人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞源外泌體減緩衣霉素誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的研究

雷艷?詹世淮?施曉華?楊蘭?王佳偉　王水良?張勝行

【摘要】目的 研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞源外泌體（hUC-MSC-Exo）對(duì)衣霉素誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞（HKC）凋亡的作用。方法 利用衣霉素誘導(dǎo)HKC產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；蛋白免疫印跡法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)分子抗體葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、GRP94和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡；hUC-MSC-Exo經(jīng)分離與流式細(xì)胞術(shù)表面標(biāo)志物鑒定后，檢測(cè)不同濃度外泌體（0、40、60、80、100、150、200 μg/mL）對(duì)細(xì)胞活性的影響；resazurin法與流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)外泌體與衣霉素共處理組的細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果 1、2、4 μg/mL衣霉素均能抑制HKC的細(xì)胞增殖活性并呈濃度依賴性；不同濃度衣霉素均可誘導(dǎo)HKC細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，并明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。100、150、200 μg/mL外泌體能增強(qiáng)細(xì)胞增殖活性；與衣霉素2 μg/mL組相比，衣霉素2 μg/mL+外泌體150 μg/mL組細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng)；此外，衣霉素2 μg/mL組細(xì)胞凋亡率為（14.16±1.58）%，衣霉素2 μg/mL+外泌體150 μg/mL組細(xì)胞凋亡率為（8.18±0.58）%，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 間充質(zhì)干細(xì)胞源外泌體能明顯減緩衣霉素誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞凋亡。

【關(guān)鍵詞】?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；間充質(zhì)干細(xì)胞源外泌體；細(xì)胞凋亡；衣霉素；腎小管上皮細(xì)胞

Human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes protect renal tubular epithelial cells against tunicamycin-induced apoptosis Lei Yan△， Zhan Shihuai， Shi Xiaohua， Yang Lan， Wang Jiawei， Wang Shuiliang， Zhang Shenghang. △Fujian Key Laboratory of Aptamers Technology， the 900th Hospital of Joint Logistics Support Force， Fuzhou 350025， China

Corresponding author， Zhang Shenghang， E-mail： fzzyyzsh@126.com

【Abstract】Objective To investigate the role of human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes （hUC-MSC-Exo） in the tunicamycin-induced apoptosis of renal tubular epithelial cells （HKC）. Methods Endoplasmic reticulum stress （ERS） was induced by tunicamycin in HKC cells. Cell proliferation was detected by CCK-8 assay. The expression levels of ERS-related proteins of glucose-regulated protein 78 （GRP78）， GRP94 and C/EBP homologous protein （CHOP） were determined by Western blot. Cell apoptosis was assessed by flow cytometry. hUC-MSC-Exo were isolated and identified by flow cytometry. The effects of different concentrations of hUC-MSC-Exo （0， 40， 60， 80， 100， 150 and 200 μg/mL） upon cell activity were evaluated. Cell proliferation and apoptosis after co-treatment with hUC-MSC-Exo and tunicamycin were assessed by resazurin assay and flow cytometry. Results Treatment with 1， 2 and 4 μg/mL tunicamycin could inhibit the proliferation of HKC in a concentration-dependent manner. Different concentrations of tunicamycin could induce ERS and cell apoptosis in HKC. Treatment with 100， 150 and 200 μg/mL hUC-MSC-Exo could enhance cell proliferation. Compared with the 2 μg/mL tunicamycin group， cell proliferation was significantly increased in the?2 μg/mL tunicamycin and 150 μg/mL hUC-MSC-Exo co-treatment group （P < 0.05）. The apoptosis rate in the 2 μg/mL tunicamycin group was （14.16±1.58）%， and （8.18±0.58）% in the 2 μg/mL tunicamycin and 150 μg/mL hUC-MSC-Exo co-treatment group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion hUC-MSC-Exo can significantly alleviate HKC apoptosis induced by ERS.

