紫外分光光度法測(cè)定半枝蓮黃芩苷的含量

戴平 廖迎 黃鳳香 韋漢燕

【摘 要】目的：建立紫外分光光度法測(cè)定半枝蓮黃芩苷的含量的方法。方法：采用50%乙醇回流提取工藝和紫外分光光度法測(cè)定半枝蓮中黃芩苷的含量，以黃芩苷為對(duì)照品，在278nm 波長(zhǎng)處測(cè)量。結(jié)果：得黃芩苷回歸方程y=56.985x+0.0083（r2=0.9996），表明黃芩苷在0.00272～ 0.0136mg/mL濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，平均加樣回收率（n=6）以黃芩苷計(jì)為99.8%，RSD 為0.58%。結(jié)論：此方法操作簡(jiǎn)單，精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，可以用于半枝蓮中黃芩苷的含量測(cè)定方法之一。

【關(guān)鍵詞】半枝蓮;黃芩苷;含量測(cè)定;紫外分光光度法

【Abstract】Objective： Establish UV spectrophotometry banzhilian baicalin content method. Methods： With 50% ethanol extraction process and ultraviolet spectrophotometry banzhilian content baicalin， baicalin as standard， measured at 278nm wavelength. Results： Baicalin regression equation was y=56.985x +0.083 （r2=0.9996）， indicates that baicalin in the concentration range of 0.00272～0.0136mg/mL good linear relationship， the average recovery （n=6） to 99.8 meter baicalin ， RSD was 0.58%. Conclusion： This method is simple， precision， stability and good reproducibility can be used banzhilian baicalin one method for the determination of the content.

【Key words】Barbata;Baicalin;Determination;UV spectrophotometry

黃芩苷異名貝加靈，黃芩素[1]，淡黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)223℃～225℃?？扇苡谔妓釟溻c、碳酸鈉、氫氧化鈉等堿性溶液，但在堿性溶液中不穩(wěn)定，漸變成暗棕色，幾乎不溶于水[2-3]。黃芩苷來(lái)源于唇形科植物黃芩根，并頭草葉和根，紫葳科植物木蝴蝶葉和莖皮，車(chē)前科植物大車(chē)前葉[4-5]。黃芩苷具有多種生理活性，如對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用，可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化;對(duì)腦缺血、腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用;對(duì)腦損傷的保護(hù)作用，黃芩苷能夠抑制蛋白激酶，減少錐體細(xì)胞延遲性死亡;抗炎作用，黃芩苷對(duì)肺炎衣原體引起的炎癥有明顯的抑制作用;抗心律失常，黃芩苷對(duì)腎上腺素β1和β2受體均有阻斷作用，能競(jìng)爭(zhēng)性拮抗多種激動(dòng)劑導(dǎo)致的心房收縮性和自律性增高;降血作用，黃芩苷具有明顯的排鈉利尿作用，從而減少外周血容量及心輸出量，導(dǎo)致血管阻力降低，血壓下降;調(diào)節(jié)血脂，抗動(dòng)脈粥樣硬化，對(duì)心肌的保護(hù)作用以及對(duì)腎臟的保護(hù)作用和抗腫瘤作用等。目前黃芩苷主要應(yīng)用于治療慢性乙肝和早期肝硬化;防治糖尿病并發(fā)癥;治療全身炎癥反應(yīng)綜合征;以及在可復(fù)性牙髓炎蓋髓術(shù)中的應(yīng)用[6]。

半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don）為唇形科黃芩屬植物，以干燥全草入藥。辛、苦、寒。歸肺、肝、腎經(jīng)。清熱解毒，化淤利尿，用于療瘡腫痛，咽喉腫痛，跌撲傷痛，水腫，黃疸，蛇蟲(chóng)咬傷[7]。化學(xué)成分主要包括：黃酮類(lèi)化合物、二萜及二萜內(nèi)酯類(lèi)化合物、多糖類(lèi)成分以及其他成分。藥理作用包括：解熱作用、抗癌作用、抗衰老作用、護(hù)肝作用、免疫調(diào)節(jié)作用、抑菌作用、抗病毒作用等[8]。已從半枝蓮中提取分離出27個(gè)黃酮類(lèi)化合物，類(lèi)型豐富，含量比較高，如黃芩苷、野黃芩苷、木犀草素等。現(xiàn)代藥理研究表明黃酮類(lèi)成分是半枝蓮發(fā)揮抗腫瘤、解熱、抗炎、保肝作用的主要有效成分[9]。半枝蓮臨床應(yīng)用廣泛，是一味有研究?jī)r(jià)值的中藥。半枝蓮在民間使用廣泛，歷史久遠(yuǎn)， 具有活血化瘀、涼血止血、清熱解毒之功效，臨床廣泛地用于腫瘤的治療。既能活血化瘀，又能涼血止血，止血而不留瘀，化瘀而不傷正，應(yīng)是半枝蓮治療腫瘤時(shí)的一大優(yōu)勢(shì)。因而，半枝蓮散瘀止血、清熱解毒的有效部位值得研究。在大量臨床應(yīng)用中，半枝蓮常與白花蛇舌草、半邊蓮配伍治療癌癥、肝炎等病。目前，藥典只有記載半枝蓮總黃酮含量的測(cè)定法，本文報(bào)道中藥半枝蓮中黃芩苷的提取及含量測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

UV2550紫外光光度計(jì)（日本島津公司），IS09001電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。氫氧化鈉（汕頭市西隴化工廠(chǎng)有限公司）。鹽酸（汕頭市西隴化工廠(chǎng)有限公司）。95%乙醇（天津市百世化工有限公司）均為分析純。黃芩苷對(duì)照品（北京恒元啟天化工技術(shù)研究院北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司聯(lián)合研制）。半枝蓮（廣西產(chǎn)）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品試液的配制

