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    針刺不同穴位對寒凝證類痛經(jīng)大鼠體表區(qū)域溫度的影響

    2014-09-28 06:29:14楊佳敏沈小雨任曉暄郭孟瑋趙雅芳申松希齊丹丹朱世鵬許詠思張露芬李曉泓
    醫(yī)學研究生學報 2014年9期
    關(guān)鍵詞:穴區(qū)元組體表

    楊佳敏,沈小雨,羅 麗,任曉暄,郭孟瑋,趙雅芳,張 玲,申松希,齊丹丹,朱世鵬,許詠思,嵇 波,張露芬,李曉泓,朱 江

    0 引 言

    紅外熱成像技術(shù)具有簡便、直觀、客觀和無損傷等特點,可用于某些疾病的診斷和輔助診斷,具有一定的臨床價值,并且越來越多的應(yīng)用到針刺經(jīng)絡(luò)的研究中。查閱近20年來關(guān)于針刺經(jīng)絡(luò)與體表溫度變化的相關(guān)文獻[1-2],其主要從針刺不同手法對穴位皮膚溫度的影響,針刺后經(jīng)脈循行線上的溫度變化,針刺遠端穴位對病變部位溫度的影響以及針刺對經(jīng)絡(luò)溫度失衡的調(diào)節(jié)方面進行研究,為研究經(jīng)絡(luò)的效應(yīng)和臨床刺激手法的運用提供了依據(jù),但這些研究主要是在人體進行的,缺乏相關(guān)的動物實驗依據(jù)。本研究旨在從動物實驗角度,觀察針刺不同穴位對穴位體表溫度變化的影響,及留針不同時間階段的溫度變化差異。本實驗中通過觀察針刺寒凝證類痛經(jīng)大鼠三陰交穴、關(guān)元穴后,三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)、關(guān)元穴區(qū)在60 min內(nèi)的體表溫度變化,探討針刺后穴區(qū)體表溫度的動態(tài)變化規(guī)律,為進一步說明針刺對穴區(qū)體表溫度的影響,同經(jīng)穴位和它經(jīng)穴位的循經(jīng)性溫度變化規(guī)律以及經(jīng)穴的特異性提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 健康清潔級SD大鼠,雌性,3月齡,32只,性成熟未交配,體重(220±10)g,由北京軍事醫(yī)學科學研究院提供,合格證號:SCXK2007-004(軍)。動物置于清潔柜中,進食普通飼料,自由飲水,室溫保持在(23±1)℃,濕度(45±5)%,標準12 h晝夜交替周期。實驗在白天進行,實驗開始前,動物至少適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。本動物實驗過程均遵守美國國立衛(wèi)生院倡導的實驗動物關(guān)懷、使用指導原則和以減少、替代和優(yōu)化為核心的動物實驗“3R”原則。

    1.2 主要試劑和儀器 苯甲酸雌二醇注射液(寧波市三生藥業(yè)有限公司,批號:120207);縮宮素注射液(上海禾豐制藥廠生產(chǎn),批號:120302);自制美蘭染色溶液;20%氨基甲酸乙酯注射液(批號T20080530)。BC/BD-379HB臥式冰柜;紅外熱像儀(FLIR SC640,F(xiàn)LIR system,美國),溫度范圍為-40℃~2000℃,熱敏感度為(25°×19°)。

