IL－27在非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的表達(dá)

鄢 文 靳 文 王 昂 宋維舒

肺癌是我國乃至世界范圍內(nèi)上首要癌癥死亡原因，其中80%～85%為非小細(xì)胞肺癌(Non-small-cell lung cancer，NSCLC)。盡管早期診斷和治療能夠有效改善肺癌患者預(yù)后，但總體上來看肺癌預(yù)后未獲得明顯改善，其5年生存率也僅為15%左右，原因在于多數(shù)肺癌獲得有效診治已處于晚期［1－2］。近來研究發(fā)現(xiàn) IL-27具有抗血管生成和抗腫瘤作用［3］。本研究通過檢測非小細(xì)胞肺癌患者外周血IL-27水平，探討IL-27與非小細(xì)胞肺癌的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2012年12月～2014年3月在我院就診的非小細(xì)胞肺癌患者50例，入選患者需滿足以下條件:首次在我院確診，未行放療、化療等治療，排除自身免疫性疾病、冠心病、心肌病以及血液系統(tǒng)疾病。另選取8名健康志愿者作為對照組。

1.2 研究內(nèi)容

1.2.1 入選研究對象一般情況和分組 詳細(xì)記錄入選研究對象臨床資料，利用PET-CT或CT檢查明確腫瘤大小和轉(zhuǎn)移情況明確患者分期，并以此為依據(jù)分為非小細(xì)胞肺癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期以及對照組。

1.2.2 IL-27等炎癥因子檢測 所有入選患者采集空腹靜脈血6 ml，以3000轉(zhuǎn)/min離心10 min取上清貯存于－80℃冰箱備存待檢，采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測非小細(xì)胞肺癌患者外周血細(xì)胞因子IL-27、IL-12、IL-10的表達(dá)水平(具體操作程序參考試劑盒說明書)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用單因素方差分析(One-way ANOVA)分析各組間外周血細(xì)胞因子IL-27、IL-12、IL-10的表達(dá)差異;組間的多重比較采用LSD檢驗(yàn);若方差不齊則采用Welch法，組間多重比較則采用Dunnett's T3。對外周血細(xì)胞因子IL-27、IL-12、IL-10表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌分級采用Spearman相關(guān)分析。p＜0.05時為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

在所入選的50例非小細(xì)胞肺癌患者中，鱗癌16例，腺癌34例;根據(jù)TNM分期，非小細(xì)胞肺癌Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期15，Ⅳ期18例。對照組為8名健康志愿者。

2.2 IL-27等炎癥因子在非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的表達(dá)

NSCLC各期患者以及對照組外周血IL-27、IL-12、IL-10等炎癥因子濃度進(jìn)行比較，均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05);其中NSCLCⅢ期和NSCLCⅣ期的IL-27和IL-12濃度分別較其他3組明顯降低(p＜0.05)，NSCLCⅢ期和NSCLCⅣ期的IL-10濃度分別較其他3組明顯升高(p＜0.05)。見表1。

表1 IL-27、IL-12和IL-10在非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的表達(dá) (pg/ml)

2.3 IL-27等炎癥因子與NSCLC分期的相關(guān)性分析

對各組研究對象外周血IL-27、IL-12以及IL-10濃度與NSCLC分期進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析顯示:外周血IL-27濃度與NSCLC分期呈負(fù)相關(guān)(r=－0.638，p＜0.001)，外周血IL-12濃度與NSCLC分期呈負(fù)相關(guān)(r=－0.681，p＜0.001)，外周血IL-10濃度與NSCLC分期呈正相關(guān)(r=0.685，p＜0.001)。

3 討論

免疫炎癥反應(yīng)在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，被認(rèn)為是腫瘤治療的新靶點(diǎn)［4－5］。越來越多證據(jù)表明免疫炎癥與肺癌發(fā)病密切相關(guān)，主要表現(xiàn)在:長期吸煙發(fā)生肺癌的患者常合并存在以肺部慢性炎癥為特征的慢性阻塞性肺疾?。?］;肺癌組織中多種免疫炎癥細(xì)胞浸潤［7－8］;炎癥通路NF-kB信號在肺腺癌中發(fā)揮重要作用等［9］。干預(yù)炎癥可能是肺癌治療的新方向。但是目前存在的主要問題是如何識別介導(dǎo)肺癌發(fā)生發(fā)展的炎癥介質(zhì)以及其潛在作用機(jī)制。

