熒光光譜法測(cè)定奮乃靜

王 虹 王 軍 唐佩佩

奮乃靜（Perphenazine）為吩噻嗪類的哌嗪衍生物，廣泛用于精神分裂癥或其他精神病性障礙、以及嘔吐、嚴(yán)重焦慮等癥狀。在急性中毒案件中，常涉及到對(duì)奮乃靜的快速檢驗(yàn)。目前測(cè)定奮乃靜的常用方法主要有高效液相色譜法①周建玉、唐素芳：《HPLC法測(cè)定奮乃靜及奮乃靜片有關(guān)物質(zhì)方法的建立》，《中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè)》2010年第7期。、紫外-可見(jiàn)分光光度法②國(guó)家藥典委員會(huì)：《中華人民共和國(guó)藥典(二部)》，化學(xué)工業(yè)出版社2005年版，第328-329頁(yè)。、流動(dòng)注射分光光度法③呂輝雄等：《奮乃靜的流動(dòng)注射分光光度分析》，《分析實(shí)驗(yàn)室》2003年第3期。、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法④弋景峰等：《奮乃靜藥物的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法的建立》，《西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)》2006年第5期。、荷移分光光度法⑤于麗麗、盛喆、李華侃：《基于氯冉酸的荷移反應(yīng)分光光度法測(cè)定奮乃靜》，《理化檢驗(yàn)》2011年第47期。、毛細(xì)管電泳-安培檢測(cè)法⑥張?zhí)m、何聿、倪碧蓮等：《乃靜和氟奮乃靜的毛細(xì)管電泳柱端噴壁式安培檢測(cè)》，《分析化學(xué)》2005年第3期。、熒光分光光度法⑦李美芳、邱穎、李玉蘭：《熒光分光光度法測(cè)定奮乃靜片的含量》，《中國(guó)藥業(yè)》2008年第23期。等。本文探討了鹽酸-乙醇溶液作為提取劑的提取工藝、優(yōu)化了熒光光譜法測(cè)定奮乃靜的試驗(yàn)條件，提高了分析靈敏度、降低了檢出限，可用于藥物奮乃靜片劑的痕量檢測(cè)。

一、試驗(yàn)部分

（一）儀器與試劑

Cary Eclipse型熒光分光光度計(jì)；JL-120型超聲波清洗器；HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋。

奮乃靜對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；

奮乃靜片劑：上海朝暉藥業(yè)有限公司（產(chǎn)品批號(hào)1206F07）、江蘇黃河藥業(yè)股份有限公司（產(chǎn)品批號(hào) 20050818）；

鹽酸為優(yōu)級(jí)純，其余試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為去離子水。

鹽酸-乙醇溶液：取95%乙醇500mL，加鹽酸10mL，加去離子水至1000mL，搖勻，即得鹽酸-乙醇溶液。

奮乃靜對(duì)照品儲(chǔ)備溶液：稱取奮乃靜對(duì)照品0.0084g，置于50mL小燒杯，加10mL鹽酸-乙醇溶液溶解，移入100mL棕色容量瓶中，用鹽酸-乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，配成84mg?L-1對(duì)照品儲(chǔ)備液，于4℃冰箱放置，備用。

（二）儀器工作條件

激發(fā)波長(zhǎng)（λex）為270nm,發(fā)射波長(zhǎng)（λem）為375nm；激發(fā)和發(fā)射狹縫均為10nm；激發(fā)單色器濾光片波長(zhǎng)范圍為250-295nm，發(fā)射單色器濾光片波長(zhǎng)范圍為250-395nm；PMT為600V，測(cè)試溫度為室溫。

（三）試驗(yàn)方法

取奮乃靜片10粒（標(biāo)示量2mg／粒），除去糖衣，研細(xì)，混勻。準(zhǔn)確稱取試樣細(xì)粉適量于小燒杯中，加鹽酸-乙醇溶液10mL，超聲溶解，過(guò)濾，將濾渣用20mL鹽酸-乙醇溶液分4次提取，所得濾液置水浴鍋上揮至剩余 15mL，冷卻，轉(zhuǎn)移到 50mL的棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。使用時(shí)移取2.5mL于50mL的棕色容量瓶中用水定容，搖勻，得到樣品溶液，同時(shí)做空白試驗(yàn)。