    1.3 動物分組 通過陰道涂片法,即每日定時用細棉簽蘸以等滲鹽水,濕潤后輕輕插入大鼠陰道0.5 cm,稍微轉(zhuǎn)動后取出,將帶有陰道內(nèi)容物的棉簽在載玻片上均勻轉(zhuǎn)動后涂片,在顯微鏡下觀察陰道涂片的組織學變化,根據(jù)細胞形態(tài)、種類及數(shù)量篩選出動情間期的雌性大鼠32只,按照隨機數(shù)字表法分為等滲鹽水組、模型組、三陰交組、關(guān)元組,每組8只。等滲鹽水組每日給予同等劑量的等滲鹽水,不冷凍。其余各組大鼠均皮下注射苯甲酸雌二醇,連續(xù)10 d,第1、10 天皮下注射0.5mg/d,第2 -9 天0.2mg/d。末次給藥1 h后,腹腔注射縮宮素2 U/只。將大鼠放入-25℃的低溫冰柜中,持續(xù)受凍4 h左右,中間間隔2 h,開蓋通氣5 s。待大鼠出現(xiàn)寒顫停止,畏寒喜暖,蜷縮少動,朦朧欲睡,反應(yīng)遲鈍,呼吸微弱,毛發(fā)蓬松、豎立、無光澤,尿色淡,糞便濕爛,耳色暗紅,爪甲及尾部紫暗、腫脹等癥狀和體征時,將大鼠取出冰柜,連續(xù)受凍5 d。手針,使用Φ0.25 mm×40 mm的一次性無菌針灸針(中研太和牌,無錫,中國)。三陰交組直刺入三陰交穴[3]4~5 mm,關(guān)元組直刺入關(guān)元穴[3]4~5 mm,針刺即刻及針刺10 min時行平補平瀉的捻轉(zhuǎn)手法30 s,留針20 min后取針。模型組和等滲鹽水組不予針刺。

    1.4 紅外熱成像記錄步驟 寒凝證類痛經(jīng)模型制備第10天,注射苯甲酸雌二醇后,肌內(nèi)注射氨基甲酸乙酯0.7 mL/100 g麻醉大鼠,用動物剃毛器剃去軀干前部及后肢內(nèi)側(cè)的毛發(fā),暴露出三陰交穴、血海穴、關(guān)元穴。將麻醉的大鼠固定在透明鼠板上,被攝對象放置于紅外攝像機鏡頭視野內(nèi),與攝像頭的距離固定為1 m,標記雙側(cè)三陰交穴、血海穴以及關(guān)元穴。記錄動物的基礎(chǔ)溫度,等滲鹽水組腹腔注射等滲鹽水,模型組腹腔注射縮宮素,三陰交組、關(guān)元組針刺,記錄即刻及針刺后 5、10、20、30、40、50、60 min各時間點的溫度。實驗期間,實驗室溫度保持在(23±1)℃,濕度(60±5)%。

    1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。定量資料采用均數(shù)±標準差()表示。若各組均正態(tài)且方差齊,采用One-Way ANOVA分析,繼以LSD進行多組間比較;若各組均正態(tài)而方差不齊,采用Welch檢驗;若各組不服從正態(tài)性檢驗,則采用非參數(shù)檢驗,繼以兩兩組間比較。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 大鼠左側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化 與等滲鹽水組比較,三陰交組、關(guān)元組體表溫度變化在針刺即刻至5 min時顯著下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,三陰交組在針刺即刻至5 min時顯著下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

    2.2 大鼠右側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化 與等滲鹽水組比較,三陰交組在5~10 min時間段顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,三陰交組體表溫度變化在5~10 min、20~30 min時間段顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與關(guān)元組比較,三陰交組在5~10 min,20~30 min時間段顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

    2.3 大鼠左側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化 等滲鹽水組、模型組、三陰交組和關(guān)元組左側(cè)血海穴區(qū)體表溫度變化在各時間段差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

    2.4 大鼠右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化 與等滲鹽水組比較,模型組在30~40 min時體表溫度變化顯著下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),三陰交組分別在即刻至5 min時下降,5~10 min時間段升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),關(guān)元組在即刻至5 min時下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與模型組比較,三陰交組分別在即刻至5 min時下降,在5~10 min和30~40 min時均升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與關(guān)元組比較,三陰交組在即刻至5 min時下降,5~10 min時升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P <0.05)。見表4。

    2.5 大鼠關(guān)元穴區(qū)體表溫度的變化 等滲鹽水組、模型組、三陰交組和關(guān)元組關(guān)元穴區(qū)體表溫度變化在各時間段差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表5。

    表1 大鼠左側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 1 Skin temperature changes in the left SP6 induced by needling different acupoints(,℃)

    表1 大鼠左側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 1 Skin temperature changes in the left SP6 induced by needling different acupoints(,℃)

