褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響

畢旺華 馮曉梅 李建杰 周魯寧

摘要 [目的] 為了研究海洋活性物質(zhì)褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇的影響。[方法] 在培養(yǎng)基中加入不同濃度的褐藻寡糖，測(cè)定杏鮑菇固體平板培養(yǎng)菌絲體的生長(zhǎng)速度、液體發(fā)酵菌絲體干重及發(fā)酵過(guò)程中纖維素酶活力。[結(jié)果] 褐藻寡糖濃度為0.001 mg/ml的試驗(yàn)組菌絲體生長(zhǎng)速度、菌絲體生物量、纖維素酶活性較其他試驗(yàn)組差異極顯著。[結(jié)論] 低濃度的褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用。

關(guān)鍵詞 褐藻寡糖；杏鮑菇；菌絲體；纖維素酶

中圖分類號(hào) S646 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）31-10841-01

Influence of Algae Oligose on Growth of Pleurotus eryngii

BI Wanghua，F(xiàn)ENG Xiaomei，LI Jianjie，ZHOU Luning*

（National Engineering Research Center for Marine Drugs， Qingdao， Shandong， 266000）

Abstract [Objective] The research aimed to study the influence of the marine active substances of algae oligose on Pleurotus eryngii. [Method] By adding different concentrations of alage oligosaccharides into medium， the growth rate of mycelium which grew on the solid plate culture of Pleurotus eryngii， dry weight of fermentation mycelium， and the cellulase activity in fermentation were measured. [Result] When the concentration of the algae oligosaccharide was 0.001 mg/ml， the growth rate of mycelium， the biomass of mycelium and the cellulase activity were more different than other group.[Conclusion]The effect of algae oligosaccharide with low concentration on the growth of Pleurotus eryngii was great.

Key word Brown alage oligosaeeharides； Pleurotus； Mycelium； Cellulase

杏鮑菇（Pleurotus eryng）學(xué)名刺芹側(cè)耳，菌肉肥厚，質(zhì)地脆嫩，其主要營(yíng)養(yǎng)成分較齊全，蛋白質(zhì)、纖維素、多糖及礦物質(zhì)含量較高，脂肪含量低，有降血壓、降血脂、預(yù)防腫瘤、增強(qiáng)肌體免疫力的功效。褐藻寡糖是海洋大型經(jīng)濟(jì)藻類海帶細(xì)胞壁多糖褐藻酸鈉提取降解得到的低分子寡糖，其分子結(jié)構(gòu)是由βD甘露糖醛酸（ManA）和其C5差向異構(gòu)體αL古洛糖醛酸（GulA）通過(guò)1-4糖苷鍵連接而成。褐藻寡糖分子量低，水溶性強(qiáng)，穩(wěn)定性高，具有很多生物活性，如抗腫瘤^[1-2]、抑菌^[3]、抗逆性^[4]等。褐藻寡糖在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域有廣闊的研究前景^[5]。筆者通過(guò)添加不同濃度的褐藻寡糖，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)，探討褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響^[6]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 供試菌種為杏鮑菇，由章丘市食用菌研究所提供；供試褐藻寡糖由國(guó)家海洋藥物工程技術(shù)研究中心制備提供。

PDA基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成為馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 ml；

平板培養(yǎng)基組成為馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，磷酸二氫鉀2 g，硫酸鎂1 g，瓊脂20 g，水1 000 ml；

液體菌種活化培養(yǎng)基組成為：馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，磷酸二氫鉀2 g，硫酸鎂1 g，水1 000 ml；

液體培養(yǎng)基組成為：馬鈴薯（去皮）50 g，葡萄糖10 g，磷酸氫二鉀0.05 g，磷酸二氫鉀0.3 g，硫酸鎂0.3 g，玉米粉15 g，水1 000 ml。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 杏鮑菇固體菌絲體生長(zhǎng)。將杏鮑菇菌種于PDA基礎(chǔ)培養(yǎng)基25 ℃活化3～5 d，至菌絲體長(zhǎng)滿平板，取5 mm×5 mm大小的杏鮑菇菌塊接種于菌絲體生長(zhǎng)的平板培養(yǎng)基中，每組5個(gè)重復(fù)，25 ℃培養(yǎng)直至菌絲體生長(zhǎng)到整個(gè)平板的2/3為止，每天記錄1次，觀察菌絲體生長(zhǎng)情況。

1.2.2 杏鮑菇液體培養(yǎng)。將杏鮑菇菌種接種于液體活化培養(yǎng)基，在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中120 r/min活化5 d后，按照5%的比例添加到試驗(yàn)組液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 d，測(cè)定發(fā)酵液中菌絲體生物量、發(fā)酵液中纖維素酶活力。

