針刺不同穴組對糖尿病周圍神經病變大鼠尾神經形態(tài)的影響

王朝輝,張嬌嬌,劉 暢,郄麗麗,韓東岳,逄紫千

(長春中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，長春 130117)

糖尿病周圍神經病變(diabetic peripheral neuropathy,DPN)一直以來都是糖尿病患者致殘的高危因素。研究表明針刺能夠明顯改善神經傳導功能[1]，對治療糖尿病周圍神經病變具有良好的療效[2-4]。本文通過針刺不同穴組治療糖尿病大鼠周圍神經病變，觀察不同穴組腧穴對糖尿病大鼠周圍神經的保護作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 選用清潔級健康雄性Wistar大鼠,6～8周齡，體質量(200±20) g，由吉林大學白求恩醫(yī)學部基礎醫(yī)學院實驗動物中心提供。隨機分為正常對照組、糖尿病模型組、西藥組、治療1組、治療2組和治療3組，每組10只。

1.2 主要試劑和器材 鏈脲佐菌素(STZ，美國Sigma)，彌可保(德國：拜耳醫(yī)藥分裝)，水合氯醛、無水乙醇、鹽酸(北京化工)，蘇木素及伊紅染液(鼎國)，二甲苯(國藥集團)，中性樹膠；血糖儀及試紙(臺灣：優(yōu)克糖)，毫針(華佗牌:0.25 mm×25 mm)、切片機(日本LE-ICA公司LKB-Ⅲ型)，載玻片、蓋玻片，光學顯微鏡及攝像系統(tǒng)(日本COIC 980153型)。

1.3 模型復制方法 分組后除對照組外各組大鼠禁食不禁水24 h后按60 mg/kg(體質量)腹腔內注射1%STZ檸檬酸緩沖液(濃度0.1 mmol/L，PH4.2～4.4)；正常對照組注射等劑量的檸檬酸緩沖液進行平行實驗，注射后給予正常飲食。72 h后尾靜脈采血測定血糖，血糖值≥16.7 mmol/L的大鼠為造模成功。

1.4 治療方法 治療組均采用針刺治療，參照《實驗針灸學》(中國中醫(yī)藥出版社,2007年第2版)的方法定位取穴，治療1組針刺肺俞、脾俞、腎俞，治療2組針刺足三里、三陰交、合谷,治療3組選取肺俞、脾俞、腎俞、足三里、三陰交、合谷。所有腧穴均雙側取穴，常規(guī)消毒，背俞穴毫針平刺6 mm，肢體穴位毫針直刺深度1～5 mm,行平補平瀉法后，針上通電，疏密波，中等強度刺激以局部微抽動為宜，每次30 min，隔日針刺1次，連續(xù)治療12周。西藥組給予彌可保喂服，1次/d，15 μg/次；對照組，糖尿病模型組給予與彌可保等量的生理鹽水喂服刺激，連續(xù)喂服12周。

1.5 血糖、體質量指標檢測 各組大鼠分別在造模前，造模72 h后，造模成功后治療12周進行血糖、體質量檢測。

1.6 神經組織病理形態(tài)觀察

1.6.1 取材 治療結束后各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，在麻醉狀態(tài)下解剖大鼠背側骶尾部，分離尾神經，取神經組織中段1 cm左右固定于4%多聚甲醛固定液中，用于HE染色。

1.6.2 神經組織HE染色 常規(guī)石蠟包埋，切片8 μm，脫蠟，HE染色。HE染色步驟：1)先將石蠟切片用二甲苯脫蠟(二甲苯各10 min/次，2次)。2)梯度酒精水化(100%、90%、75%、50%乙醇，各8 min)，在蒸餾水中浸泡5 min。3)0.01 mol/L PBS(pH=7.4)浸泡5 min/次，3次。4)蘇木素染色10～30 min。5)自來水稍洗去蘇木精液，洗3 s。6)1%鹽酸乙醇分化1～3 s。7)自來水洗15 s。8)0.5%氨水返藍15 s。9)自來水洗10 min。10)蒸餾水洗2 s。伊紅染色復染1～3 min。蒸餾水稍洗。梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。

