GC法測定鹽酸特比萘芬乳膏中防腐劑苯甲醇的含量

★ 鐘莉銀 劉紅寧 朱衛(wèi)豐 王森 沈冬冬

(1.江西中醫(yī)藥大學現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室 江西 南昌 330004；2.上海百安制藥有限公司 上海 201501)

鹽酸特比萘芬乳膏為皮膚科用藥類非處方藥，能高度選擇性地抑制真菌麥角鯊烯環(huán)氧化酶，阻斷真菌細胞膜形成過程中的麥角鯊烯環(huán)氧化反應(yīng)而干擾真菌固醇的早期生物合成，從而發(fā)揮抑制和殺滅真菌的作用。鹽酸特比萘芬乳膏用于治療手癬、足癬、體癬、股癬及花斑癬有效性和安全性已得到證實[1-3]，值得臨床推廣應(yīng)用。苯甲醇在鹽酸特比萘芬乳膏中為防腐劑，有麻痹作用，對眼部、皮膚和呼吸系統(tǒng)有強烈的刺激作用，吞食、吸入或皮膚接觸均對身體有害[4]，故控制苯甲醇含量對鹽酸特比萘芬乳膏的質(zhì)量至關(guān)重要。

目前苯甲醇的含量測定中國藥典采用氫氧化鈉滴定法，方法準確性不高，近年來對苯甲醇的檢測主要集中在注射劑和化妝品方面，檢測方法有高效液相色譜法和氣相色譜法。2009年中國國家標準化管理委員會發(fā)布了化妝品中防腐劑苯甲醇的氣相色譜法。本文采用氣相色譜法，以苯甲酸甲酯未內(nèi)標物，檢測鹽酸特比萘芬乳膏中苯甲醇的含量，方法簡便、準確，精密度高。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 GC112A氣相色譜儀，配有氫火焰離子化檢測器FID(上海精密科學儀器有限公司)；Sartorius BS124S 和BT25S 電子天平；KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 對照品苯甲醇(批號：20120309，純度99.85%)和苯甲酸甲酯(批號：WTN20111207，純度99.84%)均購自國藥集團化學試劑有限公司，氣相色譜純；無水乙醇，分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司；鹽酸特比萘芬乳膏(批號為121101，121102，121103)與不含苯甲醇的空白基質(zhì)均由上海百安制藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 內(nèi)標溶液 取苯甲酸甲酯500 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，配成5.0 mg/mL的內(nèi)標溶液。

2.1.2 苯甲醇標準儲備液及對照品溶液 取苯甲醇對照品500 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，配成5.0 mg/mL的標準儲備液。精密量取苯甲醇標準儲備液5.0 mL，置50 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液5.0 mL，加無水乙醇稀釋至刻度，即得濃度為0.5 mg/mL的苯甲醇對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液 取鹽酸特比萘芬乳膏1.25 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液5.0 mL，加無水乙醇適量，超聲，使溶解，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中放置10 min，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 空白基質(zhì)溶液 按處方量制備缺苯甲醇的空白基質(zhì)，精密稱取1.25 g置50 mL量瓶中，加無水乙醇適量，超聲，使溶解，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中放置10 min，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱：SE-54毛細管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；色譜柱升溫程序：初始100 ℃，維持3 min，以10 ℃/min的速率升至200℃后，保持2 min，再以40 ℃/min升至250 ℃，保持10 min；進樣口溫度：200 ℃；FID檢測器溫度：250 ℃；載氣：高純N2，流速30 mL/min；進樣量：1.0 μL；按上述色譜條件進行測定，結(jié)果樣品中各色譜峰均達到基線分離，苯甲醇峰與苯甲酸甲酯的保留時間(tR)分別約為5.3和6.4，分離度為16.8，空白未加內(nèi)標的基質(zhì)溶液在與苯甲醇、苯甲酸甲酯相同位置處無干擾峰，表明樣品中其他成分對苯甲醇與苯甲酸甲酯的測定無干擾，見圖1。

A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.空白基質(zhì)溶液；D.及內(nèi)標溶液；1.苯甲醇；2.苯甲酸甲酯

