用以下方程進(jìn)行擬合:Higuchi方程:Q=kt1/2，一級方程:ln(1-Q)=-kt，零級方程:Q=kt，Ritger-peppas方程:Q=ktn(Q為t時間的累計釋放率)。結(jié)果顯示，采用Ritger-peppas方程擬合相關(guān)系數(shù)最高，方程為:lnQ=1.0617lnt+2.2085，R=0.9980，線性相關(guān)顯著。釋放參數(shù)n＞0.89，表明片劑主要以骨架溶蝕機(jī)制進(jìn)行釋放。

2.8 制劑工藝 本實驗以HPMC和EudragitⅡ作為骨架，以MCC作為賦形劑，以SA作為助漂劑，制備胃內(nèi)漂浮片，通過體外釋放度和體外漂浮性考察，最終確定最佳處方為:彌羅松酚20 g，羥丙甲纖維素400 g，丙烯酸樹脂Ⅱ號200 g，微晶纖維素126 g，硬脂酸250 g，硬脂酸鎂4 g，共計1000 g，制成片劑1000片。

制備工藝 稱取原料與輔料，過80目篩混勻，再加入硬脂酸鎂，充分混勻后，直接粉末壓片，片重1 g，壓力4 kg/cm2。每片含藥量為20 mg。按照文獻(xiàn)［7］對小鼠的有效劑量換算，成人用量為每日125 mg，即每次2片，一日3次。

2.9 工藝驗證實驗 按“2.8”項下工藝制備3批片劑，并考察其釋放度及漂浮性，結(jié)果見表3。

表3 3批片劑驗證性考察Tab.3 Confirmatory research on 3 batches of tablets

結(jié)果表明，3批漂浮片的漂浮性能和釋放性能較為穩(wěn)定:無突釋現(xiàn)象，持漂時間均在9 h以上，10 h累積釋放度大于95%。符合《中國藥典》2010版二部附錄XIX D緩釋制劑指導(dǎo)原則所規(guī)定“釋藥全過程時間不應(yīng)低于給藥間隔時間 (該片劑每日給藥3次，即不低于8 h)、累計釋放百分率要求達(dá)到90%以上”的要求。

3 小結(jié)與討論

3.1 彌羅松酚 (Ferruginol)與目前上市的多數(shù)胃保護(hù)劑作用機(jī)理不同，它可增加PGE2的分泌，維持GSH的水平，具有一定的制酸效果，特別是對乙醇誘導(dǎo)的胃損害顯示強(qiáng)保護(hù)活性。另外，由于其安全性高，使用范圍廣，因此具有一定的開發(fā)價值。Ferruginol直接灌胃胃潰瘍小鼠有效，但由于在胃內(nèi)保持時間較短，且用量較輕 (對于小鼠為25 mg/kg，折合成人用量為125 mg/d)，因此制成能夠持續(xù)在胃內(nèi)釋藥的制劑較為合適。

3.2 本實驗以HPMC作為親水凝膠骨架材料，EudragitⅡ作為不溶性骨架材料，以MCC作為填充劑，以SA作為助漂劑，可延長彌羅松酚在胃內(nèi)漂浮時間，使其緩慢釋放。彌羅松酚的水溶性較低，結(jié)合釋藥方程分析，其緩釋機(jī)制為藥物通過HPMC凝膠層的逐步溶蝕，加之EudragitⅡ的不溶性骨架，使藥物擴(kuò)散速度進(jìn)一步減緩，且能在胃中長時間保持完整形狀。SA為助漂劑，比重小且具有較大的疏水性，可降低骨架的水化速度。HPMC和EudragitⅡ聯(lián)合使用制備得到的胃漂浮片，漂浮片數(shù)同比明顯增多，漂浮時間得到延長。根據(jù)體外釋放度和體外漂浮性實驗確定最終處方為:Ferruginol∶HPMC ∶EudragitⅡ∶SA ∶MCC ∶MS(2 ∶40∶20∶25∶12.6∶0.4)。

3.3 除處方因素外，制片時的壓力是影響體外漂浮性能的重要因素，為獲得性質(zhì)均一，穩(wěn)定的制劑必須注意壓片時的壓力。經(jīng)過實驗，當(dāng)壓力控制在1～3 kg/cm2時所得片劑易碎。當(dāng)壓力控制在5～6 kg/cm2時，片劑漂浮性不好。最終壓片壓力控制在4 kg/cm2。

3.4 彌羅松酚的含量測定可選用氣相色譜法。由于在此片劑中主藥的純度高，且實驗?zāi)康臑楣に噧?yōu)選，因此本實驗采用更為簡單的總酚含量測定法。

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