腎葉打碗花總黃酮含量的分析

尚金燕，歷 娜，楊 雪

(山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東威海264210)

腎葉打碗花 Calystegia soldanella(Linn.)R.Br.，別名:濱旋花、孝扇草、扶子苗、腎葉天劍等。是一種多年生匍匐性草本，生長于海灘沙地、海岸巖石縫中。廣泛分布于山東、江蘇、遼寧、河北、浙江、臺灣等沿海各地。該植物的藥用已有悠久的歷史，《全國中草藥匯編》記載該藥材具有祛風(fēng)利濕，化痰止咳的功效［1］?！吨袊幱弥参飯D鑒》記載其:治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)疼痛［2］?！吨腥A本草》記載該植物具有清熱解毒，主治丹毒的功效［3］。有關(guān)打碗花化學(xué)成分的研究很少，《中藥辭?！酚涊d其化學(xué)成分為合紅古豆堿［4］，Tori M 等［5］研究發(fā)現(xiàn)該植物的莖中含有一種反式－4－羥基桂皮酸酯。我們初步研究了腎葉打碗花的化學(xué)成分，發(fā)現(xiàn)該藥材含有較高黃酮類物質(zhì)，為進(jìn)一步開發(fā)利用腎葉打碗花資源，本研究利用紫外－分光光度法測定了該藥材全草的總黃酮含量，為腎葉打碗花資源的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 電子天平(梅特勒ME204E);搖擺式粉碎機(jī)(LK－1000A);紫外－分光光度計(TU－1810);循環(huán)水多用真空泵(SHB－Ⅲ);電熱鼓風(fēng)干燥箱(FG－10)。

1.2 藥物和試劑 腎葉打碗花藥材采自山東省威海市前雙島海濱(采集時間為2013年8月份)，經(jīng)山東藥品食品職業(yè)學(xué)院中藥教研室曲暢游教授鑒定為腎葉打碗花的全草。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100080－200306);所用試劑亞硝酸鈉、氫氧化鈉、無水乙醇，硝酸鋁均為分析純，實驗用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 用電子天平準(zhǔn)確稱取25.00 mg蘆丁對照品，加乙醇定容至50 mL，搖勻，配制成0.5 mg·mL－1的溶液。

2.2 樣品溶液的制備 打碗花全草室溫下風(fēng)干，用搖擺式粉碎機(jī)粉碎，過60目篩后備用。精密稱取2 g樣品粉末，置于100 mL圓底燒瓶內(nèi)，加入70%的乙醇60 mL，放置在水浴中，70℃左右回流提取60 min，過濾、定容至100 mL，備用。

2.3 檢測波長的選擇［6～8］精密量取樣品溶液和蘆丁對照品溶液各2 mL，分別置于25 mL量瓶中，各加入60%的乙醇10 mL，加入1.00 mL 5%的亞硝酸鈉溶液，混合均勻，室溫下放置6 min;加入1.00 mL 10%硝酸鋁溶液，搖勻，室溫下放置6 min;加入10.00 mL 4%的氫氧化鈉溶液，然后用純化水，定容至刻度，搖勻，室溫放置15 min。以60%的乙醇溶液作為空白溶液，分別在300～600 nm范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描，結(jié)果顯示，制備的腎葉打碗花樣品溶液和蘆丁對照品溶液在510 nm處均有較平緩的吸收峰，確定檢測波長為510 nm。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確量取蘆丁對照品溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL，按照上述“2.3”項下的測量方法，空白為不加蘆丁對照品的溶液，分別在510 nm波長處測定吸光度，然后選取對照品的質(zhì)量濃度C(mg·mL－1)為橫坐標(biāo)，吸光值(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示蘆丁質(zhì)量濃度在0.020～0.12 mg·mL－1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系?；貧w方程為A=9.897C+0.003 4，R2=0.999 5。

2.5 樣品含量測定 精確量取樣品溶液5份，每份1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的方法測定腎葉打碗花樣品的吸光度，利用回歸方程計算總黃酮含量，測定結(jié)果表明，腎葉打碗花全草總黃酮的平均含量為5.73%，結(jié)果見表1。

表1 腎葉打碗花全草總黃酮含量測定結(jié)果

2.6 精密度試驗 精確量取5份1 mL的蘆丁對照品溶液，在510 nm處測定各吸光度，計算總黃酮含量，RSD=1.15%(n=5)，結(jié)果表明該測量方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精確量取“2.2”項下所制備的1 mL 的樣品溶液，按“2.3”項下方法分別在 0、15、30、45、60 min，于510 nm處測定各吸光度，計算后得到RSD=1.05%(n=5)，表明在1 h內(nèi)樣品穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗 精確稱取腎葉打碗花樣品粉末2 g，按照“2.2”項下的方法制備5份樣品溶液，按“2.3”項下的方法分別測定5份樣品的吸光度，代入回歸方程，計算得到總黃酮含量為5.74%，RSD=0.89%(n=5)，重現(xiàn)性良好。

2.9 加標(biāo)回收率試驗 精確稱取5份腎葉打碗花細(xì)粉，每份2 g，按“2.2”項下的方法處理得到樣品溶液，再向每份樣品液中精密加入蘆丁對照品溶液1 mL(0.5 mg·mL－1)，按照“2.5”項下的方法分別測定5份溶液的吸光度，計算回收率。結(jié)果顯示，平均回收率為99.6%，RSD值為0.33%(n=5)，說明該方法具有較好的回收率，結(jié)果見表2。

表2 加標(biāo)回收率試驗結(jié)果

3 結(jié)論

腎葉打碗花是分布在沿海沙灘常見的植物，分布廣，數(shù)量大，易采集;已有研究證明該植物的水提物和醇提物具有抗炎鎮(zhèn)痛作用［9］，但目前該植物藥用價值和物質(zhì)基礎(chǔ)研究較少，基本上作為雜草，影響了該藥材的開發(fā)利用。本研究采用乙醇提取法，提取了腎葉打碗花的黃酮成分，并采用紫外－可見分光光度法初步測定了腎葉打碗花中總黃酮的含量，測定結(jié)果顯示腎葉打碗花黃酮含量較高，為該植物的進(jìn)一步開發(fā)研究提供了一定理論基礎(chǔ)。

［1］謝宗萬.全國中草藥匯編［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:630.

［2］第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系生藥學(xué)教研室.中國藥用植物圖鑒［M］.上海:上海教育出版社出版，1960:923.

［3］國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草(第18卷)［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:497－498.

［4］嚴(yán)永清，余傳隆.中藥辭海(第二卷)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，1996:51－52.

［5］Tori M，Ohara Y，Nakashima K，et al.Caffeic and coumaric acid esters from Calystegia soldanella［J］.Fitoterapia，2000，71(4):353 －359.

［6］何可群，盧文蕓，李相興，等.貴州鼠尾草的總黃酮含量測定［J］.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41(1):77 －79.

［7］胡海清，韓賀東，王曉玲.雙花千里光中總黃酮含量測定［J］.西南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2013，39(4):505－507.

［8］牛明娟，惠秋沙.澤漆總黃酮的提取與含量測定［J］.藥學(xué)研究，2013，32(3):131 －133.

［9］譚麗，沈清，黃真.孝扇草抗炎鎮(zhèn)痛有效部位的篩選［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(1):155 －157.