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    利用分子標(biāo)記輔助選擇對(duì)龍?zhí)仄諦米質(zhì)和白葉枯病抗性的改良

    2014-09-02 22:48:25韓義勝符策強(qiáng)朱紅林等
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年7期
    關(guān)鍵詞:改良

    韓義勝 符策強(qiáng) 朱紅林等

    摘要:以改良天豐B為低直鏈淀粉含量合成基因和白葉枯病抗性基因供體,以龍?zhí)仄諦為受體,利用分子標(biāo)記輔助選擇和常規(guī)不育系選育方法,對(duì)保持系龍?zhí)仄?B的直鏈淀粉和白葉枯病抗性進(jìn)行了改良。 改良后的龍?zhí)仄諦保留了原有的大部分性狀,并具有直鏈淀粉含量低、抗白葉枯病、株高變矮的新特性。

    關(guān)鍵詞:不育系;直鏈淀粉;白葉枯?。环肿訕?biāo)記輔助選擇;基因聚合;改良

    中圖分類(lèi)號(hào): S336;S511.03 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2014)07-0069-03

    收稿日期:2014-03-10

    基金項(xiàng)目:國(guó)家水稻產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(編號(hào):CARS-01-73)。

    作者簡(jiǎn)介:韓義勝(1974—),男,湖北宣恩人,碩士,助理研究員,從事水稻種質(zhì)創(chuàng)新研究。E-mail:hanys135@163.com。

    通信作者:徐靖,女,碩士,助理研究員,主要從事植物生物技術(shù)研究。E-mail:xujing6732807@126.com。雜交水稻在我國(guó)水稻產(chǎn)業(yè)中占據(jù)重要的地位,其產(chǎn)量?jī)?yōu)勢(shì)已被廣泛認(rèn)可;但是在產(chǎn)量繼續(xù)大幅度提高受到空間制約的情況下,水稻種植的效益問(wèn)題逐漸引起人們的重視,高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、多抗的復(fù)合型水稻品種取代單一產(chǎn)量?jī)?yōu)勢(shì)的品種已成為必然趨勢(shì)。在沒(méi)有重大技術(shù)突破的情況下,現(xiàn)代雜交水稻育種很大程度上就是親本不斷聚合優(yōu)異性狀的改良型育種。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,水稻中許多優(yōu)異基因已被定位,這為利用分子標(biāo)記輔助選擇(marker-assisted selection,MAS)技術(shù)對(duì)作物遺傳改良奠定了基礎(chǔ)。近年來(lái),MAS技術(shù)在基因轉(zhuǎn)移或聚合上的應(yīng)用獲得了很大成功。如Huang等運(yùn)用MAS技術(shù)分別將水稻白葉枯病抗性基因Xa-4、xa-5、xa-13和Xa-21聚合到同一水稻品種中,獲得高抗白葉枯病的品種[1];陳紅旗等利用MAS技術(shù)將3個(gè)稻瘟病抗性基因聚合到金23B中,獲得高抗稻瘟病的品種[2]。利用MAS技術(shù)將多個(gè)抗病基因聚合以培育高抗病害材料的方法,具有經(jīng)濟(jì)高效的特點(diǎn),但是將優(yōu)良品質(zhì)基因和抗性基因聚合到同一品種中的研究卻相對(duì)較少。

