食管鱗癌中PTK6的表達(dá)水平及其臨床預(yù)后價(jià)值

陳友芳 曹 訓(xùn) 黃志良 溫浙盛

本次研究通過檢測(cè)食管鱗癌及癌旁正常組織中PTK6蛋白表達(dá)水平，進(jìn)而探索PTK6對(duì)食管鱗癌患者的臨床預(yù)后價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集中山大學(xué)腫瘤防治中心2000年10月至2007年4月期間行食管癌根治術(shù)、臨床病理學(xué)及隨訪資料完整的210例食管鱗癌患者資料及標(biāo)本，患者年齡32～80歲，中位年齡為57歲?；颊吲R床病理學(xué)資料詳見表1。將210例鱗癌組織標(biāo)本及160例癌旁正常食管黏膜標(biāo)本制備石蠟切片用于免疫組化檢測(cè)。

1.2 主要試劑

濃縮型鼠抗人PTK6多克隆抗體(AP7715a，San Diego，USA)，購自美國Abgent公司，工作液濃度1∶400。采用EnVisionTM免疫組織化學(xué)方法。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定

免疫組化結(jié)果判定由2位主治醫(yī)師以上級(jí)別的病理醫(yī)師在不知道臨床病理資料的情況下對(duì)標(biāo)本染色進(jìn)行評(píng)估，不一致處協(xié)商或請(qǐng)第三方閱片，最終決定免疫組化結(jié)果。染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)免疫反應(yīng)積分[1]。

1.4 隨訪方法

所有患者隨訪時(shí)間截至2012年1月31日，中位隨訪時(shí)間56個(gè)月(3～134個(gè)月)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0 for Windows統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。配對(duì)t檢驗(yàn)完成對(duì)比食管鱗癌與癌旁組織中PTK6 的IRS評(píng)分。χ2檢驗(yàn)分析PTK6表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。生存曲線以Kaplan-Meier方法繪制，其間差異以Log-rank檢驗(yàn)計(jì)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 PTK6蛋白在食管組織中的表達(dá)

食管鱗癌及癌旁正常食管組織中PTK6均在細(xì)胞質(zhì)著色，PTK6水平表達(dá)分別為49.5%，98.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

2.2 PTK6蛋白水平與食管癌臨床病理特征的關(guān)系

食管鱗癌組織中PTK6蛋白表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤位置、T分期、N分期及TNM分期無明顯相關(guān)(P>0.05)，而與病理分級(jí)關(guān)系密切，見表1。

表1 210例食管鱗癌患者PTK6表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征之間關(guān)系(例，%)

2.3 PTK6表達(dá)水平及臨床病理學(xué)因素與預(yù)后的關(guān)系

截止到最后隨訪時(shí)間，腫瘤相關(guān)性死亡事件發(fā)生119例，中位無瘤生存時(shí)間與總生存時(shí)間分別為54個(gè)月和62個(gè)月。1年、3年、5年及10年生存率分別為84%，57%，49% 和1%。PTK6蛋白表達(dá)水平與無瘤生存及總生存時(shí)間密切相關(guān)，見表2，圖1。

根據(jù)患者臨床病理因素分組進(jìn)行亞組分析，在T1-2分期(P<0.001，P=0.001)，N1-3(P=0.036,P=0.028), TNM Ⅱ期(P=0.001，P=0.019)，高分化病理分級(jí)G1、G2(P=0.018，P=0.036)，中分化病理分級(jí)(P=0.009，P=0.039)中PTK6表達(dá)水平對(duì)預(yù)后均有影響，見表2。

表2 PTK6 對(duì)食管鱗癌患者的預(yù)后價(jià)值

注：1為Log-rank 檢驗(yàn)；NR為not reached(未到達(dá))

圖1 210例食管鱗癌患者總體生存曲線

2.4 食管鱗癌患者預(yù)后相關(guān)因素分析

對(duì)PTK6表達(dá)水平及臨床病理各因素行單因素分析，PTK6表達(dá)水平及N分期是影響食管鱗癌患者生存的危險(xiǎn)因素，見表3。將單因素回歸模型中得出的與預(yù)后相關(guān)的因素帶入多因素回歸模型中，PTK6蛋白表達(dá)水平(DFS：P=0.002；OS：P=0.006)及N分期(DFS：P<0.001，OS：P<0.001)均為食管鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素，見表4。