    與等滲鹽水組比較,*P<0.01;與模型組比較,#P<0.05

    組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5 min 5~10 min 10~20 min 20~30 min 30~40 min 40~50 min 50~60 min等滲鹽水組 8 0.00±0.20 -0.25±0.13 -0.12±0.11 -0.15±0.31 0.03 ±0.22 0.04 ±0.13 0.05 ±0.08 0.06 ±0.12模型組 8 -0.21 ±0.16 -0.38 ±0.17 -0.17 ±0.12 -0.31 ±0.17 -0.13 ±0.13 -0.03 ±0.26 -0.02 ±0.09 -0.09 ±0.14三陰交組 8 -0.10 ±0.47 -0.56 ±0.22*# -0.08 ±0.15 -0.35 ±0.19 0.08 ±0.18 0.03 ±0.17 0.07 ±0.16 0.01 ±0.18關(guān)元組 8 -0.23 ±0.18 -0.48 ±0.11* -0.07 ±0.10 -0.29 ±0.09 -0.09 ±0.07 -0.05 ±0.12 -0.01 ±0.15 -0.09 ±0.11

    表2 大鼠右側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 2 Skin temperature changes in the right SP6 induced by needling different acupoints(,℃)

    表2 大鼠右側(cè)三陰交穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 2 Skin temperature changes in the right SP6 induced by needling different acupoints(,℃)

    與等滲鹽水組比較,*P <0.01;與模型組比較,#P <0.01;與關(guān)元組比較,△P <0.05,△△P <0.01

    組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5 min 5~10 min 10~20 min 20~30 min 30~40 min 40~50 min 50~60 min等滲鹽水組 8 -0.03±0.13 -0.20±0.17 -0.05±0.12 -0.05±0.14 -0.06±0.20 0.01±0.18 -0.03 ±0.17 -0.01±0.15模型組 8 -0.22 ±0.10 -0.23 ±0.29 -0.14 ±0.21 -0.30 ±0.26 -0.16 ±0.19 -0.11 ±0.26 0.02 ±0.14 -0.15 ±0.35三陰交組 8 -0.16 ±0.40 -0.25 ±0.32 0.49 ±0.35*#△△ -0.11 ±0.41 0.14 ±0.25#△ 0.05 ±0.17 -0.02 ±0.09 -0.10 ±0.25關(guān)元組 8 -0.20±0.38 -0.40±0.25 -0.06±0.14 -0.32±0.18 -0.09±0.15 -0.12±0.25 -0.06±0.23 -0.06±0.18

    表3 大鼠左側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 3 Skin temperature changes in the left SP10 induced by needling different acupoints(,℃)

    表3 大鼠左側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 3 Skin temperature changes in the left SP10 induced by needling different acupoints(,℃)

    組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5 min 5~10 min 10~20 min 20~30 min 30~40 min 40~50 min 50~60 min等滲鹽水組 8 -0.22±0.14 -0.26±0.18 -0.16±0.10 -0.21±0.21 -0.05±0.09 -0.04±0.15 -0.01±0.10 -0.04±0.08模型組 8 -0.34 ±0.31 -0.37 ±0.26 -0.21 ±0.07 -0.19 ±0.29 -0.16 ±0.13 -0.21 ±0.25 -0.07 ±0.12 -0.02 ±0.15三陰交組 8 -0.27±0.21 -0.39±0.28 -0.35±0.24 -0.17±0.18 -0.11±0.19 -0.03±0.19 -0.02±0.16 -0.06±0.13關(guān)元組 8 -0.28 ±0.16 -0.45 ±0.12 -0.22 ±0.10 -0.35 ±0.18 -0.11 ±0.11 -0.07 ±0.16 -0.05 ±0.16 -0.08 ±0.06

    表4 大鼠右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 4 Skin temperature changes in the right SP10 induced by needling different acupoints(,℃)

    表4 大鼠右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 4 Skin temperature changes in the right SP10 induced by needling different acupoints(,℃)

    與等滲鹽水組比較,*P <0.05,**P <0.01;與模型組比較,#P <0.05,##P <0.01;與關(guān)元組比較,△P <0.05,△△P <0.01

