高效液相色譜法測定番茄及其種植土壤中霜脲氰殘留的研究

楊玉梅 楊仁斌 肖少懷 韓鳳 彭莎

摘 ?要：采用高效液相色譜法分析測定番茄及其種植土壤中的霜脲氰殘留，對樣品的提取凈化條件進行了優(yōu)化。結(jié)果表明：以50 mL二氯甲烷為提取溶劑，番茄樣品高速勻質(zhì)2 min，土壤樣品恒溫（30℃）振蕩提取60 min時，霜脲氰的提取凈化效果較好。在試驗所設(shè)色譜條件下，霜脲氰標準溶液的相對保留時間為7.43 min;在0.4～80 ng范圍內(nèi)，霜脲氰峰面積與進樣量線性關(guān)系良好。添加回收試驗結(jié)果表明：該方法的最低檢出限為0.04 mg/kg，在靈敏度、準確度及精密度上均符合農(nóng)藥殘留分析的要求，可用于實際生產(chǎn)中番茄和土壤樣品中霜脲氰的殘留檢測。

關(guān)鍵詞：霜脲氰;高效液相色譜法;番茄;土壤;添加回收率

中圖分類號：O657.7 文獻標識碼：A 文章編號：1006-060X（2014）02-0052-23

Determination of Cymoxanil Residue in Tomato and Tomato Planted Soil by HPLC

YANG Yu-mei， YANG Ren-bin， XIAO Shao-huai， HAN Feng， PENG Sha

（Institute of Environmental Protection， HNAU， Changsha 410128， PRC）

霜脲氰（cymoxanil），化學名稱為1-（2-氰基-2-甲氧基亞氨基乙?；?3-乙基脲，是一種高效、低毒殺菌劑，對疫霜屬、霜霉屬、單軸霜屬等霜霉目真菌有較好防效。霜脲氰與其他保護性殺菌劑結(jié)合，廣泛應用于黃瓜、番茄、葡萄、荔枝等蔬菜及水果生產(chǎn)中[1-3]。目前，歐盟規(guī)定霜脲氰在番茄中的MRL值為0.2 mg/kg，而國際食品法典委員會（CAC）和我國均未對其作出規(guī)定。

近年來，已有相關(guān)研究報道了霜脲氰在馬鈴薯、黃瓜等作物上的殘留分析方法，例如：何麗麗等[4]采用乙酸乙酯和丙酮分別提取馬鈴薯和土壤中的霜脲氰，經(jīng)弗羅里硅土柱凈化，采用高效液相色譜測定其殘留量;李二虎等[5]采用乙腈提取，經(jīng)弗羅里硅土柱凈化，采用高效液相色譜法測定了黃瓜和土壤中霜脲氰的殘留量;劉明洋等[6]采用丙酮和乙酸乙酯分別提取，經(jīng)弗羅里硅土柱凈化，采用高效液相色譜測定了葡萄和土壤中的霜脲氰殘留量。然而，霜脲氰在番茄及其種植土壤中的殘留分析方法暫未見報道。因此，在現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)上，試驗優(yōu)化了番茄及其種植土壤中霜脲氰殘留檢測的前處理條件，并根據(jù)歐盟的規(guī)定進行了添加回收試驗。

1 ?材料與方法

1.1 ? 試驗材料

1.1.1 ? 主要儀器 ? 島津LC-20AT型高效液相色譜儀（配紫外檢測器及LCsolution工作站，日本島津公司）;RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）;KYC-1102C型恒溫（全溫）雙層培養(yǎng)搖床（上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司）;KQ-C型玻璃儀器氣流烘干器（鞏義市英峪予華儀器廠）;HYD-6528型勻漿機（中山市好運達電器有限公司）;DLSB-5L/25型低溫冷卻液循環(huán)泵，SHZ-D（Ⅲ） 型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）;FJ200-S型數(shù)顯高速分散均質(zhì)機（上海標本模型廠）;電子天平（上海光正醫(yī)療儀器有限公司）;梨形抽濾瓶、具塞三角瓶、250 mL分液漏斗等玻璃儀器。

