魔芋精粉對CCl4所致小鼠急性肝損傷的保護作用

1.中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所中藥制劑研究中心，北京 100700；2.四川魔力科技研發(fā)中心，四川 綿陽 621000

魔芋精粉對CCl4所致小鼠急性肝損傷的保護作用

杜茂波1鞏橋2

1.中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所中藥制劑研究中心，北京 100700；2.四川魔力科技研發(fā)中心，四川 綿陽 621000

目的本實驗旨在研究魔芋精粉對CCl4所致小鼠急性肝損傷的保護作用。方法：采用CCl4造成小鼠肝損傷模型，觀察魔芋精粉對小鼠血液中ALT、AST活性及血清中白蛋白和球蛋白比值(A/G)的影響；同時觀察魔芋精粉對小鼠肝臟中SOD、MDA含量的影響。結(jié)果：魔芋精粉能降低肝損傷小鼠血清中的ALT、AST含量；升高A/G 的比值；同時，魔芋精粉能夠升高肝組織中 SOD的含量，降低MDA的含量。結(jié)論：魔芋精粉具有一定程度的保護肝臟的作用。

魔芋精粉；CCl4；肝損傷；保護作用

魔芋隸屬于天南星科，魔芋屬，屬多年生草本植物，主要分布在我國長江流域及我國南部地區(qū)。魔芋精粉是一種天然的膳食纖維的食材，現(xiàn)代研究表明，它具有增強免疫力，抗腫瘤，抗氧化，清除自由基，抑菌的藥理作用，并證明其中發(fā)揮主要作用的成分是葡甘露聚糖(konjac glucomannan，KGM)。葡甘露聚糖主要是由D-葡萄糖和D-甘露糖按1∶1.6(mol/mol)的比例連接而成的高分子多糖[1]。本研究以主含葡甘露聚糖的魔芋精粉為研究對象，探討魔芋精粉對肝臟的保護作用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 藥物 魔芋精粉購自四川魔力科技有限公司，生產(chǎn)批號：130824-B。葡甘露聚糖含量為84%，實驗劑量按葡甘露聚糖計。

1.1.2 試驗動物 SPF級昆明種小鼠(22±2g)60只，雄性，中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供。

1.1.3 試驗試劑 ALT、AST、白蛋白、總蛋白、SOD、MAD試劑盒，購于南京建成生物工程研究所

1.1.4 儀器 AUY200型分析天平，日本SHIMADZU；XHF-DY型高速分散器，寧波新芝生物科技股份有限公司；1-14K型高速離心機，德國Sigma公司；xmtd-204式恒溫水浴，金壇富華儀器有限公司；722型分光光度計，上海青浦蘆溪儀表有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及指標(biāo)測定 60只昆明種小鼠隨機分為5組，即空白對照組、CCl4肝損傷模型組、魔芋精粉低、中、高劑量組，每組12只。魔芋精粉低、中、高劑量組分別按100mg/(kg·d)、200mg/(kg·d)、400mg/(kg·d)灌胃給藥, 空白組和模型組給予相同體積的生理鹽水，連續(xù)灌胃6天，第6天給藥3h后，除空白組以外其余各組均灌胃50% CCl4油溶劑(0.1ml/10g)，禁食，自由飲水。24h后采血，分離血清，測定ALT、AST及A/G。然后脫脊椎處死小鼠，浸泡酒精1min，打開腹腔，取出肝臟，取0.5g肝臟加9倍冰生理鹽水，組織勻漿，制成10%的肝臟勻漿液，低溫離心機3 500r/min，離心15分鐘，收集上清液，測定SOD及MDA的含量。

1.2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行方差分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 魔芋精粉對小鼠血清AST、ALT和 A/G含量的影響 由表1能夠看出，與空白組比較，經(jīng)CCl4造模型后小鼠血清中的ALT和AST的含量明顯提高，而A/G的值明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明造模成功。與模型組比較，魔芋精粉高、中、低劑量組ALT和AST含量明顯降低，而A/G的比值顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 魔芋精粉對血清AST、ALT和 A/G含量的影響