    組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5min 5~10min 10~20min 20~30min 30~40min 40~50min 50~60min等滲鹽水組 8 -0.19±0.18 -0.21±0.19 -0.11±0.12 -0.17±0.11 -0.12±0.15 -0.05±0.11 0.04±0.25 -0.06±0.18模型組 8 -0.11±0.18 -0.38±0.15 -0.18±0.14 -0.30±0.19 -0.27±0.40 -0.30±0.26* -0.08±0.19 -0.05±0.07三陰交組 8 -0.23±0.95 -0.64±0.21**#△ 0.18±0.20**##△△ -0.41±0.30 -0.10±0.19 -0.03±0.11## -0.05±0.18 -0.10±0.15關(guān)元組 8 -0.02±0.25 -0.45±0.13* -0.15±0.08 -0.42±0.12 -0.13±0.13 -0.15±0.15 -0.14±0.29 -0.10±0.16

    表5 大鼠關(guān)元穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 5 Skin temperature changes in the CV4 induced by needling different acupoints(,℃)

    表5 大鼠關(guān)元穴區(qū)體表溫度的變化(,℃)Table 5 Skin temperature changes in the CV4 induced by needling different acupoints(,℃)

    組別 n 基礎(chǔ)溫度 即刻至5 min 5~10 min 10~20 min 20~30 min 30~40 min 40~50 min 50~60 min等滲鹽水組 8 -0.21±0.23 -0.30±0.21 -0.13±0.14 -0.25±0.26 -0.17±0.13 0.03±0.10 -0.03±0.11 -0.26±0.49模型組 8 -0.27 ±0.20 -0.41 ±0.20 -0.15 ±0.13 -0.33 ±0.20 -0.14 ±0.19 -0.15 ±0.24 -0.07 ±0.11 -0.15 ±0.18三陰交組 8 -0.26±0.20 -0.44±0.28 -0.13±0.18 -0.39±0.23 -0.22±0.20 -0.05±0.17 -0.04±0.15 -0.06±0.16關(guān)元組 8 -0.42±0.42 -0.43±0.36 -0.10±0.16 -0.38±0.30 -0.20±0.06 -0.12±0.15 -0.02±0.15 -0.14±0.13

    3 討 論

    本研究采用的寒凝證類痛經(jīng)大鼠模型是基于對以往寒凝證動物模型制備方法的綜合評價與選擇[4-8],結(jié)合類痛經(jīng)大鼠模型的制備方法[9],通過預(yù)實驗中對制備模型的溫度和時間進行摸索,對-15℃條件下冷凍5、10 d以及-25℃條件下冷凍5、10 d的大鼠體征及血流動力學指標進行分析,結(jié)果顯示在-25℃的低溫冰柜中冷凍4 h,連續(xù)冷凍5 d的方法,從動物的全身表征和血流動力學上均更加符合中醫(yī)寒凝證的特點[10]。類痛經(jīng)模型的建立是基于苯甲酸雌二醇可以增強子宮活動,以及提高子宮平滑肌對縮宮素的敏感性,縮宮素可致子宮平滑肌收縮,引起疼痛反應(yīng),該造模方法更加符合人類原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病機制。故將寒凝證與類痛經(jīng)模型的制備方法結(jié)合起來制備寒凝證類痛經(jīng)大鼠模型。

    趙商勛等[11]對臨床上治療原發(fā)性痛經(jīng)的穴位使用頻次進行整理,發(fā)現(xiàn)三陰交、關(guān)元是臨床治療原發(fā)性痛經(jīng)的首選穴位。針刺三陰交穴可調(diào)理肝脾腎,消除或減輕疼痛。關(guān)元可調(diào)整肝脾腎三經(jīng)[12]。現(xiàn)代醫(yī)學發(fā)現(xiàn),支配三陰交穴的神經(jīng)節(jié)段分布在L3-L6[13],支配關(guān)元穴的神經(jīng)節(jié)段分布在 L1-L6[14],三陰交穴與關(guān)元穴具有相同的神經(jīng)節(jié)段支配。因此本研究選擇針刺三陰交、關(guān)元,觀察三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)、關(guān)元穴區(qū)的體表溫度變化,進而探討針刺在調(diào)節(jié)不同經(jīng)穴溫度變化上的規(guī)律與差異,以及針刺后是否引起經(jīng)脈循行線上穴區(qū)溫度的循經(jīng)性升高或降低規(guī)律,針刺近端穴位和遠端穴位誘發(fā)循經(jīng)性溫度變化的差異。