表3 食管鱗癌患者預(yù)后相關(guān)因素的單因素分析

注：1為年齡≤57vs年齡>57；2為男性vs女性；3為上段 vs中段vs下段；4為經(jīng)左胸vs經(jīng)胸/腹/頸聯(lián)合切口；5為高分化鱗癌vs中分化鱗癌vs低分化鱗癌；6為T1vs T2vs T3vs T4；7為N0vs N1-3；8為PTK6高表達(dá)vs PTK6低表達(dá)。HR為hazard ratio，風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)；CI為confidence interval，95%置信區(qū)。

表4 食管鱗癌患者預(yù)后相關(guān)因素多因素分析

注：1為N0vs N1-3；2為PTK6高表達(dá)vs PTK6低表達(dá)。

3 討論

盡管外科技術(shù)和綜合治療方法的不斷發(fā)展，但食管鱗癌患者預(yù)后仍然沒有顯著改善，且相同TNM分期的不同患者，預(yù)后也迥然不同，此現(xiàn)象提示，TNM分期對(duì)于預(yù)測(cè)患者預(yù)后的價(jià)值并不充分。因此，食管鱗癌相關(guān)基因的探索，對(duì)于闡明腫瘤的發(fā)病機(jī)制，探索腫瘤的早期診斷，預(yù)測(cè)患者預(yù)后以制定最佳個(gè)體化治療方案有重要意義。

酪氨酸蛋白激酶非受體型6號(hào)蛋白(protein tyrosine kinase 6，PTK6)是種細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的非受體酪氨酸激酶，參與調(diào)解細(xì)胞增殖、分化和凋亡，其表達(dá)失衡與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。有文獻(xiàn)顯示在不同細(xì)胞內(nèi)PTK6表現(xiàn)的功能完全不同[2-3]。一方面，PTK6激活EGFR、 p38 MARK and HGF/Met等信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤的形成、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[4-6]，該功能與乳腺癌、卵巢癌及淋巴瘤的形成密切相關(guān)[7-9]；另一方面，PTK6通過促進(jìn)Akt磷酸化從而抑制細(xì)胞的增殖，最終誘導(dǎo)消化系統(tǒng)上皮細(xì)胞凋亡[2-3，10-12]。

本研究首次系統(tǒng)性地評(píng)估食管鱗癌及癌旁正常食管黏膜組織中PTK6蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)食管鱗癌PTK6表達(dá)水平明顯低于與癌旁正常食管黏膜組織，結(jié)果與口腔鱗狀細(xì)胞癌相近[13]，PTK6表達(dá)可能對(duì)鱗癌的形成起到一種抑制作用。由于PTK6結(jié)構(gòu)上與Src家族激酶相似，僅缺乏十四烷?；?，這種特殊的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)使PTK6既可定位在細(xì)胞核也可定位在細(xì)胞質(zhì)[14]，其中，在乳腺癌中定位于胞核，而在大腸癌中卻定位在胞質(zhì)，但在前列腺癌及口腔鱗癌中，PTK6在胞核及胞質(zhì)中均有染色[13，15]。在食管鱗癌和癌旁正常食管組織PTK6蛋白均定位于胞質(zhì)。PTK6表達(dá)水平與患者食管鱗癌病理分級(jí)密切相關(guān)。Haegebarth等發(fā)現(xiàn)PTK6通過Akt及Wnt通路激活抑制腫瘤形成及分化信號(hào)通路[2]，Ma等發(fā)現(xiàn)下調(diào)PTK6表達(dá)水平后能夠影響Akt/GSK3β/betactenin信號(hào)通路而最終導(dǎo)致食管黏膜細(xì)胞的癌變、分化甚至轉(zhuǎn)移[16]。但并未發(fā)現(xiàn)PTK6表達(dá)水平與食管鱗癌患者的年齡、性別、腫瘤位置、T分期、N分期及TNM分期相關(guān)。

本研究顯示，腫瘤中PTK6表達(dá)水平及N分期均為食管鱗癌獨(dú)立預(yù)后因素。食管鱗癌中PTK6表達(dá)水平高者預(yù)后(包括總生存時(shí)間OS，無瘤生存時(shí)間DFS)較PTK6表達(dá)低者好。Ma等發(fā)現(xiàn)下調(diào)PTK6表達(dá)，能增加Akt 和GSK3β磷酸化以減少胞核內(nèi)β-catenin，最終使食管鱗癌細(xì)胞增殖加速[16]，并證實(shí)PTK6是食管鱗癌的抑癌基因，此結(jié)論也支持本次研究結(jié)果。

通過本次研究，PTK6作為預(yù)測(cè)食管鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素，有利于結(jié)合臨床、病理信息，篩選出輔助治療的受益人群，有利于對(duì)患者進(jìn)行最優(yōu)個(gè)體化治療方案的選擇，最終提高患者遠(yuǎn)期生存。

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