聯(lián)合檢測母血 MMP－9、IL－6預(yù)測胎膜早破、亞臨床絨毛膜羊膜炎的臨床意義

程秋蓉，向 敏，陳民敬，毛 英，張鈺華 (.吉首大學第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南 吉首 6000;.吉首大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，湖南 吉首 6000;.吉首大學第一附屬醫(yī)院病理科，湖南 吉首 6000;.吉首大學醫(yī)學院，湖南 吉首6000)

胎膜早破(PROM)為產(chǎn)科常見并發(fā)癥，其發(fā)生的主要原因與炎性反應(yīng)因素有關(guān)，如細菌、真菌、支原體、衣原體等，破膜后，增加上行感染機會，導(dǎo)致絨毛膜羊膜炎、早產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)感染、肺炎、胎兒窘迫、窒息、敗血癥等。感染與胎膜早破的發(fā)生發(fā)展互為因果，伴發(fā)亞臨床絨毛膜羊膜炎時大多數(shù)無臨床癥狀，在亞臨床感染期間不易被發(fā)現(xiàn)，難以在早期診斷，既往利用羊水細菌培養(yǎng)及產(chǎn)后胎盤胎膜病理檢查診斷宮內(nèi)感染，無法在早期診斷，對于指導(dǎo)臨床處理意義不大。因此，臨床需要尋找用于識別胎膜早破孕婦亞臨床感染的檢測指標。筆者通過檢測胎膜早破孕婦母血、胎膜組織中MMP－9、IL－6的表達水平，探討其與胎膜早破、亞臨床絨毛膜羊膜炎的相關(guān)性，探索預(yù)測和診斷亞臨床絨毛膜羊膜炎的可行性的生物學指標，以選擇適宜時機終止妊娠，對于改善母兒預(yù)后具有重要意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2010年6月～2012年12月就診于我科的胎膜早破孕婦42例為試驗組，其中早產(chǎn)胎膜早破27例，足月胎膜早破15例，年齡20～41歲，距分娩時間4 h～33 d，孕周26周～40+5周，除有高血壓、心臟病、糖尿病、腎炎、肝炎、腫瘤等病史及因雙胎、頭盆不稱、胎位異常、機械性損傷等原因引起的胎膜早破，所有試驗組產(chǎn)后胎膜組織均送病理檢測，分為絨毛膜羊膜炎組和非絨毛膜羊膜炎組。隨機選取同期住院，正常妊娠無胎膜早破的未臨產(chǎn)且行剖宮產(chǎn)分娩的婦女30例為對照組，平均妊娠時間(38.5±1.2)孕周，平均年齡(25.8±3.2)歲，胎膜病理檢查排除絨毛膜羊膜炎。所有病例取血前均未應(yīng)用抗生素及保胎藥物，均無感染征象。

1.2 研究方法：所選病例入院后取肘靜脈血5 ml，室溫靜置1 h后離心取血清，－20℃冰箱保存待測。采用雙抗體夾心ABC－酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)方法檢測血清MMP－9、IL－6。產(chǎn)后取胎膜破口邊緣處胎膜2 cm×2 cm，10%甲醛固定，石蠟包埋切片厚4 μm，HE染色后光鏡檢查。采用免疫組化法(SP法)檢測胎膜組織MMP－9、IL－6的表達，試劑盒均為武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品。檢測時均嚴格按試劑盒說明操作。

1.3 統(tǒng)計學處理：所有研究數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，采用t檢驗，方差分析及多元逐步回歸分析。

2 結(jié)果

2．1 胎膜早破孕婦血清IL－6、MMP－9水平變化結(jié)果表明，胎膜早破孕婦血清IL－6、MMP－9水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.005)，見表1。同時，經(jīng)多元逐步回歸分析，母血中IL－6、MMP－9是反映絨毛膜羊膜炎的主要相關(guān)因素。胎膜早破孕婦中絨毛膜羊膜炎組的血清IL－6、MMP－9水平明顯高于非絨毛膜羊膜炎組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.005)，見表 2。

表1 胎膜早破孕婦(試驗組)與對照組母血IL－6、MMP－9水平變化(x ± s，pg/ml)

表2 母血IL－6、MMP－9水平變化與絨毛膜羊膜炎的關(guān)系(x ± s，pg/ml)

2.2 根據(jù)ROC曲線分析，母體血清MMP－9濃度為82.97 pg/ml時，預(yù)測絨毛膜羊膜炎的敏感性81%。特異性50%，IL－6濃度為46.38 pg/ml時，預(yù)測絨毛膜羊膜炎的敏感性85%，特異性為73%。

2.3 所有研究對象均取胎膜破口邊緣處胎膜檢測MMP－9、IL－6的表達，MMP－9、IL－6均陽性著色于羊膜上皮細胞的胞漿內(nèi)(見圖1和圖2)，試驗組MMP－9、IL－6的陽性表達率均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表3。胎膜早破組42例胎膜病檢，發(fā)現(xiàn)組織學絨毛膜羊膜炎26例，鏡下見胎膜均有不同程度的水腫、變性，有數(shù)量不等的中性粒細胞浸潤，個別出現(xiàn)壞死。絨毛膜羊膜炎組MMP－9、IL－6陽性率明顯高于非絨毛膜羊膜炎組，有顯著差異(P＜0.005)，見表4。