    龍?zhí)仄諥(簡(jiǎn)稱特A)是福建省漳州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所選育的野敗型秈型三系不育系,具有配合力強(qiáng)、適應(yīng)性廣、易于繁殖種的優(yōu)點(diǎn)。特優(yōu)系列雜交稻組合在我國(guó)許多省份曾大面積應(yīng)用,僅1998 年全國(guó)推廣面積就達(dá)76.71 萬(wàn)hm2,占雜交水稻總面積的512%[3],但特A也有直鏈淀粉含量高、不抗白葉枯病等缺點(diǎn),應(yīng)用受到很大限制。因此,改良特A很有必要,對(duì)不育系的改良實(shí)質(zhì)上就是對(duì)保持系的改良。本研究以改良天豐B(簡(jiǎn)稱天豐B)為目標(biāo)基因供體,龍?zhí)仄諦(簡(jiǎn)稱特B)為受體,利用雜交、MAS和常規(guī)不育系選育方法,對(duì)特B的米質(zhì)(主要是直鏈淀粉含量)和白葉枯病抗性進(jìn)行了改良。改良后的特B保留了原有的穗大、粒多特性,同時(shí)具有直鏈淀粉含量低、抗白葉枯病、株高變矮的新特性,在風(fēng)雨天氣頻繁、白葉枯病多發(fā)的海南地區(qū),新特B具有廣泛的應(yīng)用前景。

    1材料與方法

    1.1試驗(yàn)材料

    受體親本為特B,直鏈淀粉含量為26.5%,不抗白葉枯病。天豐B為低直鏈淀粉合成基因供體,直鏈淀粉含量為15.7%;攜帶廣譜性白葉枯病抗性基因Xa23,抗白葉枯病。供體由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所提供,試驗(yàn)各世代材料均種植于海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院永發(fā)基地,常規(guī)水肥和蟲(chóng)害管理;接種用白葉枯Ⅳ病菌由海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所提供。

    1.2目標(biāo)基因連鎖標(biāo)記

    以與控制直鏈淀粉合成的Wx基因連鎖的SSR標(biāo)記RM190[4]和與Xa23基因連鎖的標(biāo)記RM206[5]為MAS標(biāo)記。標(biāo)記由北京諾賽基因組研究中心有限公司合成,其他主要生物試劑由上海博彩生物科技有限公司合成。

    1.3DNA提取和PCR擴(kuò)增

    DNA提取參照桑賢春等的方法[6]。20μL PCR反應(yīng)總體系為:2 μL正、反引物(5 μmol/L);0.3 μL dNTP(10 mmol/L);0.2 μL Taq酶(5 U/μL);2 μL 10×PCR buffer[200 mmol KCl;200 mmol/L Tris-HCl,pH值8.3;100 mmol/L (NH4)2SO4;15 mmol/L MgCl2];2 μL DNA模板;11.5 μL ddH2O。PCR反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性45 s,55 ℃復(fù)性45 s,72 ℃延伸1 min,35次循環(huán);72 ℃延伸 7 min。反應(yīng)完成后設(shè)15 ℃保護(hù)溫度。采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè),銀染按照施勇烽等的方法[7]進(jìn)行。

    1.4培育新特B的方法

    以特B為母本、天豐B為父本進(jìn)行雜交,特B為輪回親本?;亟粫r(shí),利用MAS技術(shù)并結(jié)合農(nóng)藝性狀表現(xiàn),選取RM190和RM206標(biāo)記雜合條帶的單株連續(xù)回交3代,至BC3F1時(shí)自交,在BC3F2群體中,選取2個(gè)標(biāo)記都為純合條帶的單株,以特A為母本,連續(xù)測(cè)保、加代。在回交轉(zhuǎn)育過(guò)程中,以保持不育性和理想株型為篩選條件,選擇株型緊湊、劍葉直立、株高較特B稍矮的單株為測(cè)保單株。最后通過(guò)對(duì)BC3F6各單株進(jìn)行直鏈淀粉含量測(cè)定,以直鏈淀粉含量在15%~17%的單株為入選單株(圖1)。