炎癥因子在肺癌炎癥網(wǎng)絡(luò)中扮演重要作用。已有研究認(rèn)為IL-6、IL-10、IL-13等細(xì)胞因子可能具有促進(jìn)肺癌進(jìn)展作用［10］。本研究證實(shí)晚期NSCLC患者外周血 IL-27、IL-12表達(dá)降低，IL-10表達(dá)升高，提示IL-27降低與NSCLC進(jìn)展相關(guān)。IL-27是IL-6/IL-12家族重要成員，主要由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞分泌。IL-27主要通過與靶細(xì)胞表面(IL-27R)(由WSX-1和gp130組成)特異性結(jié)合來實(shí)現(xiàn)對靶細(xì)胞的調(diào)控作用。IL-27與IL-27受體(IL-27R)特異性結(jié)合后激活JAK1/2介導(dǎo)的STAT1/3通路對靶細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控［11］，發(fā)揮促炎或抑炎等雙向調(diào)控作用，表現(xiàn)為通過①促進(jìn)抗腫瘤作用炎癥因子干擾素γ(interferon γ，INF-γ)、TNF-α、IL-12表達(dá);②抑制促腫瘤炎癥因子IL-10和IL-17的分泌［12］。這些研究結(jié)果提示IL-27可能是炎癥反應(yīng)的核心因子，在不同條件下對炎癥調(diào)控作用不同。

IL-27與多種腫瘤關(guān)系密切。在黑色素瘤研究方面，早期研究認(rèn)為IL-27通過上調(diào)IFN-γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10)和IFN-γ誘導(dǎo)的單核因子(monokine induced by gamma-interferon，CXCL9/Mig)的表達(dá)而產(chǎn)生了抗腫瘤和抗血管生成作用［3］;進(jìn)一步研究認(rèn)為IL-27一方面通過WSX-1/STAT1信號通路直接抑制黑色素瘤增殖［13］，另一方面呈劑量依賴方式促進(jìn)腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis inducing ligand，TRAIL)的表達(dá)抑制人黑色素瘤增殖［14］。在肺癌方面，轉(zhuǎn)染IL-27的小鼠肺腺癌細(xì)胞株LLC-1后可減少環(huán)氧酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)和PGE(2)的表達(dá)，抑制 PGE(2)誘導(dǎo)的LLC-1 vimentin表達(dá)、遷移和侵襲能力;小鼠體內(nèi)移植轉(zhuǎn)染IL-27的小鼠肺腺癌細(xì)胞株LLC-1后小鼠體內(nèi)IL-12、INF-γ以及細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性增加，移植瘤生長遲緩［15］;進(jìn)一步有研究認(rèn)為IL-27通過直接抑制NSCLC細(xì)胞發(fā)生內(nèi)皮間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，抑制NSCLC轉(zhuǎn)移［16］。此外，IL-27與前列腺癌及其骨轉(zhuǎn)移、食管癌淋巴轉(zhuǎn)移等腫瘤密切相關(guān)［17－18］?；诋?dāng)前已有的研究結(jié)果，我們認(rèn)為IL-27不僅能夠直接抑制腫瘤增殖遷移，還可能通過調(diào)控機(jī)體免疫應(yīng)答抑制腫瘤生長。本研究中，晚期NSCLC患者外周血IL-27表達(dá)減少，TH1細(xì)胞因子IL-12表達(dá)降低，TH2細(xì)胞因子IL-10表達(dá)增加，提示晚期NSCLC患者外周IL-27減少導(dǎo)致IL-27的促進(jìn)TH1細(xì)胞因子抗腫瘤作用和抑制TH2細(xì)胞因子誘導(dǎo)腫瘤免疫耐受作用降低。

綜上，本研究提示IL-27不僅具有直接抗NSCLC作用，還可能通過誘導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)發(fā)揮抗NSCLC作用。IL-27具有成為NSCLC治療藥物的潛在可能。

［1］Auperin A，Le Pechoux C，Rolland E，et al.Meta-analysis of concomitant versus sequential radiochemotherapy in locally advanced non-small-cell lung cancer［J］.J Clin Oncol，2010，28:2181－2190.