    相關(guān)文獻報道,針刺可調(diào)節(jié)穴位的體表溫度,穴位體表溫度的變化具有循經(jīng)性的特點[15-17]。張學勛等[18]對30例單純性周圍性面癱患者針刺“腿面頰”穴,得氣后,觀察患者面部迎香、巨髎兩穴的皮膚溫度變化,進一步說明針刺穴位后的得氣與療效的關(guān)系。王艷君等[19]觀察普通針刺手法、平補平瀉手法針刺健康人左側(cè)曲池穴后,同側(cè)商陽穴和對側(cè)少商穴在針刺前后不同時間點的溫度變化,進而說明不同針刺手法對穴位皮膚溫度的影響,發(fā)現(xiàn)穴位皮膚溫度的變化不僅具有循經(jīng)性,而且具有全身性的特點。

    本研究中,即刻-5 min時間段,三陰交組、關(guān)元組左側(cè)三陰交穴區(qū),右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度變化下降,5-10 min時間段,三陰交組右側(cè)三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)體表溫度變化升高,20-30 min時間段,三陰交組右側(cè)三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)體表溫度升高,30-40 min時間段三陰交組右側(cè)血海穴區(qū)體表溫度變化升高。分析認為針刺即刻的降溫效應(yīng)是針刺作為一種痛刺激,引起了交感神經(jīng)反應(yīng),微小血管收縮,穴位局部血流量下降。繼之的升溫效應(yīng),認為隨著針刺時間的延長,針刺的治療效應(yīng)逐步顯現(xiàn),抑制了交感神經(jīng)的興奮性活動,使之興奮性降低,引起局部血管舒張,血流量增加,局部穴區(qū)及循經(jīng)穴區(qū)的溫度升高,說明針刺的后效應(yīng)具有一定的時間效應(yīng)。

    中醫(yī)經(jīng)絡(luò)理論認為針刺某一穴位可以引起遠離針刺部位的某些效應(yīng)[20]。呂證寶等[21]的臨床研究發(fā)現(xiàn)針刺得氣后在經(jīng)脈循行的路徑上有高溫帶的出現(xiàn)。故針刺的循經(jīng)性溫度變化被認為是得氣的一種表現(xiàn)。本研究中,三陰交組右側(cè)三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)在5-10 min時間段出現(xiàn)顯著的升溫現(xiàn)象,而關(guān)元組各穴位溫度變化無明顯差異。故將相同經(jīng)脈上2個穴位在同時間段的升溫效應(yīng)作為針刺循經(jīng)性的一種表現(xiàn),不僅為從動物實驗角度說明得氣提供了依據(jù),同時證實了遠端穴位較近端穴位更易誘發(fā)循經(jīng)性反應(yīng)。針刺后,穴區(qū)體表溫度在60 min內(nèi)的動態(tài)變化,反應(yīng)了針刺對穴區(qū)體表溫度的影響規(guī)律。

    經(jīng)穴特異性主要反映在兩個層面:一是經(jīng)絡(luò)與經(jīng)絡(luò)之間存在一定的特異性;二是同一經(jīng)絡(luò)上的每個腧穴具有各自的特性。劉俊嶺等[22]發(fā)現(xiàn)電針“三陰交”和“合谷”穴可興奮子宮平滑肌的電活動,三陰交穴作用更強,而電針“內(nèi)關(guān)”穴則抑制子宮肌的電活動。趙艷玲等[23]發(fā)現(xiàn)四白、地倉穴均對胃肌電有調(diào)整作用,而四白穴作用優(yōu)于地倉穴,提示同一經(jīng)脈上的不同穴位對相關(guān)臟腑的影響存在一定的差異性。本實驗中三陰交組三陰交穴區(qū)、血海穴區(qū)的體表溫度變化較關(guān)元組明顯,進一步說明了不同經(jīng)穴產(chǎn)生的效應(yīng)不同,從而證實了經(jīng)穴的特異性理論。

    綜上所述,針刺后穴區(qū)溫度具有循經(jīng)動態(tài)變化的特點,不同經(jīng)穴具有不同的變化規(guī)律,可用于進一步評價針刺特點。

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