    1.5白葉枯病抗性和直鏈淀粉含量的測(cè)定

    白葉枯病抗性鑒定采用人工剪葉接種法[8];稻米直鏈淀粉測(cè)定參照GB/T 15683—2008《大米直鏈淀粉含量的測(cè)定》進(jìn)行。

    2結(jié)果與分析

    2.1標(biāo)記分析與選擇

    RM190和RM206在供、受體親本間(P1和P2)的多態(tài)性良好,能精確區(qū)分雜合和純合基因型,適宜MAS育種。2個(gè)標(biāo)記在BC3F2群體均出現(xiàn)3種帶型(圖2)。回交時(shí),每次都選2個(gè)標(biāo)記均為雜合帶型的單株回交,至BC3F1,然后自交。在BC3F2群體中,首先用RM190檢測(cè),將帶型為3的單株挑出,然后用RM206檢測(cè),再次將帶型為3的單株挑出,此時(shí)挑出的單株已經(jīng)聚合低直鏈淀粉合成基因和Xa23基因,且處于純合狀態(tài)。從658個(gè)BC3F2單株中選擇25個(gè)農(nóng)藝性狀較好的單株用于回交轉(zhuǎn)育和加代。通過(guò)連續(xù)6次轉(zhuǎn)育、加代,并對(duì)轉(zhuǎn)育材料進(jìn)行米質(zhì)檢測(cè)、白葉枯病抗性鑒定和農(nóng)藝性狀優(yōu)選,最終獲得了2個(gè)抗白葉枯病,株型與原特B相似但株高略矮、具有不同低直鏈淀粉的特B改良系,分別編號(hào)為D1、D2。

    2.2白葉枯病抗性鑒定

    采用海南白葉枯主要生理小種Ⅳ病菌接種2個(gè)特B改良系,進(jìn)行白葉枯病抗性鑒定,在分蘗結(jié)束回水期接種,20 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn),2個(gè)特B改良系病斑長(zhǎng)度≤1.2 cm的株數(shù)占總株數(shù)的90%,全部表現(xiàn)為高抗,與供體天豐B抗性相似,明顯強(qiáng)于原來(lái)的特B(表1)。

    3結(jié)論與討論

    3.1稻米品質(zhì)的改良

    稻米品質(zhì)內(nèi)涵豐富,但直鏈淀粉一直被認(rèn)為是稻米品質(zhì)的核心指標(biāo)之一,對(duì)蒸煮和食味品質(zhì)指標(biāo),如稻米的吸水性、脹性、黏性和軟硬度等有著決定性的影響[9]。低直鏈淀粉是優(yōu)質(zhì)稻米的重要指標(biāo)。稻米淀粉形成機(jī)理比較復(fù)雜,栽培條件和遺傳組成都對(duì)直鏈淀粉有較大影響[10-13],從遺傳上改良稻米直鏈淀粉仍是育種專家的主要研究方向。多數(shù)研究認(rèn)為,直鏈淀粉由1對(duì)或2對(duì)主效基因控制,并受微效多基因的修飾。目前公認(rèn)蠟質(zhì)基因Wx是控制直鏈淀粉的主效基因[14],因此尋找與Wx基因連鎖的分子標(biāo)記是MAS技術(shù)育種的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究利用RM190標(biāo)記進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇,對(duì)改良特B稻米直鏈淀粉檢測(cè)結(jié)果顯示,含量均在16%左右,與供體接近。由此可見(jiàn),在選育直鏈淀粉梯度的育種材料時(shí),可以用標(biāo)記RM190進(jìn)行分子輔助選擇。

    3.2水稻白葉枯病抗性改良

    截至 2013 年,已報(bào)道的白葉枯病抗性基因已有38 個(gè)[15],但不同抗性基因的抗病力和抗譜卻有較大差別。在目前已鑒定并定位的抗性基因中,Xa23具有抗性強(qiáng)、抗譜廣、抗性持久、表型顯性等特點(diǎn)[8]。本研究選擇已導(dǎo)入Xa23基因的天豐B作為改良特B白葉枯病抗性的供體。從獲得的2個(gè)改良系接種白葉枯Ⅳ病菌表現(xiàn)看,Xa23基因?qū)D习兹~枯病生理小種病菌具有較好的抗性。

