解酒護(hù)肝顆粒脂溶性成分提取工藝的優(yōu)化

鄭 飛，越 皓，戴雨霖，李 晶，劉淑瑩，2*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117;2.中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所，長(zhǎng)春 130022）

解酒護(hù)肝顆粒脂溶性成分提取工藝的優(yōu)化

鄭 飛1，越 皓1，戴雨霖1，李 晶1，劉淑瑩1，2*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117;2.中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所，長(zhǎng)春 130022）

目的 優(yōu)選解酒護(hù)肝顆粒中脂溶性成分的提取工藝。方法 采用正交設(shè)計(jì)法，以總皂苷含量為指標(biāo)，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、加醇量、提取時(shí)間及提取次數(shù)為考察因素，優(yōu)選解酒護(hù)肝顆粒中脂溶性成分的提取工藝。結(jié)果 脂溶性成分最佳提取工藝為加8倍量70%乙醇，提取2次，每次1 h。結(jié)論 確定了解酒護(hù)肝顆粒脂溶性成分的最佳提取工藝，簡(jiǎn)便易行，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

解酒護(hù)肝顆粒;總皂苷;提取工藝;正交試驗(yàn)

解酒護(hù)肝顆粒是由葛花、人參、靈芝等藥材配伍而成，具有疏肝利膽，解酒醒脾，輔助保護(hù)酒精性肝損傷的作用［1-3］。《本經(jīng)逢源》中記載，“葛花，能解酒毒，葛花解酲湯用之，必兼人參”［4-5］。為了更好的發(fā)揮療效，本試驗(yàn)以總皂苷的含量為考核指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法確定其脂溶性成分的最佳提取工藝，為工業(yè)化生產(chǎn)提供工藝參數(shù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

人參、葛花、靈芝（吉林省宏檢醫(yī)藥藥材有限公司，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)王淑敏教授鑒定為正品）;人參皂苷Re對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):110754-201324）;香草醛（上海海曲化工有限公司）;甲醇、乙醇、石油醚、高氯酸、冰醋酸均為分析純（北京化工廠）;JA5301N型電子精密天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 總皂苷的含量測(cè)定［6-7］

2.1.1 對(duì)照品溶液的配制 取人參皂苷Re對(duì)照品約0.010 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的配制 取干燥粉末約2.0 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流3 h，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，連同濾紙筒移入100 mL錐形瓶中，精密量取加入水飽和正丁醇50 mL，密塞，放置過(guò)夜，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液15 mL，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 顯色方法 取上述續(xù)濾液置磨口帶塞試管中，水浴揮干甲醇，加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2 mL，使殘?jiān)芙?，再加入高氯?.8 mL，充分振搖混勻后置60℃恒溫水浴上加熱10 min，立即用冰水浴冷卻10 min，加入冰醋酸5.0 mL，搖勻，以試劑作空白，于560 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。

2.1.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液 60，80，100，120，140 μL 置磨口帶塞試管中，按“2.1.3”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，以對(duì)照品含量（X）對(duì)吸光度（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=4.85X+0.004 6，r=0.999 6，結(jié)果表明總皂苷含量在含量為0.060 2～0.140 6 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 提取工藝的優(yōu)化［8-9］

2.2.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)的考察 分別按處方量稱取葛花、人參等藥材3分，每分50 g，分別加入8倍量體積分?jǐn)?shù)分別為50%，60%，70%，80%，90%的乙醇溶液提取2次，每次1 h，過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇，干燥至恒重。按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)得總皂苷的提取率分別為2.85，3.42，3.92，3.65，3.30 mg/g。綜合考慮大工業(yè)生產(chǎn)乙醇濃度不宜過(guò)高，故確定乙醇體積分?jǐn)?shù)為60% ～80%。

2.2.2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn) 以預(yù)試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，采用乙醇回流提取法，選擇乙醇濃度（A）、加醇量（B）、提取時(shí)間（C）、提取次數(shù)（D）為考察因素，采用L9（34）的正交設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)，以總皂苷含量為考察指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)，分別取9分處方量的所需乙醇提取的藥材，按因素水平表設(shè)計(jì)條件進(jìn)行乙醇回流提取，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.25～1.28（80℃）的稠膏。正交試驗(yàn)表及結(jié)果見(jiàn)表1。

方差分析結(jié)果表明，以總皂苷含量為考察指標(biāo)，影響提取工藝的因素作用順序?yàn)?乙醇濃度＞提取次數(shù)＞提取時(shí)間＞加醇量。乙醇濃度和提取次數(shù)的影響有顯著性差異，綜合考慮選用最常規(guī)的方案，最佳工藝為A2B1C1D2，即加8倍量的70%乙醇，提取2次，每次1.0 h。

表1 正交實(shí)驗(yàn)表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 取處方量比例葛花、人參藥材200 g，共3分，按正交試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)選最佳提取工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果總皂苷平均提取量為8.47 mg/g，RSD為1.83%，表明該工藝穩(wěn)定可行。

3 小結(jié)

本課題前期工作中，通過(guò)快速分離液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀（RRLC-Q-TOF）對(duì)葛花化學(xué)成分及與人參配伍作用進(jìn)行研究，結(jié)果顯示人參可以促進(jìn)葛花中的異黃酮類成分溶出，同時(shí)人參中的人參皂苷含量比人參單煎液中的含量有所增加;可能是由于分子之間結(jié)構(gòu)導(dǎo)致溶出度增大。通過(guò)對(duì)葛花與人參配伍和其機(jī)制的研究，為開(kāi)發(fā)安全有效的解酒護(hù)肝產(chǎn)品提供基礎(chǔ)理論支撐。

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Optimization of extraction technique of liposoluble constituent in Hangover Liver Granule

ZHENG Fei1，YUE Hao1，DAI Yulin1，LI Jin1，LIU Shuying1，2*
（1.Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China;2.Changchun Institute of Applied Chemistry，Chinese Academy of Sciences，Changchun 130022，China）

ObjectiveOptimized the extraction techniques of liposoluble constituent in Hangover Liver Granule.MethodsTaking the content of total saponins as index，with extraction time，extraction times，ethanol concentration and amount as factors，extraction technology of total saponins was optimized by orthogonal test.ResultsOptimal extraction technology of liposoluble constituent was as following:extracted 2 times with 8 times the amount of 70%ethanol，1h per time.ConclusionTo determine optimized extract technology of liposoluble constituent in Hangover Liver Granule，suitable for large-scale industrial production.

Hangover Liver Granule;total saponins;extraction technology;orthogonal test

R285.5

A

2095－6258（2014）05－0813－02

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.019

國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2011BAI03B00）。

鄭 飛（1987－），女，碩士，研究實(shí)習(xí)員。研究方向:新劑型新技術(shù)研究與新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)。

劉淑瑩，女，博士，研究員，電子信箱:syliu@ciac.jl.cn。

2014－04－16）