高效液相色譜法測定主產(chǎn)區(qū)天麻中天麻素含量

李慧慧，劉守金，方成武，徐國兵，陳慶輝

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012；2.安徽省食品藥品檢驗研究院，安徽 合肥 230051；3.安徽省天和中藥材開發(fā)有限公司，安徽 合肥 231131)

高效液相色譜法測定主產(chǎn)區(qū)天麻中天麻素含量

李慧慧1，劉守金1，方成武1，徐國兵2，陳慶輝3

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012；2.安徽省食品藥品檢驗研究院，安徽 合肥 230051；3.安徽省天和中藥材開發(fā)有限公司，安徽 合肥 231131)

目的測定全國5個主要產(chǎn)地天麻中天麻素含量，比較不同產(chǎn)地天麻質(zhì)量。方法采用高效液相色譜法測定天麻中天麻素含量，采用Wondasil C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，檢測波長220 nm，柱溫25 ℃，流動相：乙腈-0.05%硫酸水溶液(3∶97)，流速0.6 mL/min。結(jié)果天麻素在0.20～3.20 μg內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為100.87%，RSD=2.89%(n=5)。結(jié)論5個主要產(chǎn)地天麻中天麻素含量有所差異。

天麻；天麻素；高效液相色譜法；含量測定

天麻為蘭科天麻屬植物天麻GastrodiaelataBlume.的干燥塊莖，臨床主要用于神經(jīng)衰弱及其綜合征、血管神經(jīng)性頭痛、經(jīng)前期緊張等病證[1]，主產(chǎn)于四川、云南、貴州、陜西、甘肅、安徽、湖北等省。天麻素為天麻主要的活性物質(zhì)之一，2010年版《中華人民共和國藥典》采用高效液相色譜法測定天麻中天麻素的含量。有關(guān)天麻素的含量測定方法，已有相關(guān)文獻(xiàn)報道[2-3]。本研究采用高效液相色譜法[4]比較貴州、安徽、四川、甘肅、云南出產(chǎn)的天麻中天麻素含量，為進(jìn)一步評價天麻質(zhì)量提供依據(jù)。

1 實(shí)驗儀器與試劑

LC-15C高效液相色譜儀、SPD-15C紫外檢測器、Wondasil C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)：島津企業(yè)管理(中國)有限公司；天麻素對照品：成都曼斯特生物科技有限公司，批號 MUST-11122815，純度大于99.5%；乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑為分析純；天麻藥材樣品采于甘肅康縣，四川江油，云南昭通，貴州大方，安徽金寨、霍山、岳西等地。原植物經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)中藥與資源教研室劉守金教授鑒定為蘭科植物天麻GastrodiaelataBlume.的塊莖。

2 實(shí)驗方法

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取天麻素對照品適量，加流動相制成50 μg/mL的溶液，即得。

2.2 樣品溶液的制備[5-6]取天麻粉末(50目)2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL稱質(zhì)量，50 ℃超聲40 min。放冷，稱質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，精密量取濾液10 mL，濃縮至近干，殘渣加流動相混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中。定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.3 色譜條件 島津Wondasil C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；檢測波長：220 nm；柱溫25 ℃；流動相乙腈-0.05%磷酸水溶液(3∶97)；流速0.6 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。

2.4 色譜系統(tǒng)適用性實(shí)驗 在上述色譜條件下，主色譜峰與相鄰色譜峰之間分離度大于1.5，理論塔板數(shù)大于5 000，對照品溶液連續(xù)進(jìn)5針，RSD值小于2%。

2.5 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定。色譜圖見圖1。天麻素含量測定結(jié)果見表1。

圖1 對照品(A)和樣品(B)高效液相色譜圖

表1 天麻藥材中天麻素含量

3 討論

3.1 不同品種天麻中天麻素含量 天麻在種內(nèi)產(chǎn)生了許多變異，據(jù)花的顏色、花莖的顏色、塊莖的形狀、塊莖含水量不同將天麻劃分為4個類型(原變型)，即紅天麻、烏天麻、綠天麻、黃天麻。在生產(chǎn)中栽培的主要是紅天麻和烏天麻[7]。結(jié)果顯示，不同品種天麻素平均含量有所差異：紅天麻為0.42%，烏天麻為0.47%，綠天麻為0.36%，黃天麻為0.45%。進(jìn)一步對同一品種不同產(chǎn)地(炮制方法同為煮透心法)進(jìn)行比較，紅天麻平均含量，貴州為0.29%，甘肅為0.44%，安徽為0.49%；烏天麻平均含量，云南為0.32%，四川為0.57%。結(jié)果顯示同一品種不同產(chǎn)地的天麻含量有所差異，但還未對同一產(chǎn)地不同品種天麻素含量進(jìn)行比較，因此天麻素含量與天麻品種是否有一定的相關(guān)性，有待于進(jìn)一步實(shí)驗研究。

