斜脈暗羅莖提取物對(duì)S180荷瘤抗腫瘤作用及其機(jī)制研究*

★ 熊躍 周軍 王杰 吳興國(guó)

(南昌市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 江西 南昌 330003)

近年來(lái)，中醫(yī)藥治療腫瘤的研究取得了較快發(fā)展，中藥治療惡性腫瘤，無(wú)論是在減輕臨床癥狀、提高生存質(zhì)量、防止復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、延長(zhǎng)生存期，還是在與放化療配合、增效減毒等方面都呈現(xiàn)出很好的效果[1]。因而中藥成為當(dāng)前抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。

斜脈暗羅(Polyalthia. plagioneura)隸屬番荔枝科暗羅屬植物，系我國(guó)特有種類植物，主要分布于云南、廣東、廣西南部及海南[2]。民間常用于治療氣滯腹痛、痛經(jīng)、梅核氣等疾病。本研究采用S180荷肉瘤小鼠作為研究對(duì)象，旨在探討斜脈暗羅莖提取物對(duì)S180荷廇小鼠對(duì)胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、腫瘤抑制率的影響，并探討其抗腫瘤作用效果及可能的機(jī)制，為進(jìn)一步研究斜脈暗羅抗腫瘤作用的化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)奠定基礎(chǔ)，為最終將其開發(fā)成抗腫瘤藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 提取與分離 取陰干的斜脈暗羅莖磨成粗粉，用95%的乙醇回流提取3次。提取液合并，減壓蒸餾，干燥得浸膏。浸膏分別用氯仿、乙酸乙酯、水飽和正丁醇各萃取3次。得斜脈暗羅莖氯仿部位浸膏，乙酸乙酯部位得浸膏和正丁醇部分浸膏。乙酸乙酯浸膏用于本實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前用N-二甲基甲酰胺溶解，吐溫-80助溶后，用生理鹽水稀釋至所需濃度備用。

1.2 S180荷瘤小鼠模型建立 選擇清潔級(jí)昆明小鼠48只，18～22g，雌雄各半。S180瘤細(xì)胞株從中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥研究所購(gòu)進(jìn)后傳代。將已接種7天腫瘤生長(zhǎng)良好的S180荷腹水瘤小鼠，頸椎脫臼處死，抽吸乳白色的濃稠腹水用無(wú)菌生理鹽水以1∶4的比例稀釋成細(xì)胞懸液，用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，苔盼蘭染色，檢測(cè)活細(xì)胞率﹥95%，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL。于小鼠左前肢腋窩處皮下注射0.2mL S180細(xì)胞懸液，建立S180荷瘤小鼠模型。

1.3 分組與給藥 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成：正常(生理鹽水)對(duì)照組、溶劑(N-二甲基甲酰胺)對(duì)照組、模型組、0.1 mg·kg-1的斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物組、0.2 mg·kg-1的斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物組和0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物組。正常對(duì)照組不做任何處理，其余各組從接種腫瘤后第二天開始，模型組給予PBS緩沖液灌胃0.1mL/10g；溶劑對(duì)照組給予溶劑0.1mL/10g灌胃；藥物組分別給予0.1、0.2、0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物灌胃，連續(xù)給藥7 d。

1.4 脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腫瘤指數(shù)及抑瘤率的測(cè)定 末次給藥后，小鼠禁食12h，頸椎脫臼處死，稱重，剖開胸腔，迅速剝?nèi)∧[瘤、胸腺、脾臟，吸水紙吸干組織上的水分，電子天平稱重。計(jì)算脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腫瘤指數(shù)及抑瘤率。計(jì)算公式如下：臟器指數(shù)(mg/g)=臟器質(zhì)量(mg)/小鼠體重(g)；腫瘤指數(shù)(mg/g)=腫瘤質(zhì)量(mg)/小鼠體重(g)；抑瘤率=(溶劑對(duì)照組腫瘤平均質(zhì)量-給藥組腫瘤平均質(zhì)量)/ 溶劑對(duì)照組腫瘤平均質(zhì)量×100%。

2 結(jié)果

2.1 斜脈暗羅莖提取物對(duì)小鼠胸腺重量和胸腺指數(shù)的影響 研究表明0.2、0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖提取物能顯著增加小鼠胸腺重量和胸腺指數(shù)。結(jié)果見表1。

2.2 斜脈暗羅莖提取物對(duì)小鼠脾臟重量和脾指數(shù)的影響 研究表明0.2、0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖提取物能顯著增加小鼠脾臟重量和脾指數(shù)。結(jié)果見表2。

表1 對(duì)小鼠胸腺重量和胸腺指數(shù)的影響

與溶劑對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01。

表2 對(duì)小鼠脾臟重量和脾指數(shù)的影響

與溶劑對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01。

2.3 斜脈暗羅莖提取物對(duì)小鼠肉瘤細(xì)胞S180抑制率的影響 研究表明0.2、0.4 mg·kg-1的斜脈暗羅莖提取物能顯著減少小鼠瘤體重量，最高抑瘤率為43.9%。結(jié)果見表3。

表3 對(duì)小鼠肉瘤細(xì)胞S180抑制的影響

與溶劑對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

張園[14]，王吉鴻[15]，李小寶[16]等報(bào)道暗羅屬植物具有明顯的抗腫瘤作用，暗羅屬植物對(duì)人肺腺癌細(xì)胞(SPC-A-1)和人胃癌細(xì)胞(SGC-7901)細(xì)胞具有明顯活性。本文主要報(bào)道斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物對(duì)S180荷瘤抗腫瘤作用的及機(jī)制研究。我們采用制備S180荷瘤小鼠動(dòng)物模型，于接種腫瘤后第2日始隔日腹腔注射斜脈暗羅莖提取物溶液，給藥7天后，觀察小鼠胸腺、脾、腫瘤的重量及胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、腫瘤指數(shù)等指標(biāo)。研究結(jié)果顯示：0.2和0.4mg·kg-1·d-1的斜脈暗羅莖提取

物能明顯的增加小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)，且能明顯的緩慢的腫瘤生長(zhǎng)，使腫瘤重量的明顯降低，腫瘤縮小，最高抑瘤率達(dá)43.9%。說(shuō)明斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物能明顯抑制S180荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)。斜脈暗羅莖乙酸乙酯提取物能增強(qiáng)正常小鼠的非特異性免疫功能和細(xì)胞免疫功能及在體外能抑制小鼠肉瘤細(xì)胞S180的增殖，其作用機(jī)制可能是通過(guò)增強(qiáng)荷瘤小鼠自身免疫功能來(lái)實(shí)現(xiàn)。

[1]于海濤, 張 巍, 于英君, 等. 中藥抗腫瘤作用機(jī)制的研究[J]. 中醫(yī)臨床研究, 2010, 8(2): 88-90.

[2]吳德鄰．海南及廣東沿海島嶼植物名錄[M]. 北京：科學(xué)出版社，1994：9.

[3]張園，王菁，劉冰晶，等.海南四種暗羅屬植物揮發(fā)油對(duì)三種癌細(xì)胞的體外增殖抑制作用[J]. 山東醫(yī)藥,2011,51(15):62-64.

[4]王吉鴻.沙煲暗羅根化學(xué)成分及藥理活性研究[D]. ?？冢汉Ｄ蠋煼洞髮W(xué),2012.

[5]李小寶.海南暗羅根化學(xué)成分及其藥理活性研究[D]. ?？冢汉Ｄ蠋煼洞髮W(xué),2012.