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密量取上述苯甲醇標準儲備液一定量，置于50 mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液5.0 mL，用無水乙醇稀釋至刻度，配制成濃度為0.1001, 0.2003, 0.3004, 0.5006, 1.0013mg/mL系列標液。按上述色譜條件，進樣1 μL，記錄色譜圖，以苯甲醇濃度為橫坐標(X)，苯甲醇峰面積與內(nèi)標峰面積的比值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，進行回歸分析，得回歸方程Y=2.4287X-0.0042,r=1。結(jié)果表明，苯甲醇濃度在0.1001～1.0013 mg/mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液(苯甲醇、苯甲酸甲酯濃度分別為0.5006,0.5002 mg/mL)1 μL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，苯甲醇與內(nèi)標峰面積比的RSD為0.45%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗 精密稱取同一試樣(批號：121101)6份，每份1.25 g，制備成供試品溶液，按上述色譜條件，分別進樣1 μL，記錄色譜圖，計算苯甲醇的含量(標示量%)，測定苯甲醇平均含量為2.00%，RSD為0.65%(n=6)。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取樣品(批號：121101)制備成供試品溶液，在室溫下放置，于0 ，2 ，4 ，6 ，8 ，10 ，12 h進樣1 μL，記錄色譜峰面積，所得苯甲醇峰面積與內(nèi)標峰面積比的RSD為0.6%，表明供試品品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=3)

2.3.5 回收率試驗 精密稱取不含苯甲醇的鹽酸特比萘芬乳膏空白基質(zhì)1.25 g，置50 mL容量瓶中，一式9份，以3份為一組，分別精密加入苯甲醇標準儲備液(苯甲醇濃度為5.006 mg/mL)4.0，5.0，6.0 mL，制備成低(80%)、中(100%)、高(120%)三種濃度的供試品溶液，進樣1 μL，計算苯甲醇回收率，結(jié)果見表1。

2.3.6 樣品測定 應(yīng)用所建立的分析方法，對3批鹽酸特比萘芬乳膏樣品進行分析，每批樣品平行制備2份供試品溶液，計算3批樣品中苯甲醇含量。結(jié)果批號為121101，121102，121103的鹽酸特比萘芬乳膏中苯甲醇的含量分別為2.00%，2.02%，1.99%。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 本實驗根據(jù)苯甲醇的性質(zhì)和鹽酸特比萘芬乳膏基質(zhì)的特點，選用弱極性的SE-54毛細管柱(5%二苯基-95%聚二甲基硅氧烷)，采用程序升溫，200 ℃的進樣口溫度和250 ℃的檢測器溫度。由于乳膏基質(zhì)中成分復(fù)雜，難揮發(fā)物較多，本實驗將鹽酸特比萘芬乳膏基質(zhì)中的所有成分按該色譜條件進樣分析，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)成分中的甘油峰出現(xiàn)在溶劑峰與苯甲醇峰之間，其他基質(zhì)成分峰均在目標色譜峰之后，故在目標色譜峰出完后，保持數(shù)分鐘，再以40 ℃/min升至250 ℃，保持10 min，揮出殘留組分，以免影響下一樣品的分析。

3.2 溶劑的選擇 因苯甲醇能與無水乙醇混溶，且在實驗中發(fā)現(xiàn)在樣品取樣量下，鹽酸特比萘芬乳膏中各組分均能溶于無水乙醇，同時無水乙醇無毒、價廉，故選用無水乙醇作為溶劑。

3.3 內(nèi)標物質(zhì)的選擇 試驗曾將乙二醇、環(huán)己醇和苯甲酸甲酯作為內(nèi)標進行實驗，根據(jù)保留時間、峰面積和分離度等因素，最終選擇苯甲酸甲酯作為內(nèi)標物質(zhì)。

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[2]王愛平，李若瑜，曾凡欽，等. 1%鹽酸特比萘芬軟膏治療淺部真菌病隨機雙盲對照多中心臨床試驗[J]. 臨床皮膚科雜志，2001,30(4)：247.

[3]王恂，曾躍斌，許金華. 1%鹽酸特比萘芬乳膏治療淺部真菌病臨床觀察[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2007,17(8):978.

[4]田富饒，王旭強，鄭瀚.高效液相色譜-紫外檢測器法測定化妝品中的苯甲醇[J]. 化學分析計量，2011,20(5)：63-65.