    3.3利用MAS技術(shù)聚合多個(gè)基因的改良型育種

    對(duì)于表型鑒定困難或鑒定費(fèi)時(shí)費(fèi)力的一些性狀,MAS育種無(wú)需考慮環(huán)境條件對(duì)基因表達(dá)的影響,可以在苗期或低世代進(jìn)行選擇。但是,MAS技術(shù)的準(zhǔn)確性依賴于目標(biāo)基因與連鎖標(biāo)記的緊密程度,連鎖越緊密,選擇結(jié)果越可靠。因此開(kāi)發(fā)與目標(biāo)性狀(基因)緊密連鎖的分子標(biāo)記是進(jìn)行MAS技術(shù)育種的前提條件。隨著水稻高密度遺傳圖譜的構(gòu)建和水稻全基因組測(cè)序的完成,分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)越來(lái)越便捷高效,利用MAS技術(shù)進(jìn)行有利基因的聚合育種必將成為現(xiàn)代育種的重要途徑,特別是抗性育種[3-4],但是將抗性基因和優(yōu)良品質(zhì)基因通過(guò)MAS技術(shù)聚合在同一個(gè)品種中卻不多見(jiàn)??剐院?、質(zhì)優(yōu)、產(chǎn)量高應(yīng)是篩選水稻良種的必然要求。本試驗(yàn)將低直鏈淀粉合成基因和白葉枯病抗性基因聚合在特B中,檢測(cè)表明2個(gè)改良系的直鏈淀粉含量和白葉枯病抗性都達(dá)到了預(yù)期目標(biāo)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Huang N,Angeles E R,Domingo J,et al. Pyramiding of bacterial blight resistance genes in rice:marker-assisted selection using RFLP and PCR[J]. Theoretical and Applied Genetics,1997,95(3):313-320.

    [2]陳紅旗,陳宗祥,倪 深,等. 利用分子標(biāo)記技術(shù)聚合3個(gè)稻瘟病基因改良金23B的稻瘟病抗性[J]. 中國(guó)水稻科學(xué),2008,22(1):23-27.

    [3]高明亮,馮建成,王雪珍,等. 龍?zhí)仄諥的利用及其改良研究[J]. 雜交水稻,2001,16(2):5-6.

    [4]萬(wàn)映秀,鄧其明,王世全,等. 水稻W(wǎng)x基因的遺傳多態(tài)性及其與主要米質(zhì)指標(biāo)的相關(guān)性分析[J]. 中國(guó)水稻科學(xué),2006,20(6):603-609.

    [5]羅小芬,鄧椋爻,劉丕慶,等. 水稻抗白葉枯病Xa23基因的微衛(wèi)星標(biāo)記RM206在育種群體中的多態(tài)性分析[J]. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué),2007,26(2):120-124.

    [6]桑賢春,何光華,張毅,等. 水稻PCR擴(kuò)增模板的快速制備[J]. 遺傳,2003,25(6):705-707.

    [7]施勇烽,應(yīng)杰政,王磊,等. 鑒定水稻品種的微衛(wèi)星標(biāo)記篩選[J]. 中國(guó)水稻科學(xué),2005,19(3):195-201.

    [8]章琦,趙炳宇,趙開(kāi)軍,等. 普通野生稻的抗水稻白葉枯病(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)新基因Xa-23(t)的鑒定和分子標(biāo)記定位[J]. 作物學(xué)報(bào),2000,26(5):536-542.

    [9]夏明元,李進(jìn)波,張建華,等. 利用分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)選育具有中等直鏈淀粉含量的早稻品種[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2004(2):183-186.

    [10]馬均,明東風(fēng),馬文波,等. 不同施氮時(shí)期對(duì)水稻淀粉積累及淀粉合成相關(guān)酶類(lèi)活性變化的研究[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,38(2):290-296.

    [11]于新,趙慶勇,趙春芳,等. 攜帶Wx-mq基因的不同類(lèi)型水稻新品種(系)直鏈淀粉含量分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,28(6):1218-1222.

    [12]石英堯,石揚(yáng)娟,張志轉(zhuǎn),等. 旱作對(duì)稻米直鏈淀粉含量的影響研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,34(17):4253-4254.

    [13]錢(qián)永德,鄭桂萍,李小蕾,等. 氮鎂耦合對(duì)粳稻龍粳20稻米外觀品質(zhì)和加工品質(zhì)的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(7):40-44.