1.1.2 ? 主要試劑 ? 霜脲氰標準品（純度為93.26%，農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所）;甲醇（色譜純）;二氯甲烷、氯化鈉、弗羅里硅土、無水硫酸鈉（均為分析純）。

1.2 ? 試驗方法

1.2.1 ? 樣品的制備 ? 新鮮番茄樣品沿縱向均勻切成四瓣，取不相鄰的兩瓣，用勻漿機粉碎;土壤樣品去掉砂石和動植物殘體等非土壤組分，過20目篩，混合均勻后按四分法取樣。將處理后的樣品分別裝入容器中貼好標簽，待測（注意：待測樣品如果不能及時測定，需貯藏在潔凈的聚乙烯塑料袋中于-20℃低溫下保存）。

1.2.2 ? 提取與凈化 ?（1）提取溶劑。霜脲氰易溶于氯仿、丙酮等有機試劑，可溶于甲醇，現(xiàn)有文獻中霜脲氰殘留檢測常用的提取試劑有乙酸乙酯、丙酮及乙腈等。試驗分別以二氯甲烷、丙酮、甲醇、乙酸乙酯、乙腈等有機溶劑為提取溶劑，比較這些溶劑對番茄及其種植土壤中霜脲氰的提取和凈化效果，以確定最適提取溶劑。（2）溶劑用量。分別用40、50、60、70、80 mL的二氯甲烷溶液提取番茄及其種植土壤中霜脲氰，根據(jù)提取效果確定最佳溶劑體積。（3）提取時間。試驗設(shè)1、2、3、4、5 min 5個不同勻質(zhì)提取時間，以及30、60、90、120 min 4個不同振蕩提取時間，分別比較二氯甲烷對番茄及其種植土壤樣品中霜脲氰的提取效果，以確定最佳的提取時間。

1.2.3 ? 色譜條件 ? 采用Inertsil ODS-SP色譜柱（5 μm，250 mm×4.6 mm），以甲醇︰水=50︰50（V︰V）為流動相，流速 1 mL/min，柱溫 40 ℃，波長 250 nm，進樣量 20 μL。

1.2.4 ? ?標準曲線繪制 ? 采用外標法進行定量分析。操作如下：準確稱取霜脲氰標準品0.053 61 g于50 mL棕色容量瓶中，用色譜純甲醇溶解并定容，配制成1 000 mg/L的霜脲氰母液。采用梯度稀釋法，用色譜甲醇配制濃度為0.02、0.04、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L的霜脲氰系列標準溶液，按1.2.3所述色譜條件進行測定。以霜脲氰標準溶液的質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標，測得的相應色譜峰峰面積（mV·s）為縱坐標繪制霜脲氰標準曲線。

1.2.5 ? 添加回收試驗 ?（1）檢出限。在20 g番茄和土壤空白樣品中分別添加低質(zhì)量濃度的霜脲氰標準溶液，按1.2.1的樣品制備法及1.2.3所述色譜條件，以確定該檢測方法的最低檢出限。（2）添加回收試驗。在番茄和土壤空白樣品中添加霜脲氰標準溶液，制備成濃度為0.05、0.50、2.00 mg/kg的樣品，按1.2.1的樣品制備法及1.2.3所述色譜條件，平行測定5 次，同時設(shè)置空白試驗。

