高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度評(píng)定

荊淑芹++孫媛媛+++李景輝

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度評(píng)定方法，找出影響不確定度因素。 方法 根據(jù)檢驗(yàn)過(guò)程，建立數(shù)學(xué)模型，分析影響不確定度因素來(lái)源，通過(guò)不確定度的量化分析，得出擴(kuò)展不確定度。 結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)展不確定度為0.105 mg（k=2）。 結(jié)論 高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度主要由對(duì)照品稱量和測(cè)得色譜峰面積引入。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；含量測(cè)定；芍藥苷

[中圖分類號(hào)] R286 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）08（a）-0010-03

Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC

JING shu-qin SUN Yuan-yuan LI Jing-hui

Institute for Food and Drug Control of Benxi City in Liaoning Province，Benxi 117000，China

[Abstract] Objective To establish an HPLC method for the determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule，identify uncertainty factor. Methods According to its inspection process，a mathematical model was established to analyze the factors affecting the uncertainty source.The expanded uncertainty was gained by quantifying analysis. Results The expanded uncertainty of this experiment was 0.105 mg（k=2）. Conclusion Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC is mainly gained by weighing reference and measuring chromatographic peak area.

[Key words] High performance liquid chromatography；Content determination；Paeoniflorin

測(cè)量不確定度是“表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性，與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)”，是用來(lái)確定測(cè)量結(jié)果的可信程度。本文根據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》（JJF1059-1999）[1]，并參考《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》（JJF1135-2005）[2]、《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[3]，分析高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的檢驗(yàn)過(guò)程，對(duì)其不確定度影響因素進(jìn)行分析和評(píng)定[4]，找出不確定度主要來(lái)源，建立高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度評(píng)定方法。

1 材料與方法[5]

1.1 儀器與試劑

島津LC-2010AHT高效液相色譜儀，賽多利斯BT25S電子天平，梅特勒ML104電子天平，芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110736-201337），尪痹膠囊（某藥廠生產(chǎn)）。

1.2 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：C18；流動(dòng)相：甲醇-0.02 mol/L（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于4000。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品13.49、12.43 mg，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

1.4 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下本品研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加水約35 ml，超聲處理30 min，取出，放冷至室溫，加水至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

1.5 測(cè)定法[6]

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

1.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

10粒裝量5.5691 g，平均裝量0.5569 g；其他實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 對(duì)照品溶液實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表2 供試品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果

2 結(jié)果

2.4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（X）的計(jì)算

根據(jù)貝塞爾公式得

實(shí)驗(yàn)測(cè)得X=1.78 mg，標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（X）：u（X）=urel（X）×X=0.02375×1.78=0.042275 mg。

2.5 擴(kuò)展不確定度

取包含因子k=2[12]，含量測(cè)定結(jié)果的擴(kuò)展不確定度U（X）：U（X）=k·u（X）=2×0.042275=0.08455 mg，則尪痹膠囊中芍藥苷的含量結(jié)果表示為：X=（1.78±0.0846） mg，k=2。

3 討論

由表3中8個(gè)分量不確定度可見(jiàn)，對(duì)照品稱量、測(cè)得色譜峰面積引入的不確定度影響較大，而對(duì)照品純度、樣品稀釋過(guò)程引入的不確定度較小，這一結(jié)果符合本實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，因此提示今后在設(shè)計(jì)含量測(cè)定方法和在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，要注意取樣量多少、稀釋過(guò)程和步驟、平行樣測(cè)定以及儀器檢定與維護(hù)保養(yǎng)等，以提高檢測(cè)重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 國(guó)家技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF1059-1999測(cè)量不確定度測(cè)定與表示[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，1999：1-31.

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF1135-2005化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2005.

[3] 中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2002：12.

[4] 國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督委員會(huì).實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則[Z].2006.

[5] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn).YBZ01872008尪痹膠囊[S].

[6] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[7] 徐黎穎.高效液相色譜法測(cè)定甲硝唑片中甲硝唑含量的不確定度評(píng)定[J].首都醫(yī)藥，2013，（12）：60-61.

[8] 段景春，邊疆，王蘊(yùn)馨，等.高效液相色譜法測(cè)定飲料中咖啡因含量的不確定度分析[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2013，8（5）：256-258.

[9] 林玲，張琴，賴森亞，等.HPLC法測(cè)定菊花中綠原酸含量的不確定度分析[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，16（1）：68-69.

[10] 孫旌文.HPLC法測(cè)定醋酸地塞米松片含量的不確定度分析[J].藥物分析雜志，2010，30（9）：1777-1780.

