淫羊藿配方顆粒的提取工藝研究

★ 張雪杰 龔千鋒 胡昌江 周一帆

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330006; 2.成都中醫(yī)藥大學(xué) 成都 611137)

中藥配方顆粒是用符合炮制規(guī)范的優(yōu)質(zhì)中藥飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代制藥技術(shù)提取濃縮而成的單味顆粒。其性味、功效與原生藥一致，供中醫(yī)臨床配方使用，具有質(zhì)量穩(wěn)定、療效可靠、不需煎煮、直接沖服、服用量少、衛(wèi)生安全、攜帶和儲(chǔ)存方便等優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái)，中藥配方顆粒作為對(duì)傳統(tǒng)中藥飲片應(yīng)用形式的突破越來(lái)越受到認(rèn)可。

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿Epimediumbrevi-cornuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim、或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。性溫，味辛，甘。歸腎、肝經(jīng)。具有補(bǔ)腎陽(yáng)，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕的作用。用于腎陽(yáng)虛衰，陽(yáng)痿遺精，筋骨痿軟，風(fēng)濕痹痛，麻木拘攣等癥。[1]現(xiàn)代研究證實(shí)，淫羊藿有效成分為總黃酮，其中淫羊藿苷是總黃酮的主要成分。[2-5]目前對(duì)淫羊藿的研究報(bào)道多在化學(xué)成分和藥理作用等方面，而對(duì)其制成的單味中藥配方顆粒的研究尚未報(bào)道，因此本實(shí)驗(yàn)以淫羊藿苷和總黃酮含量、收膏率為指標(biāo)，對(duì)其配方顆粒的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，為淫羊藿配方顆粒生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Agilent 1200S，四元泵，)，KQ-300E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，BP-61電子天平(十萬(wàn)分之一，德國(guó)Sartorius)，ZDHW調(diào)溫電熱套(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)，756PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海洪紀(jì)儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥 淫羊藿苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所 批號(hào)：110737-200415)；乙腈(色譜純，美國(guó)Tedia公司)，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。 淫羊藿藥材購(gòu)于成都荷花池藥材市場(chǎng)，經(jīng)胡昌江教授鑒定為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.的干燥莖、葉。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 正交設(shè)計(jì) 淫羊藿苷為黃酮類成分，有良好的水溶性，所以可以用水作為提取溶劑。經(jīng)預(yù)試驗(yàn)，根據(jù)影響提取的主要因素，選擇加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)作為考察因素，以淫羊藿苷和總黃酮含量、藥材出膏率為考察指標(biāo)，按L9(34)表進(jìn)行正交試驗(yàn)。因素水平見(jiàn)表1。

表1 因素水平

2.2 淫羊藿苷含量的考察

2.2.1 樣品溶液的制備 按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)安排實(shí)驗(yàn)(見(jiàn)表1)，分別稱取淫羊藿飲片9份，每份20 g。按正交試驗(yàn)方案規(guī)定的加水量，提取時(shí)間，提取次數(shù)進(jìn)行回流提取，煎煮后藥液合并過(guò)濾并定容至500mL，搖勻。精密吸取10mL濃縮藥液至25mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得樣品溶液。吸取5mL樣品溶液，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，棄去初濾液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取淫羊藿飲片適量，粉碎，取粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)1小時(shí)，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：： Diamonsil C18 色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；G1314B型VWD紫外檢測(cè)器(美國(guó)Agilent)，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70)，流速1mL/分。柱效：按照淫羊藿苷峰計(jì)算理論塔板數(shù)不應(yīng)低于1 500。

線性關(guān)系的考察 精密量取淫羊藿苷對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、14 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，并以峰面積值(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=1253.4X+ 9.859 1，r=0.999 7。結(jié)果表明，在0.200 8-1.405 6 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.3 出膏率的考察

精密吸取9次正交試驗(yàn)所得提取液各10mL，分別置于已經(jīng)經(jīng)過(guò)干燥恒重的蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)水分至恒重得到干浸膏，計(jì)算出膏率。

2.4 總黃酮含量的考察

2.4.1 供試品溶液的制備 精密量取淫羊藿苷轉(zhuǎn)移率測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液1mL，置100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.4.3 測(cè)定方法 以甲醇作為空白溶液，在270nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定對(duì)照品溶液與供試品溶液的吸光度，計(jì)算，即得。