【Key words】Endoplasmic reticulum stress； Mesenchymal stem cell-derived exosome； Apoptosis； Tunicamycin；

Renal tubular epithelial cell

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）是細(xì)胞應(yīng)激的一種重要方式，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中未折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白蓄積過(guò)多會(huì)導(dǎo)致ERS發(fā)生［1］。ERS參與了缺氧、腎缺血再灌注損傷（IRI）、腎毒性和炎癥等引起的急性腎損傷（AKI）發(fā)病機(jī)制，這些病理狀態(tài)均能誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生ERS，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［2-3］。衣霉素作為ERS的常用誘導(dǎo)劑，通過(guò)抑制N-糖基化并阻斷N-乙酰葡糖胺磷酸轉(zhuǎn)移酶，引起細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中未折疊蛋白的積累而誘導(dǎo)ERS［4-5］。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞源外泌體（hUC-MSC-Exo）攜帶著蛋白分子、mRNA、微RNA及長(zhǎng)鏈非編碼RNA等作為細(xì)胞與細(xì)胞通信之間的聯(lián)系［6］。研究表明，hUC-MSC-Exo通過(guò)抑制絲裂原活化蛋白激酶/細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（MAPK/ERK）信號(hào)通路的激活而抑制腎小管上皮細(xì)胞的凋亡［7］。MSC-Exo通過(guò)上調(diào)miR-146b的水平從而抑制NF-κB活性和減輕炎癥反應(yīng)，降低膿毒癥相關(guān)的AKI小鼠的血清肌酐和血尿素氮水平，抑制了腎小管細(xì)胞凋亡［8］。盡管MSC-Exo顯示出腎臟保護(hù)作用，但MSC-Exo對(duì)ERS狀態(tài)下腎小管上皮細(xì)胞的作用機(jī)制尚未闡明。本研究旨在研究ERS狀態(tài)下MSC-Exo對(duì)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

一、材 料

1. 試 劑

衣霉素購(gòu)自瑞士Enzo Life Sciences公司。DMEM購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司。胎牛血清、 抗體葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、GRP94、C/EBP同源蛋白（CHOP）、裂解的核糖聚合酶（c-PARP）、CD9、CD81、脂筏結(jié)構(gòu)蛋白1（Flotin1）、 β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）、兔抗IgG、鼠抗IgG均購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司。流式抗體CD63、CD9、CD81購(gòu)自Biolenged公司。二辛可寧酸（BCA） 蛋白定量試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo公司?；贚uminol 的增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（ECL）底物試劑蛋白顯色液購(gòu)自德國(guó)Advansta公司。異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的Annexin Ⅴ凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Biolenged公司。細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)MedChem公司。Adamas life刃天青（resazurin）細(xì)胞活性檢測(cè)染料購(gòu)自上海泰坦科技股份有限公司。ExoQuick-TC外泌體提取試劑盒購(gòu)自美國(guó)SBI公司。

2. 細(xì) 胞

人腎小管上皮細(xì)胞（HKC）細(xì)胞由中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所提供；hUC-MSC由福建省干細(xì)胞應(yīng)用工程技術(shù)研究中心提供，取P3代細(xì)胞進(jìn)行研究。

二、方 法

1. 細(xì)胞培養(yǎng)

hUC-MSC培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100 kU/L青霉素、100 kU/L鏈霉素的低糖培養(yǎng)基中；腎小管上皮細(xì)胞HKC培養(yǎng)于10%胎牛血清的DF12培養(yǎng)基中，細(xì)胞均置于含體積分?jǐn)?shù)為5%CO2、飽和濕度的37 ℃培養(yǎng)箱中。