2 結果

2.1 各組大鼠血糖水平比較 見表1。西藥組和治療組與模型組相比在治療后血糖水平均有所下降,治療12周后顯示血糖水平明顯下降，而治療3組較西藥組及治療1組、治療2組降糖療效更加明顯,差異具有顯著統(tǒng)計學意義。

2.2 各組大鼠體質量水平比較 見表2。與正常組比較各組大鼠體質量在造模72 h后明顯下降, 模型組大鼠體質量在成膜后下降趨勢明顯；與模型組比較西藥組及各治療組大鼠體質量下降水平均有所改善，差異具有統(tǒng)計學意義;而與西藥組、治療1組及治療2組比較，治療3組大鼠體質量下降水平明顯改善,差異具有統(tǒng)計學意義。

表1 各組大鼠血糖水平比較 mmol/L

注：與正常對照組比較,■P<0.05；與糖尿病模型組比較,#P<0.05；與治療3組比較,△P<0.01。

表2 各組大鼠體質量水平比較 g

注：與正常對照組比較,■P<0.05；與糖尿病模型組比較,#P<0.05；與治療3組比較,△P<0.05。

A：正常組；B：模型組；C：西藥組；D：治療1組；E：治療2組；F：治療3組圖1 各組大鼠尾神經縱切病理形態(tài)(HE×400)

2.3 尾神經HE染色結果 正常對照組大鼠尾神經纖維排列緊密，髓鞘形態(tài)正常，軸突清晰可見；糖尿病模型組尾神經纖維髓鞘形態(tài)明顯異常，神經纖維排列紊亂松散，髓鞘細胞減少且分布紊亂，部分軸突萎縮、變性；治療1組、治療2組及西藥組大鼠尾神經神經纖維髓鞘病理結構改變均有所改善，而治療3組大鼠尾神經神經纖維髓鞘病理形態(tài)變化較治療1組、治療2組及西藥組改善更加明顯(見圖1)。

3 討論

研究表明[5-7]，高血糖引起的神經脫鞘樣改變、周圍神經營養(yǎng)障礙以及周圍神經微血管病變是糖尿病周圍神經病變發(fā)生的重要病理基礎。其主要機制為代謝障礙，神經組織中果糖和山梨醇的含量增高，雪旺氏細胞中醛糖還原酶含量增高等所致的周圍神經損害[8-9]。針刺對神經組織具有很好的修復功能[10-12]。通過對比顯示，針刺背俞穴配合肢體遠端腧穴治療糖尿病周圍神經病變具有優(yōu)于單獨針刺這2組腧穴的神經修復療效，這種有效修復神經組織的作用與背俞穴配合體針的配伍協(xié)同作用密切相關。一方面，背俞穴位置與脊神經后根鄰近，針刺背俞穴可直接刺激感覺神經末梢、交感神經末梢以及神經伴隨的血管，通過反射作用于脊髓相應節(jié)段的植物神經中樞，調節(jié)臟腑功能，改善胰島功能及胰島素抵抗以快速降糖，降低神經組織中果糖和山梨醇和雪旺氏細胞中醛糖還原酶含量。另一方面，針刺合谷、三陰交、足三里等局部腧穴還可增加周圍神經血流量，改善微血管病變，提高內源性神經生長因子(NGF)等神經營養(yǎng)因子含量,促進軸突與髓鞘修復。

祖國醫(yī)學認為，糖尿病周圍神經病變的基本病機為氣陰虧虛、脈絡瘀阻，常累及肺、脾、腎三臟，治療選取肺俞、脾俞、腎俞等背俞穴調理臟腑功能，取合谷、三陰交、足三里等局部腧穴疏通經絡氣血，同時還可輔助調節(jié)臟腑功能,6穴的配伍療效明顯優(yōu)于單純選取背俞穴或肢體穴位，充分體現(xiàn)了中醫(yī)學辨證論治、整體調節(jié)的宏觀治療優(yōu)勢，突出腧穴配伍的重要性。

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