［2］Crinò L，Weder W，van Meerbeeck J，F(xiàn)elip E.Early stage and locally advanced(non-metastatic)non-small-cell lung cancer:ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis，treatment and follow-up［J］.Ann Oncol，2010，21(suppl 5):v103 －115.

［3］Shimizu M，Shimamura M，Owaki T，et al.Antiangiogenic and antitumor activities of IL-27［J］.J Immunol，2006，176(12):7317－7324.

［4］Elinav E，Nowarski R，Thaiss CA，et al.Inflammation-induced cancer:crosstalk between tumours，immune cells and microorganisms［J］.Nat Rev Cancer，2013，13(11):759 － 771.

［5］Grivennikov SI，Greten FR，Karin M.Immunity，inflammation，and cancer［J］.Cell，2010，140(6):883 －899.

［6］Celli BR.Chronic obstructive pulmonary disease and lung cancer:common pathogenesis，shared clinical challenges［J］.Proc Am Thorac Soc，2012，9(2):74－79.

［7］Gabrilovich DI，Ostrand-Rosenberg S，Bronte V.Coordinated regulation of myeloid cells by tumours［J］.Nat Rev Immunol，2012，12(4):253－268.

［8］Fridman WH，Pagès F，Sautès-Fridman C，Galon J.The immune contexture in human tumours:impact on clinical outcome［J］.Nat Rev Cancer，2012，12(4):298 －306.

［9］Meylan E，Dooley AL，F(xiàn)eldser DM，et al.Requirement for NF-kappaB signalling in a mouse model of lung adenocarcinoma［J］.Nature，2009，462(7269):104－107.

［10］沈 誠，車國衛(wèi).炎癥因子與肺癌研究進(jìn)展［J］.中華腫瘤防治雜志，2014，21(2):157－160.

［11］Murugaiyan G，Mittal A，Lopez-Diego R，et al.IL-27 is a key regulator of IL-10 and IL-17 production by humen CD4+T cells［J］.J Immunol，2009，183(4):2435 －2443.

［12］Guzzo C，Che Mat NF，Gee K.Interleukin-27 induces a STAT1/3－and NF-kappa B-dependent proinflammation cytokine profile in human monocytes［J］.J Biol Chem，2010，285(32):24404 －24411.

［13］Yoshimoto T，Morishima N，Mizoguchi I，et al.Antiproliferative activity of IL-27 on melanoma［J］.J Immunol，2008，180:6527－6535.

［14］Chiba Y，Mizoguchi I，Mitobe K，et al.IL-27 enhances the expression of TRAIL and TLR3 in human melanomas and inhibits their tumor growth in cooperation with a TLR3 agonist poly(I:C)partly in a TRAIL-dependent manner［J］.PLoS One，2013，8(10):e76159.

［15］Ho MY，Leu SJ，Sun GH，et al.IL-27 directly restrains lung tumorigenicity by suppressing cyclooxygenase-2-mediated activities［J］.J Immunol，2009，183(10):6217 －6226.

［16］Kachroo P，Lee MH，Zhang L，et al.IL-27 inhibits epithelialmesenchymal transition and angiogenic factor production in a STAT1-dominant pathway in human non-small cell lung cancer［J］.J Exp Clin Cancer Res，2013，32(1):97.

［17］Zolochevska O，Diaz-Qui?ones AO，Ellis J，et al.Interleukin－27 expression modifies prostate cancer cell crosstalk with bone and immune cells in vitro［J］.J Cell Physiol，2013，228(5):1127 －1136.

［18］Diakowska D，Lewandowski A，Markocka－M?czka K，et al.Concentration of serum interleukin－27 increase in patients with lymph node metastatic gastroesophageal cancer［J］.Adv Clin Exp Med，2013，22(5):683－691.