    [14]蔡秀玲,劉巧泉,湯述翥,等. 用于篩選直鏈淀粉含量為中等的秈稻品種的分子標(biāo)記[J]. 植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào),2002,28(2):137-144.

    [15]國(guó)家水稻數(shù)據(jù)中心. 基因數(shù)據(jù)分類(lèi)檢索[EB/OL]. (2013-07-15)[2013-09-04]. http://www.ricedata.cn/gene/.

    2.2白葉枯病抗性鑒定

    采用海南白葉枯主要生理小種Ⅳ病菌接種2個(gè)特B改良系,進(jìn)行白葉枯病抗性鑒定,在分蘗結(jié)束回水期接種,20 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn),2個(gè)特B改良系病斑長(zhǎng)度≤1.2 cm的株數(shù)占總株數(shù)的90%,全部表現(xiàn)為高抗,與供體天豐B抗性相似,明顯強(qiáng)于原來(lái)的特B(表1)。

    3結(jié)論與討論

    3.1稻米品質(zhì)的改良

    稻米品質(zhì)內(nèi)涵豐富,但直鏈淀粉一直被認(rèn)為是稻米品質(zhì)的核心指標(biāo)之一,對(duì)蒸煮和食味品質(zhì)指標(biāo),如稻米的吸水性、脹性、黏性和軟硬度等有著決定性的影響[9]。低直鏈淀粉是優(yōu)質(zhì)稻米的重要指標(biāo)。稻米淀粉形成機(jī)理比較復(fù)雜,栽培條件和遺傳組成都對(duì)直鏈淀粉有較大影響[10-13],從遺傳上改良稻米直鏈淀粉仍是育種專家的主要研究方向。多數(shù)研究認(rèn)為,直鏈淀粉由1對(duì)或2對(duì)主效基因控制,并受微效多基因的修飾。目前公認(rèn)蠟質(zhì)基因Wx是控制直鏈淀粉的主效基因[14],因此尋找與Wx基因連鎖的分子標(biāo)記是MAS技術(shù)育種的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究利用RM190標(biāo)記進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇,對(duì)改良特B稻米直鏈淀粉檢測(cè)結(jié)果顯示,含量均在16%左右,與供體接近。由此可見(jiàn),在選育直鏈淀粉梯度的育種材料時(shí),可以用標(biāo)記RM190進(jìn)行分子輔助選擇。

    3.2水稻白葉枯病抗性改良

    截至 2013 年,已報(bào)道的白葉枯病抗性基因已有38 個(gè)[15],但不同抗性基因的抗病力和抗譜卻有較大差別。在目前已鑒定并定位的抗性基因中,Xa23具有抗性強(qiáng)、抗譜廣、抗性持久、表型顯性等特點(diǎn)[8]。本研究選擇已導(dǎo)入Xa23基因的天豐B作為改良特B白葉枯病抗性的供體。從獲得的2個(gè)改良系接種白葉枯Ⅳ病菌表現(xiàn)看,Xa23基因?qū)D习兹~枯病生理小種病菌具有較好的抗性。