注：與模型組比較，*P<0.05;**P<0.01

2.2 魔芋精粉對小鼠肝臟組織勻漿SOD及MDA含量的影響 由表2可見，與空白組比較，模型組小鼠肝臟組織勻漿中MDA 含量顯著提高，而SOD的含量明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明造模成功，小鼠的肝臟已有明顯受損。與模型組比較，魔芋精粉高、中、低劑量組MDA含量均明顯降低，而SOD含量明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 魔芋精粉對小鼠肝臟組織勻漿中SOD,MDA含量的影響

注：與模型組比較，*P<0.05;**P<0.012.3 小鼠肝臟組織病理學(xué)觀察 在顯微鏡下，空白對照組小鼠肝臟呈紅棕色，質(zhì)地軟而有彈性；肝小葉結(jié)構(gòu)完整，細胞整齊排列，分界清楚可見。模型組小鼠肝組織表面顯黃褐色，質(zhì)地鈍厚，結(jié)構(gòu)被破壞，細胞腫大，有不同程度的壞死，說明造模型成功。魔芋精粉高、中、低劑量組的肝組織鏡下顏色紅潤，結(jié)構(gòu)正常，炎性細胞減少，且有一定的量效依賴性，保肝作用明顯。

3 討論

肝損傷是肝臟疾病病變的結(jié)果，主要包括嗜酸性變化、炎癥反應(yīng)、細胞壞死、肝纖維化、肝硬化等[2]。本研究采用 CC14制造肝損傷模型，CC14在經(jīng)過動物體細胞色素 P450 氧化酶代謝后，能夠產(chǎn)生氯甲基以及三氯甲基自由基，并與肝細胞共價結(jié)合，使活性氧自由基釋放，導(dǎo)致肝細胞損傷，壞死，在此過程中，ALT和AST會滲透到血液中，在一定程度上可反映肝損傷的程度。而血液中球蛋白含量上升，白蛋白下降也是肝損傷的表現(xiàn)。魔芋精粉能在很大程度上使受損的肝細胞得以恢復(fù)，表現(xiàn)為血清中ALT和AST的含量降低，A/G的值升高。

機體不斷的新陳代謝，產(chǎn)生自由基，自由基可以維持人體正常生理功能。在正常的生理調(diào)節(jié)狀態(tài)下，機體產(chǎn)生自由基的同時又清除體內(nèi)自由基，使生物體保持在動態(tài)平衡。機體清除自由基的酶包括SOD、CAT和GSH-Px等,這些酶的含量直接影響自由基的含量和活性。超氧化物歧化酶(SOD)可高效去除體內(nèi)超氧陰離子自由基，維護機體穩(wěn)定平衡的生理機能[3]；丙二醛(MDA)是一種小分子產(chǎn)物，來自于機體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化，在體內(nèi)MDA含量反映了身體損傷程度和脂質(zhì)過氧化程度[4-5]。我們的結(jié)果表明：魔芋精粉可明顯提高肝組織中SOD含量，降低MDA含量。

綜上所述，魔芋精粉能通過提高SOD的含量，清除活性氧自由基，使MDA的含量降低，同時降低血清中ALT、AST的含量，升高A/G的比值，從而對CC14所致的肝損傷小鼠起到保護的作用。

[1]劉永剛，陳厚昌，蔣毅萍.丹參酮ⅡA 對四氯化碳致大鼠纖維化的試驗研究[J].中藥材，2002，25(1):31- 33.

[2]李夏，段冷昕，王楠婭, 等. 鹿茸多肽對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護作用[J].中國藥學(xué)雜志，2007，42(24):1864-1867.

[3]LIL J, LU L J, CHEN L,etal.EffectofextractofPilose antler polypeptides on crushed sciatic nerve regeneration[J].Liaoning J TraditChinMed(遼寧中醫(yī)雜志), 2004, 31(4): 343-344.

[4]楊新波，黃正明.CCl4,D-Gal, AnTT致小鼠肝臟損傷模型的實驗研究[J].華人消化雜志，1998，6(1):19-20.

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杜茂波(1985-)，男，漢族，碩士學(xué)歷，研究方向：中藥制劑及經(jīng)皮給藥新劑型研究.

R285.5

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1007-8517(2014)11-0023-02

2014.04.18)