圖1 MMP－9的陽性表達

圖2 IL－6的陽性表達

表3 胎膜早破孕婦(試驗組)與對照組胎膜中IL－6、MMP－9表達結(jié)果比較(例)

表4 IL－6、MMP－9在絨毛膜羊膜炎胎膜中的表達水平(例)

3 討論

3.1 IL－6與胎膜早破、絨毛膜羊膜炎：細胞因子是一組多肽蛋白，主要因感染或免疫反應(yīng)而激活免疫細胞和間質(zhì)細胞合成。羊膜腔感染時，細菌及其代謝產(chǎn)物刺激絨毛膜蛻膜細胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，釋放IL－6、IL－8及腫瘤壞死因子等多種細胞因子，可在局部和全身發(fā)揮抗感染作用。L－6為炎性細胞因子，對中性粒細胞和免疫細胞具有活化作用，可調(diào)節(jié)白細胞與內(nèi)皮細胞的黏附過程，客觀地反映宮內(nèi)感染狀況。當妊娠合并絨毛膜羊膜炎時，機體對細菌及其代謝產(chǎn)物產(chǎn)生應(yīng)答，分泌IL－6直接釋放入血、臍血、羊水中。羊水中的IL－6在宮內(nèi)激活中性粒細胞和彈性蛋白酶，破壞絨毛膜－蛻膜細胞外基質(zhì)接觸面導(dǎo)致胎膜早破。Murtha等發(fā)現(xiàn)胎膜早破孕婦血清IL－6水平升高可預(yù)測無癥狀的宮內(nèi)感染［1］，對于診斷胎膜早破合并宮內(nèi)感染的敏感性為81%，特異性為99%，陽性預(yù)測值為96%，陰性預(yù)測值為95%。陸李霓等的研究顯示母血IL－6檢測早產(chǎn)亞臨床感染具有優(yōu)越性［2］。本研究中胎膜早破組42例，病檢發(fā)現(xiàn)絨毛膜羊膜炎26例，發(fā)生率為61.9%(26/42)，表明宮內(nèi)感染與胎膜早破密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)胎膜早破孕婦血清IL－6水平及其在胎膜上的表達均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.005)。胎膜早破孕婦中絨毛膜羊膜炎組的血清IL－6水平明顯高于非絨毛膜羊膜炎組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.005)。胎膜早破孕婦母血IL－6預(yù)測絨毛膜羊膜炎的敏感度為85%，特異度為73%。

3.2 MMP－9與胎膜早破、絨毛膜羊膜炎：人的胎膜是由羊膜和絨毛膜組成的。胎膜的結(jié)構(gòu)和膠原的含量決定胎膜的彈性和張力。胎膜的成分主要為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型膠原及其他成分如氨基酸聚糖、纖維結(jié)合素、彈性蛋白等，而Ⅳ型膠原是羊膜基底膜的主要成分。大量研究顯示基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metallop roteinases，MMPs)是一族能降解細胞外基質(zhì)(Extracellularmatrix，ECM)中所有蛋白成分的內(nèi)源性酶，對細胞外基質(zhì)中相應(yīng)成分的降解，可調(diào)控細胞外基質(zhì)含量和胎膜結(jié)構(gòu)，引起胎膜組織結(jié)構(gòu)的弱化，而導(dǎo)致胎膜早破的發(fā)生［3］。MMP－9是一種鋅依賴的蛋白水解酶，以無活性的酶原形式分泌?？稍谌梭w蛻膜、絨毛膜和羊膜產(chǎn)生。MMP－9屬于Ⅳ型膠原酶，主要降解Ⅳ型膠原、Ⅴ型膠原和彈性硬蛋白。膠原是細胞外基質(zhì)的主要成分，其分解依賴于膠原酶的作用。MMP－9促進包括Ⅳ型膠原在內(nèi)的胞外基質(zhì)的快速崩解引起細胞發(fā)生形態(tài)學變化和引發(fā)凋亡［4］。因此，在PROM中MMP－9起著重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)胎膜早破孕婦血清MMP－9水平及其在胎膜上的表達均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.005)。胎膜早破孕婦中絨毛膜羊膜炎組的血清MMP－9水平其在胎膜上的表達明顯高于非絨毛膜羊膜炎組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.005)。胎膜早破孕婦母血MMP－9預(yù)測絨毛膜羊膜炎的敏感度為81%，特異度為50%。

3.3 IL－6、MMP－9聯(lián)合檢測更有利于早期診斷和預(yù)測胎膜早破、合并亞臨床絨毛膜羊膜炎：MMP－9和IL－6在PROM的發(fā)病機制中起到相互關(guān)聯(lián)作用。感染或炎性反應(yīng)過程中產(chǎn)生的細胞因子如IL－1，IL－6，IL－8等都能誘導(dǎo)MMPs的合成和活化［5－6］，從而引發(fā)胎膜早破。IL－6的升高使得胎膜增厚、水腫，間接影響MMP－9的表達及活性;反之，MMP－9水平的顯著升高，通過胎膜結(jié)構(gòu)的變化，誘發(fā)IL－6直接進入胎盤。兩者相輔相成，促使胎膜早破的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測母血IL－6、MMP－9預(yù)測絨毛膜羊膜炎的敏感度、特異度分別提高為93%，91%，更有利于臨床早期診斷和預(yù)測胎膜早破、合并亞臨床絨毛膜羊膜炎。

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