[11] 國(guó)家技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF196-2006常用玻璃量器檢定規(guī)程[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006：6-9.

[12] 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).測(cè)量不確定度評(píng)估和報(bào)告通用要求[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006：4.

（收稿日期2014-06-13 本文編輯：李亞聰）

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度評(píng)定方法，找出影響不確定度因素。 方法 根據(jù)檢驗(yàn)過(guò)程，建立數(shù)學(xué)模型，分析影響不確定度因素來(lái)源，通過(guò)不確定度的量化分析，得出擴(kuò)展不確定度。 結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)展不確定度為0.105 mg（k=2）。 結(jié)論 高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度主要由對(duì)照品稱量和測(cè)得色譜峰面積引入。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；含量測(cè)定；芍藥苷

[中圖分類號(hào)] R286 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）08（a）-0010-03

Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC

JING shu-qin SUN Yuan-yuan LI Jing-hui

Institute for Food and Drug Control of Benxi City in Liaoning Province，Benxi 117000，China

[Abstract] Objective To establish an HPLC method for the determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule，identify uncertainty factor. Methods According to its inspection process，a mathematical model was established to analyze the factors affecting the uncertainty source.The expanded uncertainty was gained by quantifying analysis. Results The expanded uncertainty of this experiment was 0.105 mg（k=2）. Conclusion Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC is mainly gained by weighing reference and measuring chromatographic peak area.

[Key words] High performance liquid chromatography；Content determination；Paeoniflorin

測(cè)量不確定度是“表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性，與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)”，是用來(lái)確定測(cè)量結(jié)果的可信程度。本文根據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》（JJF1059-1999）[1]，并參考《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》（JJF1135-2005）[2]、《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[3]，分析高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的檢驗(yàn)過(guò)程，對(duì)其不確定度影響因素進(jìn)行分析和評(píng)定[4]，找出不確定度主要來(lái)源，建立高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度評(píng)定方法。

1 材料與方法[5]

1.1 儀器與試劑

島津LC-2010AHT高效液相色譜儀，賽多利斯BT25S電子天平，梅特勒ML104電子天平，芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110736-201337），尪痹膠囊（某藥廠生產(chǎn)）。

1.2 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：C18；流動(dòng)相：甲醇-0.02 mol/L（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于4000。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品13.49、12.43 mg，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

1.4 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下本品研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加水約35 ml，超聲處理30 min，取出，放冷至室溫，加水至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

1.5 測(cè)定法[6]

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

1.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

10粒裝量5.5691 g，平均裝量0.5569 g；其他實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 對(duì)照品溶液實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表2 供試品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果

2 結(jié)果

2.4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（X）的計(jì)算

根據(jù)貝塞爾公式得

實(shí)驗(yàn)測(cè)得X=1.78 mg，標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（X）：u（X）=urel（X）×X=0.02375×1.78=0.042275 mg。

2.5 擴(kuò)展不確定度

取包含因子k=2[12]，含量測(cè)定結(jié)果的擴(kuò)展不確定度U（X）：U（X）=k·u（X）=2×0.042275=0.08455 mg，則尪痹膠囊中芍藥苷的含量結(jié)果表示為：X=（1.78±0.0846） mg，k=2。

3 討論

由表3中8個(gè)分量不確定度可見(jiàn)，對(duì)照品稱量、測(cè)得色譜峰面積引入的不確定度影響較大，而對(duì)照品純度、樣品稀釋過(guò)程引入的不確定度較小，這一結(jié)果符合本實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，因此提示今后在設(shè)計(jì)含量測(cè)定方法和在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，要注意取樣量多少、稀釋過(guò)程和步驟、平行樣測(cè)定以及儀器檢定與維護(hù)保養(yǎng)等，以提高檢測(cè)重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 國(guó)家技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF1059-1999測(cè)量不確定度測(cè)定與表示[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，1999：1-31.

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF1135-2005化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2005.

[3] 中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2002：12.

[4] 國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督委員會(huì).實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則[Z].2006.

[5] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn).YBZ01872008尪痹膠囊[S].

[6] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[7] 徐黎穎.高效液相色譜法測(cè)定甲硝唑片中甲硝唑含量的不確定度評(píng)定[J].首都醫(yī)藥，2013，（12）：60-61.

[8] 段景春，邊疆，王蘊(yùn)馨，等.高效液相色譜法測(cè)定飲料中咖啡因含量的不確定度分析[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2013，8（5）：256-258.