1.2.3 纖維素酶活測(cè)定。

準(zhǔn)確量取1 mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml于25 ml試管中，并且加蒸餾水至1 ml，再加入3，5二硝基水楊酸顯色液3 ml，搖勻后在沸水浴中加熱顯色 10 min，取出，冷卻至室溫，再加蒸餾水至25 ml，搖勻后在550 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光值，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線^[7-8]。

將發(fā)酵液在3 000 r/min下離心1 min后，取離心后上清液1 ml，并用蒸餾水定容到100 ml容量瓶中，取定容后發(fā)酵液1 ml于試管中，對(duì)照取定容后發(fā)酵液1 ml后沸水浴加熱5 min，然后均分別加入濃度0.5%羥甲基纖維素鈉水溶液（CMC）3 ml，搖勻后在50 ℃水浴鍋中加熱30 min，取出后立即于沸水浴中加熱10 min，使酶失活，冷卻后加入3，5二硝基水楊酸顯色液3 ml，搖勻后在沸水浴中加熱顯色10 min，取出冷卻至室溫，再加蒸餾水至25 ml，搖勻后在550 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光值。每個(gè)樣品3個(gè)平行。

纖維素酶活力單位=（纖維素酶吸光值所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的葡萄糖含量×稀釋倍數(shù)）/（糖化所用時(shí)間×反應(yīng)酶液體積）

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度的褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)的影響

纖維素酶標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。由表1可知，不同濃度的褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇菌絲體的生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用；褐藻寡糖濃度為0.001 mg/ml時(shí)菌絲體生長(zhǎng)最快，為0.56 cm/d，菌絲茂盛，與對(duì)照組差異在0.01水平顯著，而添加量為0.100與0.010 mg/ml的褐藻寡糖的試驗(yàn)組對(duì)杏鮑菇的菌絲體有促進(jìn)作用，但是彼此之間差異不顯著。

2.2 不同濃度的褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇液體發(fā)酵菌絲體生物量的影響

由表1可知，不同濃度的褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇液體發(fā)酵菌絲體生物量的影響差異在0.05水平顯著，其中添加量為0.001 mg/ml的試驗(yàn)組菌絲體生物量與對(duì)照組相比差異在0.01水平顯著，菌絲體干重為9.1 g/L，添加量為0.100 mg/ml的試驗(yàn)組與對(duì)照組相比對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的有一定的抑制作用，菌絲體干重為4.8 g/L。

2.3 不同濃度的褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇液體發(fā)酵纖維素酶活的影響

由表1可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組之間存在0.01水平顯著性差異，添加量為0.001 mg/ml的試驗(yàn)組褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇產(chǎn)纖維素酶的促進(jìn)作用最明顯，纖維素酶活為36.42 U/ml，添加量為0.100 mg/ml的試驗(yàn)組相比空白對(duì)照組對(duì)杏鮑菇纖維素酶的分泌有一定的抑制作用，纖維素酶活只有11.93 U/ml，相對(duì)于空白對(duì)照組下降48.19%。由此可知，高濃度的褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇產(chǎn)纖維素酶有一定的抑制作用，隨著濃度的降低，對(duì)纖維素酶分泌的促進(jìn)作用越明顯。

3 結(jié)論與討論

研究表明，褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)、液體發(fā)酵菌絲體生物量及發(fā)酵液中纖維素酶活在一定的濃度下具有促進(jìn)作用，如平板培養(yǎng)濃度為0.001 mg/ml褐藻寡糖試驗(yàn)組杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)速度最快，而0.100與0.010 mg/ml的試驗(yàn)組菌絲體生長(zhǎng)速度無(wú)明顯差異；在液體培養(yǎng)中添加0.001 mg/ml試驗(yàn)組液體發(fā)酵培養(yǎng)菌絲體生長(zhǎng)最快，菌絲體生物量較其他試驗(yàn)組差異在0.01水平顯著，為9.1 g/L，而0.100 mg/ml的試驗(yàn)組對(duì)液體發(fā)酵菌絲體的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，菌絲體干重為4.8 g/L；添加0.010 mg/ml的褐藻寡糖可明顯提高杏鮑菇產(chǎn)纖維素酶的活性；添加0.001 g/ml的褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇生長(zhǎng)的各個(gè)性能指標(biāo)均有明顯的促進(jìn)作用。由此可知，褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇菌絲體生長(zhǎng)速度、菌絲體生物量、纖維素酶活性具有促進(jìn)作用，低濃度的試驗(yàn)組較高濃度的試驗(yàn)組的促進(jìn)作用明顯。目前，褐藻寡糖對(duì)杏鮑菇菌絲體作用機(jī)理尚在研究中，但褐藻寡糖在食藥用菌的應(yīng)用中具有較好的前景。

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