2 ? 結(jié)果與分析

2.1 ? 提取條件優(yōu)化

與丙酮、甲醇、乙酸乙酯、乙腈等溶劑相比，二氯甲烷的提取效果最為明顯，因此確定二氯甲烷溶劑為提 取劑。隨著溶劑體積增加，二氯甲烷的添加回收率逐漸升高，當溶劑體積增加至50 mL 時，回收率達到90%以上;繼續(xù)增加溶劑體積，提取效果無明顯變化。因此，試驗選擇二氯甲烷用量為50 mL。在番茄樣品勻質(zhì)2 min、土壤樣品振蕩60 min時，提取效果較好，持續(xù)延長提取時間，霜脲氰的提取量無明顯增長趨勢。因此，試驗選擇番茄樣品的提取時間為2 min，土壤樣品的提取時間為60 min。

最后確定番茄及其種植土壤的提取凈化操作如下。（1）番茄樣品：準確稱取20 g待測番茄樣品于250 mL具塞三角瓶中，加50 mL二氯甲烷提取，以1 800 r/min勻質(zhì)2 min，靜置5 min;將樣品轉(zhuǎn)入離心管中，以3 000 r/min離心5 min，靜置3 min;將上清液轉(zhuǎn)入已加有20 mL 10%氯化鈉溶液的250 mL分液漏斗中，振蕩1 min，靜置分層，分離出下層有機相;依次用30、30、20 mL的二氯甲烷萃取3次，有機相（萃取液）經(jīng)無水硫酸鈉脫水后，合并于250 mL具塞三角瓶中。（2）土壤樣品：準確稱取20 g已制備的待測土壤樣品于250 mL具塞三角瓶中，加50 mL二氯甲烷，于30℃恒溫振蕩提取60 min，靜置5 min后減壓抽濾，再用30 mL二氯甲烷洗滌濾渣和抽濾瓶，濾液過無水硫酸鈉脫水后，合并于250 mL具塞三角瓶中。經(jīng)上述處理后的番茄和土壤樣品液上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，40℃濃縮至近干，加2 mL色譜甲醇（超聲波助溶）溶解，再用色譜甲醇定容至5 mL，過0.45 μm膜，待HPLC測定。

2.2 ? 線性范圍

在試驗的色譜條件下，霜脲氰標準溶液的相對保留時間為7.431 min（圖1）。霜脲氰峰面積與進樣量在0.4～80 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為y = 55 909x – 834.66，相關(guān)系數(shù)R2= 0.999 9。

2.3 ? 靈敏度、準確度和精密度

該方法對番茄和土壤樣品中霜脲氰的最低檢出限均為0.04 mg/kg（信噪比S/N=3）。由表1可知，霜脲氰在番茄中的平均添加回收率分別為87.88%、90.20%、86.90%，變異系數(shù)分別為2.53%、1.71%、2.78%;在土壤中的平均添加回收率為108.95%、96.23%、95.34%，變異系數(shù)分別為5.89%、3.85%、5.36%。這表明該方法在準確度和精密度上均達到農(nóng)藥殘留分析要求，可用于實際藥品的殘留分析。番茄和土壤空白樣品以及添加了霜脲氰的樣品液相色譜圖見圖2、圖3。

3 ? 結(jié) ?論

以50 mL二氯甲烷為提取溶劑，番茄樣品高速勻質(zhì)2 min，土壤樣品恒溫（30℃）振蕩提取60 min時，霜脲氰的提取凈化效果較好。在試驗所設(shè)色譜條件下，霜脲氰標準溶液的相對保留時間為7.43 min;在0.4～80 ng范圍內(nèi)，霜脲氰峰面積與進樣量線性關(guān)系良好，回歸方程為y = 55 909 x – 834.66，相關(guān)系數(shù)R2= 0.999 9。添加回收試驗結(jié)果表明：該方法對番茄和土壤樣品中霜脲氰的最低檢出限均為0.04 mg/kg。這說明該方法在靈敏度、準確度及精密度上均達到農(nóng)藥殘留分析要求;同時，其前處理較簡單，不需要特殊的儀器設(shè)備，可節(jié)約分析成本，且重復性好，可用于實際生產(chǎn)中番茄和土壤樣品中霜脲氰的殘留檢測。

參考文獻：

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（責任編輯：成 ?平）