二、結(jié)果與討論

（一）波長(zhǎng)的選擇

取奮乃靜質(zhì)量濃度為25.2mg?L-1的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)行激發(fā)光譜和發(fā)射光譜掃描。試驗(yàn)結(jié)果表明：最大激發(fā)波長(zhǎng)（λex）為270nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)（λem）為375nm。

為提高檢測(cè)靈敏度，優(yōu)化了儀器測(cè)試條件，將儀器激發(fā)單色器濾光片波長(zhǎng)范圍設(shè)為250-295nm，發(fā)射單色器濾光片波長(zhǎng)范圍設(shè)為250-395nm。

（二）溶劑的選擇

奮乃靜在水中幾乎不溶，在乙醇、稀鹽酸中溶解，試驗(yàn)比較了鹽酸-乙醇溶液、0.1mol/L鹽酸溶液、95%乙醇溶液作為溶劑的提取效果。結(jié)果表明：選擇鹽酸-乙醇溶液作為溶劑提取效果最好，95%乙醇溶液次之，試驗(yàn)選用鹽酸-乙醇溶液作為溶劑。

（三）提取方式的選擇

試驗(yàn)考察了采取水浴處理試樣和不采用水浴處理試樣兩種提取方式對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，分別稱取批號(hào)1206F07和20050818奮乃靜試樣適量（相當(dāng)于2mg奮乃靜），按試驗(yàn)方法測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，采用水浴揮發(fā)乙醇所測(cè)樣品的測(cè)定結(jié)果明顯高于不揮發(fā)乙醇的測(cè)定結(jié)果，可能因?yàn)樵谧贤饧ぐl(fā)波長(zhǎng)下，一定濃度的乙醇對(duì)奮乃靜產(chǎn)生熒光猝滅影響①②劉瑩等：《253.7nm光輻照乙醇溶液熒光光譜分析》，《南京理工大學(xué)學(xué)報(bào)》2003年第6期。，為減少乙醇溶劑對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，試驗(yàn)選擇水浴處理試樣。

（表1兩種提取方式的比較(n=5)）

（四）干擾試驗(yàn)

按試驗(yàn)方法，對(duì)0.10mg·L-1奮乃靜對(duì)照品溶液進(jìn)行干擾試驗(yàn)，當(dāng)相對(duì)誤差小于±5.0%時(shí)，下列離子和物質(zhì)不干擾測(cè)定：100倍的Pb2+、Ni2+、Ca2+、Cd2+、Ba2+，200倍的Al3+、Fe3+、Zn2+、Mg2+、Na+、K+，400倍的蔗糖、可溶性淀粉。

（五）工作曲線和檢出限

分別移取0.00mL，0.05mL，0.10mL，0.25mL，0.50mL，1.00mL，2.00mL奮乃靜對(duì)照品貯備液置于50mL容量瓶中，加水定容到刻度，搖勻，得到奮乃靜對(duì)照品系列溶液，在選定的儀器工作條件下，對(duì)奮乃靜對(duì)照品溶液系列進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，奮乃靜質(zhì)量濃度在0.084～3.36 mg·L-1范圍內(nèi)與熒光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，其線性回歸方程為y=209.69x+11.27，相關(guān)系數(shù)為0.9989。對(duì)空白溶液平行測(cè)定11次，檢出限3s/k（其中s為11次空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差，k為線性回歸方程的斜率）計(jì)算為0.6μg·L-1。

（六）穩(wěn)定性試驗(yàn)

按試驗(yàn)方法，分別對(duì)奮乃靜對(duì)照品溶液、奮乃靜試樣溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：在室溫下避光放置24小時(shí)以上，其熒光強(qiáng)度相對(duì)穩(wěn)定，說(shuō)明該體系具有較好的穩(wěn)定性。

（七）2.7方法的精密度

稱取批號(hào)20050818奮乃靜試樣5份，按試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得試樣中奮乃靜含量的平均值為1.40mg?L-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.9%。

（八）樣品分析

分別稱取批號(hào)1206F07和20050818奮乃靜試樣適量（相當(dāng)于1mg奮乃靜），按試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

（表2樣品分析結(jié)果（n=5））

試驗(yàn)結(jié)果表明：本方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢出限低、分析結(jié)果準(zhǔn)確，可用于奮乃靜的藥物檢測(cè)。