    3.3利用MAS技術(shù)聚合多個(gè)基因的改良型育種

    對(duì)于表型鑒定困難或鑒定費(fèi)時(shí)費(fèi)力的一些性狀,MAS育種無(wú)需考慮環(huán)境條件對(duì)基因表達(dá)的影響,可以在苗期或低世代進(jìn)行選擇。但是,MAS技術(shù)的準(zhǔn)確性依賴于目標(biāo)基因與連鎖標(biāo)記的緊密程度,連鎖越緊密,選擇結(jié)果越可靠。因此開(kāi)發(fā)與目標(biāo)性狀(基因)緊密連鎖的分子標(biāo)記是進(jìn)行MAS技術(shù)育種的前提條件。隨著水稻高密度遺傳圖譜的構(gòu)建和水稻全基因組測(cè)序的完成,分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)越來(lái)越便捷高效,利用MAS技術(shù)進(jìn)行有利基因的聚合育種必將成為現(xiàn)代育種的重要途徑,特別是抗性育種[3-4],但是將抗性基因和優(yōu)良品質(zhì)基因通過(guò)MAS技術(shù)聚合在同一個(gè)品種中卻不多見(jiàn)??剐院谩①|(zhì)優(yōu)、產(chǎn)量高應(yīng)是篩選水稻良種的必然要求。本試驗(yàn)將低直鏈淀粉合成基因和白葉枯病抗性基因聚合在特B中,檢測(cè)表明2個(gè)改良系的直鏈淀粉含量和白葉枯病抗性都達(dá)到了預(yù)期目標(biāo)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Huang N,Angeles E R,Domingo J,et al. Pyramiding of bacterial blight resistance genes in rice:marker-assisted selection using RFLP and PCR[J]. Theoretical and Applied Genetics,1997,95(3):313-320.

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    [3]高明亮,馮建成,王雪珍,等. 龍?zhí)仄諥的利用及其改良研究[J]. 雜交水稻,2001,16(2):5-6.

    [4]萬(wàn)映秀,鄧其明,王世全,等. 水稻W(wǎng)x基因的遺傳多態(tài)性及其與主要米質(zhì)指標(biāo)的相關(guān)性分析[J]. 中國(guó)水稻科學(xué),2006,20(6):603-609.

    [5]羅小芬,鄧椋爻,劉丕慶,等. 水稻抗白葉枯病Xa23基因的微衛(wèi)星標(biāo)記RM206在育種群體中的多態(tài)性分析[J]. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué),2007,26(2):120-124.

    [6]桑賢春,何光華,張毅,等. 水稻PCR擴(kuò)增模板的快速制備[J]. 遺傳,2003,25(6):705-707.

    [7]施勇烽,應(yīng)杰政,王磊,等. 鑒定水稻品種的微衛(wèi)星標(biāo)記篩選[J]. 中國(guó)水稻科學(xué),2005,19(3):195-201.

    [8]章琦,趙炳宇,趙開(kāi)軍,等. 普通野生稻的抗水稻白葉枯?。╔anthomonas oryzae pv. oryzae)新基因Xa-23(t)的鑒定和分子標(biāo)記定位[J]. 作物學(xué)報(bào),2000,26(5):536-542.

    [9]夏明元,李進(jìn)波,張建華,等. 利用分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)選育具有中等直鏈淀粉含量的早稻品種[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2004(2):183-186.

    [10]馬均,明東風(fēng),馬文波,等. 不同施氮時(shí)期對(duì)水稻淀粉積累及淀粉合成相關(guān)酶類(lèi)活性變化的研究[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,38(2):290-296.

    [11]于新,趙慶勇,趙春芳,等. 攜帶Wx-mq基因的不同類(lèi)型水稻新品種(系)直鏈淀粉含量分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,28(6):1218-1222.

    [12]石英堯,石揚(yáng)娟,張志轉(zhuǎn),等. 旱作對(duì)稻米直鏈淀粉含量的影響研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,34(17):4253-4254.

    [13]錢(qián)永德,鄭桂萍,李小蕾,等. 氮鎂耦合對(duì)粳稻龍粳20稻米外觀品質(zhì)和加工品質(zhì)的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(7):40-44.

    [14]蔡秀玲,劉巧泉,湯述翥,等. 用于篩選直鏈淀粉含量為中等的秈稻品種的分子標(biāo)記[J]. 植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào),2002,28(2):137-144.

    [15]國(guó)家水稻數(shù)據(jù)中心. 基因數(shù)據(jù)分類(lèi)檢索[EB/OL]. (2013-07-15)[2013-09-04]. http://www.ricedata.cn/gene/.