2. 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞源外泌體的分離

按文獻(xiàn)［9］方法操作：取P3代的hUC-MSC，無(wú)血清純DMEM低糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)48 h后收集上清，經(jīng)3 000×g 15 min離心去除細(xì)胞碎片，按照ExoQuick-TC外泌體提取試劑盒的說(shuō)明書，將10 mL上清液與2 mL ExoQuick-TC試劑輕輕混合，于4℃過(guò)夜（至少12 h），在孵育期間離心管保持直立且不能搖動(dòng)。經(jīng)1 500×g離心30 min吸棄上清液，1 500×g離心5 min后，輕輕吸棄所有的液體，避免干擾到底部的外泌體沉淀。最后經(jīng)100～500 μL無(wú)菌的磷酸鹽緩沖液（PBS）重懸即可得到外泌體溶液。

3. 不同濃度衣霉素對(duì)細(xì)胞存活的影響

采用CCK-8法：HKC正常傳代培養(yǎng)，胰酶消化后鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞，5 000個(gè)/孔接種于96孔板，次日用含0.5%胎牛血清DMEM高糖培養(yǎng)基將衣霉素稀釋成不同的濃度（0、1、2、4 μg/mL），每孔100 μL，培養(yǎng)24 h，每孔加入10 μL的CCK-8溶液，將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱內(nèi)溫育2 h，將96孔板置于酶標(biāo)儀上，測(cè)定450 nm處吸光度值，以對(duì)照組為100%，則細(xì)胞存活率=（實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對(duì)照組吸光度值）×100%。

4. 不同濃度外泌體對(duì)細(xì)胞增殖的影響

每孔5 000個(gè)HKC接種于96孔板中，次日加入不同濃度［0（Con）、40、60、80、100、150、200 μg/mL］外泌體或2 μg/mL衣霉素作用24 h后，按照上述CCK-8法測(cè)定450 nm吸光度。

5. resazurin法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性

每孔5 000個(gè)HKC接種于24孔板中，次日實(shí)驗(yàn)分組為對(duì)照組、衣霉素2 μg/mL組、衣霉素2 μg/mL +外泌體150 μg組，作用24 h后，每孔加入30 μL的resazurin溶液，在CO2培養(yǎng)箱中孵育4 h后，在590 nm處測(cè)定熒光強(qiáng)度。

6. 蛋白免疫印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá)

各組收集的總蛋白用BCA法檢測(cè)總蛋白濃度，隨后取30 μg蛋白樣品進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），并轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜（PVDF）上。室溫下4%牛血清白蛋白BSA搖床上封閉1 h后，與1∶1 000稀釋的一抗4 ℃孵育過(guò)夜。三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽-吐溫20（TBST）洗膜3次，加入不同比例稀釋的辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗，室溫孵育1 h，經(jīng)TBST、PBS各洗膜3次后，加入ECL發(fā)光液孵育3 min后進(jìn)行曝光顯影。各蛋白表達(dá)量均以 β-actin為內(nèi)參。

7. 流式熒光激活細(xì)胞分選術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡

HKC經(jīng)不同濃度衣霉素或與外泌體聯(lián)合處理24 h，胰酶消化后收集細(xì)胞沉淀，經(jīng)預(yù)冷的細(xì)胞染色液洗滌2次，加入試劑盒中的結(jié)合液重懸至細(xì)胞濃度為1×107/mL。每管吸取100 μL的細(xì)胞懸液，加入5 μL FITC Annexin Ⅴ和10 μL碘化丙啶（PI）混勻后避光染色15 min。每管加入400 μL 結(jié)合液重懸后即上機(jī)檢測(cè)。同時(shí)設(shè)置正常組細(xì)胞不染色調(diào)電壓，經(jīng)FITC Annexin Ⅴ和PI分別單染的細(xì)胞調(diào)補(bǔ)償。

8. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外泌體表面標(biāo)志物

將提取的40 μL外泌體與5 μL硫酸鹽微珠室溫共孵育15 min，加入5 μL 100 μmol/L的BSA溶液，室溫孵育15 min。加入1 mL PBS孵育75 min，580×g離心5 min，棄上清液。將外泌體微珠（beads）的結(jié)合體中加入1 mL 100 mmol/L的甘氨酸溶液室溫孵育30 min，經(jīng)離心PBS洗滌2次后，重懸在350 μL PBS中，每管50 μL分裝于流式管中，加入CD9、CD63、CD81的一抗（1∶200）避光孵育45 min，離心重懸后立即上機(jī)檢測(cè)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0分析結(jié)果，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，每個(gè)濃度5個(gè)復(fù)孔，取各濃度的平均值進(jìn)行分析；熒光強(qiáng)度檢測(cè)重復(fù)3次，每次3個(gè)復(fù)孔；流式細(xì)胞術(shù)分析3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)，取各次實(shí)驗(yàn)的均值為最后結(jié)果。連續(xù)變量以表示，多組間比較使用單因素方差分析，多重比較使用Dunnett-t檢驗(yàn)。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、衣霉素誘導(dǎo)HKC細(xì)胞產(chǎn)生ERS并誘導(dǎo)凋亡

不同濃度衣霉素（0、1、2、4 μg/mL）作用HKC 24 h的細(xì)胞存活率總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （F = 26.650，P = 0.001），隨后使用Dunnett-t檢驗(yàn)顯示，1、2、4 μg/mL衣霉素均能抑制細(xì)胞增殖（P均< 0.05），且細(xì)胞存活率隨著衣霉素濃度增加呈下降趨勢(shì)（圖1A）。1、2、4 μg/mL衣霉素均能誘導(dǎo)ERS相關(guān)蛋白GRP78、GRP94和CHOP表達(dá)上調(diào)（圖1B），2、4 μg/mL衣霉素誘導(dǎo)下的細(xì)胞凋亡早期標(biāo)志物c-PARP蛋白表達(dá)增強(qiáng)（圖1C）；流式細(xì)胞術(shù)顯示，不同濃度衣霉素（0、1、2、4 μg/mL）作用HKC 24 h的細(xì)胞凋亡率總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 59.960，P < 0.001），且1、2、4 μg/mL衣霉素作用下HKC凋亡加重（P均< 0.05），其中1、2、4 μg/mL衣霉素作用于HKC 24 h的細(xì)胞凋亡率分別為（6.32±0.23）%、（11.29±2.89）% 和（18.03±0.21）%（圖1D）。

二、hUC-MSC外泌體的鑒定

蛋白免疫印跡分析顯示，常氧及缺氧培養(yǎng)條件下hUC-MSC外泌體均共表達(dá)CD9、CD81和Flotin1這些外泌體的代表性標(biāo)志物。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)來(lái)源于hUC-MSC外泌體中CD9（59.2%）、CD63（73.4%）和CD81（63.5%）均呈陽(yáng)性表達(dá)。見(jiàn)圖2。

三、hUC-MSC-Exo對(duì)HKC細(xì)胞增殖和凋亡的影響

不同組別作用HKC 24 h的細(xì)胞增殖活性總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （F = 449.200，P < 0.001），隨后使用Dunnett-t檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，加入40、60、80 μg/mL外泌體未明顯促進(jìn)HKC的細(xì)胞增殖活性，而加入100 μg/mL 外泌體處理的HKC細(xì)胞增殖活性為113.41%（P = 0.006）；經(jīng)150 μg/mL和200 μg/mL 外泌體處理HKC細(xì)胞增殖活性分別為122.51%（P = 0.004）和141.68%（P = 0.001），見(jiàn)圖3A。resazurin法檢測(cè)細(xì)胞活性結(jié)果表明，衣霉素2 μg/mL組的熒光強(qiáng)度低于對(duì)照組（P = 0.002），而衣霉素2 μg/mL +外泌體150 μg組的熒光強(qiáng)度高于衣霉素組（P =0.012），見(jiàn)圖3B、C。對(duì)照組、衣霉素2 μg/mL組、衣霉素2 μg/mL +外泌體150 μg組的細(xì)胞凋亡率分別為（0.18±0.01）%、（14.16±1.58）%、（8.18%±0.58）%，總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F = 152.000，P < 0.001），對(duì)照組與衣霉素2 μg/mL組、衣霉素2 μg/mL組與衣霉素2 μg/mL +外泌體150 μg組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均< 0.05），見(jiàn)圖3D。

