HPLC法測(cè)定感冒軟膠囊中胡薄荷酮的含量

牛麗彬

摘要：目的：建立HPLC法同時(shí)測(cè)定感冒軟膠囊中胡薄荷酮含量的方法。方法：采用Diamonsil C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），用甲醇-水梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，柱溫35℃，流速1.0mL·min-1，進(jìn)樣量10μL。結(jié)果：胡薄荷酮與其他雜質(zhì)峰分離良好。胡薄荷酮在0.393～6.286μg·mL-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=

0.9998），胡薄荷酮平均加樣回收率為98.43%，RSD為0.80%（n=6）。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為感冒軟膠囊的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：HPLC 感冒軟膠囊 胡薄荷酮 含量測(cè)定

感冒軟膠囊是衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第六冊(cè)收錄的品種，主要由羌活、麻黃、桂枝、荊芥穗、防風(fēng)等14味中藥材組成。用于外感風(fēng)寒引起的頭痛發(fā)熱，鼻塞流涕，惡寒無汗，骨節(jié)酸痛，咽喉腫痛。荊芥穗是感冒軟膠囊中具有抗病原微生物、解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛作用的成分，本文采用HPLC法測(cè)定感冒軟膠囊中胡薄荷酮的含量，獲得滿意效果，可用于產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent1200 高效液相色譜儀；賽多利斯股份公司CPA225D型電子分析天平（德國(guó)）；KQ-300 DA型超聲波清洗器； UV-2550 型紫外分光光度儀（日本島津）。胡薄荷酮對(duì)照品；甲醇為色譜純；水為重蒸水。感冒軟膠囊由石藥中諾有限公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex Luna C18（4.6mm×250mm，

5μm）；以甲酸溶液為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按表1中規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速：1mL·min-1，柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；進(jìn)樣量10μL。

表1 梯度洗脫條件

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2.2 溶液的制備

2.2.1 制備對(duì)照品溶液

準(zhǔn)確稱量胡薄荷酮對(duì)照品約1.965mg，置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋待規(guī)定的刻度，并搖勻，即得39.3μg·mL-1胡薄荷酮儲(chǔ)備液；再取8mL胡薄荷酮儲(chǔ)備液，置50mL量瓶中，同時(shí)加入甲醇至規(guī)定的刻度，得到含胡薄荷酮6.288μg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.2.2 制備供試品溶液

精密稱定1g感冒軟膠囊內(nèi)容物，并將其置于塞錐形瓶中，并精確加入20mL甲醇，稱定其重量，對(duì)其超聲處理30min，然后冷卻到室溫，再稱量其重量，通過甲醇補(bǔ)足減失的重量，并搖勻，然后用0.22μm有機(jī)系微孔濾膜對(duì)其進(jìn)行濾過處理。

2.2.3 陰性對(duì)照液

對(duì)于除荊芥穗、薄荷以外的其余藥味，按照處方比例進(jìn)行稱取，同時(shí)依據(jù)感冒軟膠囊制備工藝制成相應(yīng)的陰性樣品，根據(jù)供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照液。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

分別取10μL對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照液，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，其色譜圖如圖1所示。

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A——對(duì)照品，B——供試品，C——陰性對(duì)照；1——胡薄荷酮

圖1

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液，并用甲醇進(jìn)行稀釋，得到標(biāo)準(zhǔn)的溶液。含胡薄荷酮分別為0.393、0.786、1.572、3.144、6.288μg·mL-1，在液相色譜儀中注入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，記錄相應(yīng)的色譜圖。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

按上述色譜條件，精密吸取含胡薄荷酮為1.572μg·mL-1的對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5 次，記錄胡薄荷酮峰面積值分別為40.8，40.8，41.3，40.9，41.5，平均值為41.1，RSD為1.07%（n=5）。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取本品（批號(hào)0311428）內(nèi)容物，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按色譜條件檢測(cè)，精密吸取供試品溶液10μL，注入色譜儀，共進(jìn)樣5次，記錄胡薄荷酮峰面積值分別為62.3，61.7，61.9，61.8，62.1，平均值為62.0，RSD為0.55%（n=5）。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取本品（批號(hào)0311428）內(nèi)容物，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按色譜條件，精密吸取供試品溶液10μL，分別在0，4，8，12，16，24h進(jìn)樣。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn)

取6份已知含量的感冒軟膠囊（批號(hào)0311428）內(nèi)容物約0.5g，準(zhǔn)確稱量，分別加入到編號(hào)1～6的具塞錐形瓶中，分別精密加0.4mL、濃度0.0393mg·mL-1的胡薄荷酮對(duì)照品儲(chǔ)備液，然后加入19.6mL甲醇，按照供試品溶液制備方法，計(jì)算回收率。平均回收率如表2所示：

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

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2.9 樣品含量測(cè)定

分別稱取6批不同批號(hào)的感冒軟膠囊內(nèi)容物約1g，精密稱定，用“2.2.2”方法制備，用“2.1”方法測(cè)定感冒軟膠囊中胡薄荷酮的含量；結(jié)果見表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

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3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取對(duì)照品溶液，在200～400nm范圍內(nèi)掃描，胡薄荷酮在250nm有最大吸收。故采用250nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇

綜合考慮，采用梯度洗脫，流動(dòng)相中甲醇的濃度先低后高，使胡薄荷酮出峰時(shí)間23min左右，分離度好，靈敏度高。

本試驗(yàn)方法測(cè)定了薄荷與荊芥穗中的胡薄荷酮的含量，作為檢測(cè)感冒軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為感冒清熱顆粒的質(zhì)量檢測(cè)提供了一種簡(jiǎn)便、有效的方法。

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