線性關(guān)系考察 精密量取上述對(duì)照品溶液1.2，1.4，1.6，1.8，2.0mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述測(cè)定方法測(cè)定吸光度。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度的值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計(jì)算得回歸方程：Y=3.356 6X+0.056 6，r=0.999 1，結(jié)果表明，淫羊藿總黃酮在0.012-0.020mg/mL范圍內(nèi)吸光度與質(zhì)量濃度之間呈良好的線性關(guān)系。

2.4.4 樣品溶液的制備 精密量取淫羊藿苷轉(zhuǎn)移率測(cè)定項(xiàng)下的樣品溶液3mL，置100mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得樣品溶液。

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

采用加權(quán)評(píng)分法，按照淫羊藿苷含量、總黃酮含量和出膏率的權(quán)重比(4∶3∶3)計(jì)算綜合評(píng)分，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析

2.6 最佳工藝的確定 從上述結(jié)果分析可以看出，3個(gè)因素的影響大小依次為C>A>B，且A3>A2>A1，B1>B3>B2，C3>C2>C1，且因素A和因素C有顯著性差異，因素B無(wú)顯著性差異。從節(jié)約能耗和降低成本考慮，在保證提取充分的前提下，綜合分析各因素對(duì)淫羊藿苷和總黃酮含量、出膏率的影響，確定提取工藝為加12倍量水、煎煮提取3次、每次1小時(shí)。

為了驗(yàn)證所選條件的合理性和可行性，進(jìn)行了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)

淫羊藿苷平均含量為6.53mg/g，總黃酮平均含量為41.67 mg/g，平均出膏率為18.82%。結(jié)果表明，優(yōu)選的提取工藝基本可行。

3 結(jié)論與討論

經(jīng)過(guò)研究確定淫羊藿配方顆粒提取的最佳工藝為：A3B2C3，即加12倍量水、煎煮提取3次、每次1小時(shí)。實(shí)驗(yàn)證明該淫羊藿提取工藝穩(wěn)定合理，能有效地提取淫羊藿苷，且能適用于大生產(chǎn)，可作為淫羊藿配方顆粒的提取工藝。

黃酮類化合物是淫羊藿飲片中的重要成分，而淫羊藿苷又是總黃酮的主要成分，對(duì)心腦血管系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)、生殖和內(nèi)分泌系統(tǒng)有較好作用，還有抗腫瘤和抗炎等藥理作用，[6]且國(guó)家對(duì)中藥制劑的質(zhì)量等各方面要求也越來(lái)越高，因此本試驗(yàn)將淫羊藿苷和總黃酮含量、收膏率三項(xiàng)作為考察指標(biāo)更加具有可行性。

中藥配方顆粒作為飲片的發(fā)展，大多以水作為其提取溶劑，淫羊藿中的淫羊藿苷易溶于水，故以水作為溶媒將其制成中藥配方顆粒，既保證了傳統(tǒng)中藥以水煎煮的特點(diǎn)，又為生產(chǎn)節(jié)約了成本，值得推廣和應(yīng)用。

淫羊藿品種較多，《中華人民共和國(guó)藥典》(2010年版)規(guī)定的就有4種，經(jīng)過(guò)對(duì)幾種淫羊藿中淫羊藿苷的含量比較之后，發(fā)現(xiàn)淫羊藿植物中淫羊藿苷含量明顯高于其他幾種，大約為1.37%，且該淫羊藿植物在藥材市場(chǎng)較易購(gòu)買，故本實(shí)驗(yàn)選定淫羊藿這一品種進(jìn)行研究。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(2010年版一部)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：306.

[2]藺學(xué)燕，董傳海，李偉華，等.淫羊藿有效成分的藥理研究與臨床應(yīng)用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16(9)：917.

[3]李遇伯，孟繁浩，鹿秀梅，等.淫羊藿化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2005，30(8)：586-587.

[4]張明月，石進(jìn)校.淫羊藿屬植物研究進(jìn)展[J].吉首大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30(1)：108-109.

[5]韓廣軒，王麥莉，張軍東，等.淫羊藿化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2002，20(6)：359-360

[6]郭峰，趙納.淫羊藿藥理作用的研究現(xiàn)狀及展望[J].中國(guó)藥業(yè)，2007，16(24)：71