討論

腎臟缺氧/缺血、重金屬毒性、抗癌免疫抑制藥及急慢性炎癥反應(yīng)等多種因素均是AKI的誘因，最終都會(huì)導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞損傷，嚴(yán)重的損傷誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡［10-11］。ERS和AKI之間的關(guān)系已被體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)所證實(shí)，AKI患者的腎活檢中，ERS標(biāo)志分子物表達(dá)與AKI的嚴(yán)重程度密切相關(guān)［12］。腎臟缺血再灌注后近端小管細(xì)胞Grp78蛋白表達(dá)快速增加，誘導(dǎo)未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）啟動(dòng)，在缺血損傷初期發(fā)揮保護(hù)作用，在嚴(yán)重ERS的狀態(tài)下通過(guò)CHOP促進(jìn)caspase的級(jí)聯(lián)反應(yīng)凋亡信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［1］。

MSC-Exo在治療AKI中起重要作用，然而，MSC-Exo對(duì)ERS誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究還很局限，因此研究MSC-Exo對(duì)ERS誘導(dǎo)的腎損傷的分子機(jī)制具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究中不同濃度的衣霉素（1、2、4 μg/mL）均能誘導(dǎo)HKC細(xì)胞產(chǎn)生ERS，相關(guān)的分子GRP78、GRP94和CHOP表達(dá)上調(diào)，并呈濃度依賴性；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果也表明ERS狀態(tài)下能誘導(dǎo)HKC細(xì)胞凋亡。hUC-MSC-Exo處理組能明顯增強(qiáng)細(xì)胞增殖活性；衣霉素誘導(dǎo)組細(xì)胞凋亡率為（14.16±1.58）%，而外泌體與衣霉素共處理組細(xì)胞凋亡率為（8.18±0.58）%，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。筆者所在課題組的前期研究表明，hUC-MSC-Exo能通過(guò)攜帶的miR-21抑制ERS和p38 MAPK的磷酸化，從而減緩ERS并明顯降低了胰島內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率［13］。本研究結(jié)果進(jìn)一步表明，hUC-MSC-Exo能明顯減緩衣霉素誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡，從而在AKI中發(fā)揮保護(hù)作用。

已有研究發(fā)現(xiàn)，MSC-Exo可通過(guò)激活A(yù)KT和ERK信號(hào)通路，減輕髓核細(xì)胞ERS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［14］。Buono等［15］以衣霉素誘導(dǎo)角膜內(nèi)皮細(xì)胞ERS為模型，MSC釋放的細(xì)胞外囊泡（EV）能夠誘導(dǎo)人角膜內(nèi)皮細(xì)胞中ERS相關(guān)基因ATF4、GRP78、XBP1、CHOP顯著下調(diào)，并抑制caspase-3蛋白的表達(dá)，其機(jī)制是通過(guò)MSC-EV中與ERS靶向性的微RNA分子，如miR-222-3p、miR-125b-5p、miR-21-5p轉(zhuǎn)移至角膜內(nèi)皮細(xì)胞而發(fā)揮潛在的治療作用。Xie等［16］的研究表明MSC-Exo中miR-31-5p負(fù)調(diào)節(jié)ERS分子ATF6，通過(guò)miR-31-5p/ATF6/ER應(yīng)激通路調(diào)節(jié)抑制椎體終板軟骨細(xì)胞凋亡和鈣化，這表明MSC-Exo在不同的ERS模型中均發(fā)揮一定的抗凋亡作用。本研究中，在ERS狀態(tài)下，MSC-Exo可以減緩衣霉素誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡，但外泌體發(fā)揮作用的信號(hào)通路及外泌體中的何種成分參與了ERS的調(diào)控將是我們下一步研究中要關(guān)注的重點(diǎn)。

綜上所述，本研究表明hUC-MSC-Exo能明顯抑制ERS狀態(tài)下腎小管上皮細(xì)胞凋亡。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ Shu S， Zhu J， Liu Z， et al. Endoplasmic reticulum stress is activated in post-ischemic kidneys to promote chronic kidney disease. EBioMedicine， 2018， 37： 269-280.

