清咽口含片水提工藝的研究*

★ 韓越 劉順 范玲 周琴妹

(南京中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 南京 210029)

清咽口含片組方是江蘇省中醫(yī)院臨床經(jīng)驗(yàn)方，由白毛夏枯草、射干、玄參等六味中藥組成，具有疏風(fēng)解毒、宣肺利咽、涼血祛癬、化痰散結(jié)之功效，臨床上用于治療急慢性咽炎。方中白毛夏枯草為君藥，其主要有效成分為乙酰哈巴苷。[1]本研究采用單因素考察和正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法，以浸出物及乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，優(yōu)選出最佳水提工藝條件。結(jié)果表明，該方法穩(wěn)定、可行，適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。

1 材料

1.1 儀器與設(shè)備 Waters e2695型高效液相色譜儀，2998PDA檢測器(美國Waters公司)；BP-211D型電子分析天平(德國賽多利斯公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)；101-1A型數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海滬南科學(xué)儀器聯(lián)營廠)。

1.2 試藥 白毛夏枯草等飲片均購于安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司，均符合2010版《中華人民共和國藥典》(一部)要求；乙酰哈巴苷對照品購自南京澤朗醫(yī)藥有限公司(批號：ZL20110303YX，含量98%)；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 浸泡時(shí)間的考察 根據(jù)《中華人民共和國藥典》(2010年版)附錄XA浸出物測定的方法，[2]分別考察0.5、1、1.5小時(shí)3個(gè)不同浸泡水平下的水溶性浸出物含量，浸出物結(jié)果如表1所示。

表1 浸出物含量測定結(jié)果

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，浸出物含量隨著浸泡時(shí)間的增加而增加，在浸泡時(shí)間1小時(shí)的時(shí)候溶劑濃度已經(jīng)達(dá)到飽和，繼續(xù)增加浸泡時(shí)間對浸出物含量的增加已經(jīng)沒有意義，故選定浸泡時(shí)間為1小時(shí)。

2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選定提取次數(shù)(A)、加水量(B)、提取時(shí)間(C)為考察因素，每個(gè)因素各設(shè)3個(gè)水平，以乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率作為考察指標(biāo)，[3]選用L9(34)正交表設(shè)計(jì)試驗(yàn)。見表2。

2.3 乙酰哈巴苷含量測定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱： Hedera-ODS-2 C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 um)；流動(dòng)相：乙腈(A)-水：0～35分鐘，9%A；35～40分鐘，9%～90% A；40～50分鐘，90% A；50～55分鐘，90%～9%A；55～60分鐘，9%A。流速：1 mL/分；柱溫：30 ℃；檢測波長：207 nm。乙酰哈巴苷能得到較好分離，分離度>1.5，且陰性無干擾。理論塔板數(shù)按乙酰哈巴苷峰計(jì)算不低于2 000。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取乙酰哈巴苷對照品9.10 mg，置于25 mL的容量瓶中，甲醇定容；精密量取1 mL置于5 mL的量瓶中，甲醇定容，搖勻即得(乙酰哈巴苷含量0.0728mg/mL)。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取上述對照品溶液3、5、10、15、25、35 μL進(jìn)樣，測定峰面積值，以乙酰哈巴苷的進(jìn)樣量(X，μg)對其峰面積值(Y)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=506529X+20502，r=0.9999，結(jié)果表明：在0.2184～2.548μg范圍內(nèi)，峰面積值與乙酰哈巴苷進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.3.4 供試品及陰性樣品溶液的制備[4]按處方比例稱取白毛夏枯草等飲片35 g共9份，合并醇提飲片射干藥渣，回流提取，濾過，合并濾液，精密吸取上述提取液5 mL置25 mL的容量瓶中，甲醇定容，搖勻，0.45 μm濾膜濾過，即得，色譜圖如圖2、3所示。

圖1 對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性樣品色譜圖

2.3.5 含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定水提液中乙酰哈巴苷的含量，計(jì)算其轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表2、3。

表2 水提工藝因素水平表

表3 正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)及極差分析結(jié)果

表4 乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率方差分析表

由表3可以看出，三因素的主次順序?yàn)锽、A、C，最佳提取工藝條件為A3B2C2；由表4可以看出，A、B因素對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率有顯著性影響(P<0.05)，C因素對乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率無顯著性影響(P>0.05)。從節(jié)能、節(jié)時(shí)的角度考慮，確定最佳提取工藝為A3B2C1，即10倍量的水提取3次，每次1小時(shí)。

結(jié)合單因素考察結(jié)果，水提的最佳工藝為10倍量的水，浸泡1小時(shí)后，提取3次，每次1 小時(shí)。

2.4 水提最佳工藝驗(yàn)證

按處方比例稱取白毛夏枯草等飲片3份，按水提單因素及正交實(shí)驗(yàn)所選擇的最佳工藝條件進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測定提取液中乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率(%)分別為：80.81、82.97、81.34，RSD=1.27%。結(jié)果表明優(yōu)選出的工藝穩(wěn)定性良好。

3 討論

白毛夏枯草中乙酰哈巴苷最大吸收波長為197nm，為紫外末端吸收。[3]若采用等度法測定，干擾很大，峰形差，分離度也不好；本研究采用梯度法測定，峰形較好，分離度也能達(dá)到要求。

白毛夏枯草等五味飲片水提試驗(yàn)表明：提取次數(shù)對乙酰哈巴苷的轉(zhuǎn)移率有顯著性影響。在優(yōu)選水提工藝中其它參數(shù)不變的情況下，提取3次和4次的乙酰哈巴苷轉(zhuǎn)移率(%)分別為82.05、83.41，結(jié)果差異也不大，所以從生產(chǎn)成本考慮，將水提的提取次數(shù)定為3次。

[1]孫建新，李志浩.白毛夏枯草的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，16(3)：102-104.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，附錄XA：附錄62.

[3]岳黨昆，丁廣治.HPLC測定筋骨草中乙酰哈巴苷的含量[J].中國中藥雜志，2006，31(4)：289-290.

[4]袁淑婧，范玲，周琴妹.清咽口含片醇沉工藝優(yōu)選[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2012，18(21)：25-27.