    2.2白葉枯病抗性鑒定

    采用海南白葉枯主要生理小種Ⅳ病菌接種2個(gè)特B改良系,進(jìn)行白葉枯病抗性鑒定,在分蘗結(jié)束回水期接種,20 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn),2個(gè)特B改良系病斑長(zhǎng)度≤1.2 cm的株數(shù)占總株數(shù)的90%,全部表現(xiàn)為高抗,與供體天豐B抗性相似,明顯強(qiáng)于原來(lái)的特B(表1)。

    3結(jié)論與討論

    3.1稻米品質(zhì)的改良

    稻米品質(zhì)內(nèi)涵豐富,但直鏈淀粉一直被認(rèn)為是稻米品質(zhì)的核心指標(biāo)之一,對(duì)蒸煮和食味品質(zhì)指標(biāo),如稻米的吸水性、脹性、黏性和軟硬度等有著決定性的影響[9]。低直鏈淀粉是優(yōu)質(zhì)稻米的重要指標(biāo)。稻米淀粉形成機(jī)理比較復(fù)雜,栽培條件和遺傳組成都對(duì)直鏈淀粉有較大影響[10-13],從遺傳上改良稻米直鏈淀粉仍是育種專家的主要研究方向。多數(shù)研究認(rèn)為,直鏈淀粉由1對(duì)或2對(duì)主效基因控制,并受微效多基因的修飾。目前公認(rèn)蠟質(zhì)基因Wx是控制直鏈淀粉的主效基因[14],因此尋找與Wx基因連鎖的分子標(biāo)記是MAS技術(shù)育種的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究利用RM190標(biāo)記進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇,對(duì)改良特B稻米直鏈淀粉檢測(cè)結(jié)果顯示,含量均在16%左右,與供體接近。由此可見(jiàn),在選育直鏈淀粉梯度的育種材料時(shí),可以用標(biāo)記RM190進(jìn)行分子輔助選擇。

    3.2水稻白葉枯病抗性改良

    截至 2013 年,已報(bào)道的白葉枯病抗性基因已有38 個(gè)[15],但不同抗性基因的抗病力和抗譜卻有較大差別。在目前已鑒定并定位的抗性基因中,Xa23具有抗性強(qiáng)、抗譜廣、抗性持久、表型顯性等特點(diǎn)[8]。本研究選擇已導(dǎo)入Xa23基因的天豐B作為改良特B白葉枯病抗性的供體。從獲得的2個(gè)改良系接種白葉枯Ⅳ病菌表現(xiàn)看,Xa23基因?qū)D习兹~枯病生理小種病菌具有較好的抗性。

    3.3利用MAS技術(shù)聚合多個(gè)基因的改良型育種

    對(duì)于表型鑒定困難或鑒定費(fèi)時(shí)費(fèi)力的一些性狀,MAS育種無(wú)需考慮環(huán)境條件對(duì)基因表達(dá)的影響,可以在苗期或低世代進(jìn)行選擇。但是,MAS技術(shù)的準(zhǔn)確性依賴于目標(biāo)基因與連鎖標(biāo)記的緊密程度,連鎖越緊密,選擇結(jié)果越可靠。因此開(kāi)發(fā)與目標(biāo)性狀(基因)緊密連鎖的分子標(biāo)記是進(jìn)行MAS技術(shù)育種的前提條件。隨著水稻高密度遺傳圖譜的構(gòu)建和水稻全基因組測(cè)序的完成,分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)越來(lái)越便捷高效,利用MAS技術(shù)進(jìn)行有利基因的聚合育種必將成為現(xiàn)代育種的重要途徑,特別是抗性育種[3-4],但是將抗性基因和優(yōu)良品質(zhì)基因通過(guò)MAS技術(shù)聚合在同一個(gè)品種中卻不多見(jiàn)??剐院?、質(zhì)優(yōu)、產(chǎn)量高應(yīng)是篩選水稻良種的必然要求。本試驗(yàn)將低直鏈淀粉合成基因和白葉枯病抗性基因聚合在特B中,檢測(cè)表明2個(gè)改良系的直鏈淀粉含量和白葉枯病抗性都達(dá)到了預(yù)期目標(biāo)。

    參考文獻(xiàn):

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