［2］ Sicari D， Delaunay-Moisan A， Combettes L， et al. A guide to assessing endoplasmic reticulum homeostasis and stress in mammalian systems. FEBS J， 2020， 287（1）： 27-42.

［3］ Maekawa H， Inagi R. Pathophysiological role of organelle stress/crosstalk in AKI-to-CKD transition. Semin Nephrol， 2019， 39（6）： 581-588.

［4］ Jackisch L， Murphy A M， Kumar S， et al. Tunicamycin-induced endoplasmic reticulum stress mediates mitochondrial dysfunction in human adipocytes. J Clin Endocrinol Metab， 2020， 105（9）： dgaa258.

［5］ Carlisle R E， Farooqi S， Zhang M C， et al. Inhibition of histone deacetylation with vorinostat does not prevent tunicamycin-mediated acute kidney injury. PLoS One， 2021， 16（11）： e0260519.

［6］ Phinney D G， Pittenger M F. Concise review： MSC-derived exosomes for cell-free therapy. Stem Cells， 2017， 35（4）： 851-858.

［7］ Liu B， Hu D， Zhou Y， et al. Erratum： Exosomes released by human umbilical cord mesenchymal stem cells protect against renal interstitial fibrosis through ROS-mediated P38MAPK/ERK signaling pathway. Am J Transl Res， 2021， 13（4）： 3921-3922.

［8］ Zhang R， Zhu Y， Li Y， et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cell exosomes alleviate sepsis-associated acute kidney injury via regulating microRNA-146b expression. Biotechnol Lett， 2020， 42（4）： 669-679.

［9］ Shahir M， Mahmoud Hashemi S， Asadirad A， et al. Effect of mesenchymal stem cell-derived exosomes on the induction of mouse tolerogenic dendritic cells. J Cell Physiol， 2020， 235（10）： 7043-7055.

［10］ Yan M， Shu S， Guo C， et al. Endoplasmic reticulum stress in ischemic and nephrotoxic acute kidney injury. Ann Med， 2018， 50（5）： 381-390.

［11］ 梁日英， 符暢， 梁華， 等. 利拉魯肽抑制ERS改善高脂飲食誘導(dǎo)的DN腎損害. 新醫(yī)學(xué)， 2019， 50（11）： 826-831.

［12］ Rojas-Franco P， Franco-Colín M， Torres-Manzo A P， et al. Endoplasmic reticulum stress participates in the pathophysiology of mercury-caused acute kidney injury. Ren Fail， 2019， 41（1）： 1001-1010.

［13］ Chen J， Chen J， Cheng Y， et al. Mesenchymal stem cell-derived exosomes protect beta cells against hypoxia-induced apoptosis via miR-21 by alleviating ER stress and inhibiting p38 MAPK phosphorylation. Stem Cell Res Ther， 2020， 11（1）： 97.

［14］ Liao Z， Luo R， Li G， et al. Exosomes from mesenchymal stem cells modulate endoplasmic reticulum stress to protect against nucleus pulposus cell death and ameliorate intervertebral disc degeneration in vivo. Theranostics， 2019， 9（14）： 4084-4100.

［15］ Buono L， Scalabrin S， De Iuliis M， et al. Mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles protect human corneal endothelial cells from endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis. Int J Mol Sci， 2021， 22（9）： 4930.

［16］ Xie L， Chen Z， Liu M， et al. MSC-derived exosomes protect vertebral endplate chondrocytes against apoptosis and calcification via the miR-31-5p/ATF6 axis. Mol Ther Nucleic Acids， 2020， 22： 601-614.

（收稿日期：2022-09-30）

（本文編輯：林燕薇）