[9] 林玲，張琴，賴森亞，等.HPLC法測(cè)定菊花中綠原酸含量的不確定度分析[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，16（1）：68-69.

[10] 孫旌文.HPLC法測(cè)定醋酸地塞米松片含量的不確定度分析[J].藥物分析雜志，2010，30（9）：1777-1780.

[11] 國(guó)家技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF196-2006常用玻璃量器檢定規(guī)程[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006：6-9.

[12] 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).測(cè)量不確定度評(píng)估和報(bào)告通用要求[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006：4.

（收稿日期2014-06-13 本文編輯：李亞聰）

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度評(píng)定方法，找出影響不確定度因素。 方法 根據(jù)檢驗(yàn)過(guò)程，建立數(shù)學(xué)模型，分析影響不確定度因素來(lái)源，通過(guò)不確定度的量化分析，得出擴(kuò)展不確定度。 結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)展不確定度為0.105 mg（k=2）。 結(jié)論 高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度主要由對(duì)照品稱量和測(cè)得色譜峰面積引入。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；含量測(cè)定；芍藥苷

[中圖分類號(hào)] R286 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）08（a）-0010-03

Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC

JING shu-qin SUN Yuan-yuan LI Jing-hui

Institute for Food and Drug Control of Benxi City in Liaoning Province，Benxi 117000，China

[Abstract] Objective To establish an HPLC method for the determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule，identify uncertainty factor. Methods According to its inspection process，a mathematical model was established to analyze the factors affecting the uncertainty source.The expanded uncertainty was gained by quantifying analysis. Results The expanded uncertainty of this experiment was 0.105 mg（k=2）. Conclusion Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC is mainly gained by weighing reference and measuring chromatographic peak area.

[Key words] High performance liquid chromatography；Content determination；Paeoniflorin

測(cè)量不確定度是“表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性，與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)”，是用來(lái)確定測(cè)量結(jié)果的可信程度。本文根據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》（JJF1059-1999）[1]，并參考《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》（JJF1135-2005）[2]、《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[3]，分析高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的檢驗(yàn)過(guò)程，對(duì)其不確定度影響因素進(jìn)行分析和評(píng)定[4]，找出不確定度主要來(lái)源，建立高效液相色譜法測(cè)定尪痹膠囊中芍藥苷含量的不確定度評(píng)定方法。

1 材料與方法[5]

1.1 儀器與試劑

島津LC-2010AHT高效液相色譜儀，賽多利斯BT25S電子天平，梅特勒ML104電子天平，芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110736-201337），尪痹膠囊（某藥廠生產(chǎn)）。

1.2 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：C18；流動(dòng)相：甲醇-0.02 mol/L（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于4000。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品13.49、12.43 mg，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

1.4 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下本品研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加水約35 ml，超聲處理30 min，取出，放冷至室溫，加水至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

1.5 測(cè)定法[6]

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

1.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

10粒裝量5.5691 g，平均裝量0.5569 g；其他實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 對(duì)照品溶液實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

表2 供試品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果

2 結(jié)果

2.4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（X）的計(jì)算

根據(jù)貝塞爾公式得

實(shí)驗(yàn)測(cè)得X=1.78 mg，標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（X）：u（X）=urel（X）×X=0.02375×1.78=0.042275 mg。

2.5 擴(kuò)展不確定度

取包含因子k=2[12]，含量測(cè)定結(jié)果的擴(kuò)展不確定度U（X）：U（X）=k·u（X）=2×0.042275=0.08455 mg，則尪痹膠囊中芍藥苷的含量結(jié)果表示為：X=（1.78±0.0846） mg，k=2。

3 討論

由表3中8個(gè)分量不確定度可見(jiàn)，對(duì)照品稱量、測(cè)得色譜峰面積引入的不確定度影響較大，而對(duì)照品純度、樣品稀釋過(guò)程引入的不確定度較小，這一結(jié)果符合本實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，因此提示今后在設(shè)計(jì)含量測(cè)定方法和在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，要注意取樣量多少、稀釋過(guò)程和步驟、平行樣測(cè)定以及儀器檢定與維護(hù)保養(yǎng)等，以提高檢測(cè)重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 國(guó)家技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF1059-1999測(cè)量不確定度測(cè)定與表示[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，1999：1-31.

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJF1135-2005化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2005.

[3] 中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2002：12.

[4] 國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督委員會(huì).實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則[Z].2006.

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（收稿日期2014-06-13 本文編輯：李亞聰）