精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品6.8mg， 置25mL量瓶中， 加入適量50%乙醇，水浴加熱使黃芩苷完全溶解，再加入50%乙醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（濃度0.272mg/mL）。

2.2 樣品供試品的提取以及制備

稱(chēng)取粉碎后的半枝蓮粗粉60g，以300mL 50%乙醇溶液，回流提取1小時(shí)，趁熱抽濾。濾渣加入100ml 50%乙醇繼續(xù)回流提取30分鐘，趁熱抽濾，合并兩次濾液。濾液水浴加熱揮發(fā)至無(wú)醇味，40℃條件下加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH 1～2，80℃條件下保溫30分鐘，靜置12小時(shí)。離心沉淀，加適量水?dāng)噭?，加?0%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH 至7，加適量50%乙醇，抽濾，濾液加入濃鹽酸調(diào)節(jié)pH 1～2，充分?jǐn)嚢瑁?0℃條件下保溫30分鐘，抽濾，沉淀依次用水，50%乙醇洗滌，95%乙醇洗滌，然后于60℃干燥至恒重，得黃芩苷樣品[10]。精密稱(chēng)量黃芩苷樣品50mg樣品，以50%乙醇定容于100mL容量瓶中，備用。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取適量的黃芩苷對(duì)照品與樣品溶液，分別置于100 mL 容量瓶中，加50%乙醇定容至刻度，以不加對(duì)照品或樣品的隱性試劑為空白，立即測(cè)定。在 200-360 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，對(duì)照品與樣品溶液在278nm處均有最大吸收，故選擇278nm波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

精密量取黃芩苷對(duì)照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置100mL容量瓶中，用50%乙醇定容，以相應(yīng)試劑為空白，在278nm測(cè)定波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A。以A縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，得回歸方程y=56.985x+0.0083（r =0.9999），表明黃芩苷在0.00272至0.0136mg/mL濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取供試品溶液2mL至 25mL 容量瓶中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制”項(xiàng)下的方法操作，并以相應(yīng)試劑為空白，在波長(zhǎng)278nm處測(cè)定吸光度。連續(xù)6次，計(jì)算吸光度的RSD為0.14%，表明儀器精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱(chēng)取同一批樣品5份，每份60g，按供試品溶液制備方法進(jìn)行平行制備，每份取2 ml提取液，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制”項(xiàng)下的方法操作，并以相應(yīng)試劑為空白，在波長(zhǎng)278nm處測(cè)定吸光度。計(jì)算半枝蓮樣品的黃芩苷含量的RSD值為1.23%，表明本方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性考察

取同一樣品供試品溶液，按上述方法分別于不同時(shí)間（0min，20min，40min，60min，80min，100min，120min）測(cè)定吸收度，結(jié)果見(jiàn)下表，顯示在2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.27%?？疾鞂?shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)

精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品， 分別加入6份已知含量的10克的樣品中， ?按供試品溶液制備方法制備， 精密吸取2mL， 按“標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制”項(xiàng)下的方法操作，并以相應(yīng)試劑為空白，在波長(zhǎng)278nm處測(cè)定吸光度。計(jì)算回收率為99.8，RSD為0.58%，表明本方法回收率較好。

2.9 樣品的含量測(cè)定

精確稱(chēng)取實(shí)驗(yàn)所得黃芩苷粗品50mg用50%乙醇溶解定容于100 mL容量瓶。用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液，吸取續(xù)濾液2mL于25mL容量瓶中，用50%乙醇定容。另取50%乙醇作空白，于278 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，由回歸方程式計(jì)算出對(duì)應(yīng)濃度，計(jì)算半枝蓮中黃芩苷含量0.430%。

3 討論

3.1 黃芩苷的來(lái)源

據(jù)文獻(xiàn)記載，黃芩苷主要來(lái)源于黃芩根部，其他來(lái)源于植物并頭草即半枝蓮，木蝴蝶，以及大車(chē)前，其中黃芩、木蝴蝶中黃芩苷的提取以及含量測(cè)定，此前已有文獻(xiàn)報(bào)道，所以本實(shí)驗(yàn)主要是探索提取以及測(cè)定半枝蓮中黃芩苷的方法。

3.2 黃芩苷的提取

目前，尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道半枝蓮中黃芩苷的提取方法以及測(cè)定黃芩苷的含量的方法，本實(shí)驗(yàn)旨在建立提取半枝蓮中黃芩苷的方法以及用紫外分光光度法測(cè)定其含量。提取方法參考黃芩中黃芩苷的提取方法，首先采用水煮法，提取效果不佳，產(chǎn)量太少。后參考趙越平等[11]采用同一種溶劑乙醇分別以回流法、索氏抽提法、超聲法、和浸泡法等不同提取方法從黃芩原藥材中提取黃芩苷進(jìn)行了對(duì)比實(shí)驗(yàn)，結(jié)果用回流法提取黃芩苷為好，快速、簡(jiǎn)便、提取率高。浸泡法和超聲法提取率低，不能真實(shí)反映黃芩中黃芩的實(shí)際含量，超聲的次數(shù)和時(shí)間等因素對(duì)黃芩苷提取率有影響。最后采用乙醇回流提取，并且對(duì)黃芩苷的精制過(guò)程進(jìn)行改進(jìn)，經(jīng)過(guò)多次失敗經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出了提取半枝蓮中黃芩苷的較好的方法。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以黃芩苷為對(duì)照品，測(cè)定半枝蓮中黃芩苷的含量為0.430%，該方法的精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)，重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果均良好，本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高， 可作為測(cè)定黃芩苷常用的方法之一?？蔀榘胫ι彽馁|(zhì)量控制提供參考性資料依據(jù)。

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[責(zé)任編輯：薛俊歌]