3.2 不同產(chǎn)地天麻中天麻素含量 對云南、貴州、四川、安徽和甘肅5大產(chǎn)區(qū)不同產(chǎn)地30個樣品進(jìn)行含量測定，結(jié)果表明天麻素含量最高可達(dá)1.27%(安徽岳西)，最低為0.09%(貴州大方)，平均含量為0.45%，多數(shù)樣品的含量集中在0.25%～0.65%之間，高于2010版《中華人民共和國藥典》[8]標(biāo)準(zhǔn)(0.20%)。結(jié)果表明不同產(chǎn)地天麻素含量存在差異，即使同一產(chǎn)地，天麻素的含量也有差別，但未能顯示出一定的規(guī)律性。

3.3 不同加工方法對天麻素含量的影響 既往研究[9]提示水蒸優(yōu)于水煮，而本研究結(jié)果顯示同一樣品經(jīng)水蒸加工后的含量與水煮加工的不成一定關(guān)系。如表2所示：1號、2號、5號樣品兩種加工方法天麻素含量相似；11號、16號樣品天麻素含量水煮法大于水蒸法；而15、29號樣品天麻素含量則水蒸法大于水煮法。在實(shí)地調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，目前天麻產(chǎn)區(qū)加工并不是采用傳統(tǒng)方法——蒸透心，而是將天麻煮至透心，再用硫磺熏，曬干。實(shí)驗結(jié)果驗證水煮法同樣適用，因而在產(chǎn)地加工中使用煮法是可行的，并且較蒸法簡便。

蒸透或煮透后的天麻再用硫磺熏具有外形整潔美觀、色澤透明、防蟲防霉、易貯存的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗結(jié)果表明，安徽產(chǎn)天麻硫磺熏蒸的平均含量低于無硫熏蒸者，可見天麻加工過程中使用硫磺熏蒸對天麻素含量有一定影響。且謝云龍等[10]報道，硫磺熏后天麻的pH值明顯降低，硫熏后天麻中二氧化硫殘留量是否超過400 mg/kg的限量標(biāo)準(zhǔn)，有待進(jìn)一步研究確認(rèn)。

[1]吳剛,秦民堅,康繼川，等.不同產(chǎn)地天麻質(zhì)量評價[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2008,27(1):40-43.

[2]肖薇,尹珉,莊志宏,等.不同產(chǎn)地天麻中天麻素含量的測定[J].北京中醫(yī)藥,2011,30(12):945-946.

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[6]余蘭,陳華,婁營,等.超聲提取天麻中天麻素優(yōu)化工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(6):2556-2558.

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[10]謝云龍,雪鵬.硫磺熏對10味中藥pH值的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2001,11(7):95-98.

DeterminationofGastrodininGastrodiaelatafromMainProductionAreasofChinabyHigh-PerformanceLiquidChromatography

LIHui-hui1,LIUShou-jin1,FANGCheng-wu1,XUGuo-bing2,CHENQing-hui3

(1.SchoolofPharmacy,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China; 2.AnhuiInstituteforFoodandDrugControl,AnhuiHefei230051,China; 3.AnhuiTienhoHerbalSourceCompany,AnhuiHefei231131,China)

ObjectiveTo determine the content of gastrodin inGastrodiaeletafrom five main production areas of China and to compare the quality ofGastrodiaelataof different origins.MethodsHigh-performance liquid chromatography was performed on a Wondasil C18column (4.6 mm × 150 mm, 5 μm) with a mobile phase of acetonitrile-0.05% sulfuric acid (3∶97) at a detection wavelength of 220 nm, a column temperature of 25 ℃, and a flow rate of 0.6 mL/min.ResultsThe content of gastrodin showed a good linear relationship with the peak area within 0.20-3.20 μg. The average recovery rate of gastrodin was 100.87%, and the relative standard deviation was 2.89% (n=5).ConclusionThe content of gastrodin varies betweenGastrodiaelatafrom the five main production areas of China.

Gastrodiaelata; gastrodin; high-performance liquid chromatography; determination

李慧慧(1989-)，女，碩士研究生

劉守金，shjinliu@sina.com

R284

A

10.3969/j.issn.2095-7246.2014.06.023

2014-04-29)